Page 37 - 《中国药房》2024年17期

2.2.8 脾脏中T淋巴细胞亚群水平检测 3.1.2 GO功能和KEGG通路富集分析结果
每组取3只小鼠的脾脏，研磨完全后，使用全血及组 GO 功能分析结果显示，KSCF 在治疗 UC 的过程中
织稀释液冲洗筛网，收集细胞悬液。在细胞悬液中加 3 主要涉及以下生物学过程：肽基酪氨酸磷酸化、蛋白质
mL淋巴细胞分离液，在室温条件下离心20～30 min，弃 磷酸化、受体复合物、细胞质基质、蛋白酪氨酸激酶活
上清。将细胞重悬后置于流式管中，加入预先配制的一 性、非跨膜蛋白酪氨酸激酶活性等。
抗（CD3 抗体 0.5 μL、CD4 抗体 0.5 μL、CD8 抗体 0.5 KEGG通路富集分析结果显示，KSCF在UC的治疗
μL），室温条件下振荡混匀后避光孵育 30 min；加入 2 过程中主要参与前列腺癌、内分泌抵抗、肿瘤通路以及
mL 磷酸盐缓冲液清洗后，以 1 500 r/min 离心 5 min，弃 磷脂酰肌醇 3 激酶/蛋白激酶 B（phosphoinositide 3-ki‐
上清；加入适量磷酸盐缓冲液重悬后，使用 123-count nase/protein kinase B，PI3K/Akt）、NF-κB 等信号通路。
+
eBeads 流式微球进行细胞计数，检测脾脏中 CD3 T、 其中，前列腺癌和肿瘤通路主要靶点为基质金属蛋白酶
+
+
+
CD4 T、CD8 T淋巴细胞比例，并计算 CD4 /CD8 值。流 1、基质金属蛋白酶3、雷帕霉素靶蛋白等。
+
式细胞术数据采集使用 Fortessa 细胞仪，数据分析使用 由于KSCF主要应用目标是UC，故本研究选择与UC
FlowJo软件。 直接相关的PI3K/Akt、NF-κB等信号通路作为研究重点。
2.3 KSCF对UC小鼠肠道微生物的影响 3.2 KSCF与靶蛋白的分子对接验证结果
采用 16S rDNA 测序法进行分析。每组取 3 只小鼠 分子对接表明，KSCF 与 PI3K、Akt、NF-κB p65、
的结肠内容物送至苏州帕诺米克生物医药科技有限公 NLRP3 之间可形成氢键作用，对应的结合自由能分别
司进行高通量测序。测序引物序列为前引物序列 为 －8.9、－10.0、－10.3、－7.7 kcal/mol（1 kcal/mol＝
5′-ACTCCTACGGGAGGCAGCA-3′，后 引 物 序 列 4 184 J/mol）。结果提示，KSCF 与 NF-κB p65 蛋白的结
5′-GGACTACHVGGGTWTCTAAT-3′；测序区域为 16S 合最为稳定。
V3V4。基于 Illumina NovaSeq 6000 平台进行生物信息 3.3 KSCF 对 UC 小鼠体重、DAI 评分及结肠长度的
分析。 影响
2.4 统计学方法 与正常组比较，模型组小鼠精神状态不佳，皮毛较
采用SPSS 21.0软件对数据进行统计分析。满足正 暗，活动较少，体重显著降低（P＜0.05），DAI评分显著升
态分布的计量资料以x±s表示，多组间比较采用单因素 高（P＜0.05），结肠长度显著变短（P＜0.05）。与模型组
方差分析，进一步的组间两两比较采用 LSD-t 检验。检 比较，阳性对照组、KSCF 组小鼠精神状态、皮毛光泽以
验水准α＝0.05。 及活动量均改善，DAI 评分显著降低（P＜0.05）；KSCF
3 结果 组小鼠体重显著升高（P＜0.05），结肠长度显著增加
3.1 KSCF治疗UC的核心靶点预测结果 （P＜0.05）。结果见图1。
3.1.1 KSCF治疗UC的潜在靶点 3.4 KSCF 对 UC 小鼠血清中 LPS 以及结肠组织中
KSCF 和 UC 被鉴定的潜在作用靶点分别为 100 和 MPO、NO、SOD水平的影响
5 483 个。通过对比分析，KSCF 与 UC 的交集靶点共有 与正常组比较，模型组小鼠血清中LPS水平及结肠
63个。 组织中 MPO 水平均显著升高（P＜0.05）。与模型组比

22 3 6
正常组 a b
模型组
20 b 阳性对照组 a
2 4
KSCF组
体重/g 18 a DAI评分/分 b 结肠长度/cm
16 1 b 2

14
1 2 3 4 5 6 7 8 0 0
t/d Ⅰ Ⅱ Ⅲ Ⅳ Ⅰ Ⅱ Ⅲ Ⅳ
A.体重 B. DAI评分 C.结肠长度

Ⅰ Ⅱ Ⅲ Ⅳ
D.小鼠结肠照片
Ⅰ：正常组；Ⅱ：模型组；Ⅲ：阳性对照组；Ⅳ：KSCF组；a：与正常组比较，P＜0.05；b：与模型组比较，P＜0.05。
图1 KSCF对DSS诱导的UC小鼠模型体重、DAI评分及结肠长度的调节作用（x±s，n＝6）

中国药房 2024年第35卷第17期 China Pharmacy 2024 Vol. 35 No. 17 · 2091 ·