Page 35 - 《中国药房》2024年17期
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the  colon，  and  the  proportion  of  CD8 T  lymphocytes  in  the  spleen  were  reduced  significantly （P＜0.05）.  Body  weight，  SOD
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          levels，  expression  levels  of  occludin  and  ZO-1  in  the  colon，  proportions  of  CD3 T  and  CD4 T  lymphocytes，  and  the  CD4 /CD8
                                                                        +
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          ratio  in  the  spleen  were  significantly  increased （P＜0.05）；  the  abundance  of  Firmicutes，  Actinobacteria，  Akkermansia，  and
          Lactobacillus genera were increased， while Proteobacteria decreased； the microbial community structure tended towards that of the
          normal group. CONCLUSIONS KSCF alleviates UC by restoring intestinal microbial imbalance， enhancing immune response， and
          inhibiting colonic inflammatory responses， thereby improving intestinal barrier integrity.
          KEYWORDS    kushenol  F；  ulcerative  colitis；  immune  response；  gut  microbiota；  inflammation；  oxidative  stress；  16S  rDNA
          sequencing


              溃疡性结肠炎（ulcerative colitis，UC）是以慢性非特            光 吸 收 酶 标 仪（美 国 Molecular  Devices 公 司），Pan‐
          异性结肠炎症为特征的炎症性肠道疾病，主要发生在结                           noramic DESK 型病理切片扫描仪（匈牙利 3DHISTECH
          肠黏膜层，表现为结肠连续性炎症损害，常伴有黏液脓                           公司），Chemidoc XRS 型图像检测仪（上海珞雅实业有
          血便、腹痛等症状       [1―2] 。UC 发病机制尚不清楚，可能与              限公司），Fortessa X-20 型细胞仪（美国 BD Biosciences
          微生物紊乱、肠黏膜屏障功能障碍、氧化应激和炎症介                           公司），XCell SureLock Mini-Cell型电泳槽、CRYOSTAR
          质增加等因素共同作用有关            [3―4] 。目前，5-氨基水杨酸、         NX50型冰冻切片机[赛默飞世尔科技（中国）有限公司]，
          皮质类固醇等是治疗UC的常用药物               [5―6] ，但其存在疗效       NIKON ECLIPSE E100型正置光学显微镜、NIKON DS-
          不足、药物依赖性大、费用高等局限性，故寻找更安全、                          U3型成像系统（日本Nikon公司），DYY-6C型电泳仪（北
          有效的UC治疗药物具有重要意义。                                   京六一生物科技有限公司）。
              研究表明，肠道菌群在肠道黏膜形成屏障，从而调                         1.2 主要药品与试剂
                          [7]
          节肠道屏障通透性 。当肠道菌群失调时，固有层免疫                               KSCF 对照品（批号 22082401，纯度＞98%）购自成
          屏障失衡，大量有害因子渗透进入结肠固有层组织，激                           都普菲德生物科技有限公司；柳氮磺胺吡啶肠溶片（批
                                                    [8]
          活炎症细胞，产生大量活性氧，导致氧化应激增强 。而                          号09221203，规格0.25 mg）购自上海信谊天平药业有限
          氧化应激产生的大量促炎细胞因子和氧化分解产物可                            公司；葡聚糖硫酸钠（dextran sulfate sodium，DSS）（批号
          进一步加剧身体组织炎症 ，如白细胞介素 1β（interleu‐                   S7102）购自广州亿宁生物技术有限公司；NF-κB p65、磷
                                [9]
          kin-1β，IL-1β）等炎症因子通过激活核因子 κB（nuclear               酸化NF-κB p65（p-NF-κB p65）、核苷酸结合寡聚化结构
                                             [10]
          factor-κB，NF-κB）信号通路放大炎症反应 。在炎症环                   域样受体 3（NOD-like receptor family pyrin domain con‐
          境下，先天淋巴样细胞和抗原呈递细胞的异常激活和浸                           taining 3，NLRP3）单克隆抗体（批号分别为 16、19、6）均
          润会引起免疫应答失调，进而释放致病因子进一步破坏                           购自美国CST公司；兔源闭合蛋白（occludin）、紧密连接
                                    [11]
          肠道屏障完整性，导致UC恶化 。因此，通过改善肠道                          蛋白 1（zonula occludens-1，ZO-1）、β-肌动蛋白（β-actin）
          菌群组成及调节免疫应答可有效缓解UC。                                多克隆抗体、辣根过氧化物酶（HRP）标记的兔源二抗
              苦参醇 F（kushenol F，KSCF）为苦参中异戊烯基黄               （批号分别为00147267、00144045、00139414、23006498）
          酮代表性成分，具有抗炎、抗氧化和调节免疫等多种生                           均购自武汉三鹰生物技术有限公司；Percp/Cyanine 5.5
          物活性 。本课题组前期研究发现，KSCF 可通过抑制                         标记的CD3抗体、FITC标记的CD4抗体以及PE标记的
                [12]
          IL-1β、IL-6、肿瘤坏死因子 α（tumor necrosis factor α，       CD8 抗体（批号分别为 100217、116003、100707）均购自
          TNF-α）等炎症相关因子释放，减少结肠组织炎症损伤，                        美 国 Biolegend 公 司 ；BCA 蛋 白 定 量 试 剂 盒（批 号
                                        [12]
          从而改善 UC 小鼠症状和组织病变 。这提示 KSCF 有                      090321211027）购自上海碧云天生物技术有限公司；髓
          望成为UC的有效治疗策略。然而，KSCF对肠道菌群组                         过氧化物酶（myeloperoxidase，MPO）、脂多糖（lipopoly‐
          成及免疫应答的影响尚不清楚。因此，本研究首先采用                           saccharide，LPS）检测试剂盒（批号分别为230731-022M、
          网络药理学与分子对接预测 KSCF 干预 UC 的潜在靶                       230731-064M）均购自江苏酶免实业有限公司；超氧化物
          点，再以柳氮磺胺吡啶为阳性对照药物，观察 KSCF 对                        歧化酶（superoxide dismutase，SOD）、一氧化氮（nitrogen
          UC 小鼠免疫应答、结肠组织氧化应激及肠道微生物的                          monoxide，NO）检测试剂盒（批号均为20230731）均购自
          影响，并验证 KSCF 干预 UC 的潜在靶点，为挖掘 UC 潜                   南京建成生物工程研究所；苏木精-伊红（HE）、阿利新
          在治疗药物提供参考。                                         蓝-过碘酸雪夫（AB-PAS）染色试剂盒（批号分别为
          1 材料                                               20220321、20220316）均购自北京索莱宝科技有限公司；
          1.1 主要仪器                                           123-count eBeads 流式微球（批号 01123442）购自赛默飞
                                               ®
              本研究所用的主要仪器有：SpectraMax  Plus384 型              世尔科技（中国）有限公司；其余试剂均为分析纯。

          中国药房  2024年第35卷第17期                                              China Pharmacy  2024 Vol. 35  No. 17    · 2089 ·
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