Page 92 - 《中国药房》2024年11期

2.4.2 标准曲线绘制 A2；提取回收率＝A1/A2×100%。另以纯水代替健康志愿
精密吸取空白乳汁48 μL至1.5 mL离心管中，加入 者空白乳汁，按“2.4.3”项下方法配制成低、中、高质量浓
2 μL 混合标准曲线工作溶液，涡旋混匀，得到标准曲线 度的质控样本，各质量浓度均平行制备 6 份，按“2.3”项
乳汁样本（贝他斯汀的质量浓度为 2、10、20、50、100、 下方法前处理后再按“2.1”项下条件进样检测，测得待测
200 ng/mL，羟氯喹的质量浓度为50、100、200、500、750、 化合物峰面积 A3；基质效应＝A2/A3×100%。同法测定
1 000 ng/mL），按“2.3”项下方法前处理后，按“2.1”项下 内标氯喹的提取回收率与基质效应。结果见表3。
条件进样分析。以待测化合物的质量浓度（X）为横坐 表3 人乳汁中贝他斯汀、羟氯喹和氯喹（内标）的提取
标、待测物与内标峰面积的比值（Y）为纵坐标，加权 回收率与基质效应
（W＝1/X）后进行回归分析，得回归方程：贝他斯汀为 化合物 理论质量浓度/（ng/mL） 提取回收率（n＝6） 基质效应（n＝6）
Y＝0.002 68X－0.001 71（r＝0.999），羟 氯 喹 为 Y＝ 平均值/% RSD/% 平均值/% RSD/%
贝他斯汀 5 96.97 1.75 91.45 7.58
0.001 98X－0.001 23（r＝0.998）；线性范围分别为 2～ 40 100.84 2.27 85.02 2.13
200、50～1 000 ng/mL，定量下限分别为2、50 ng/mL。 160 101.71 2.56 87.99 3.91
羟氯喹 150 99.47 2.19 98.70 4.37
2.4.3 准确度与精密度试验 400 99.16 2.27 95.57 2.01
精密吸取空白乳汁48 μL至1.5 mL离心管中，加入 800 101.60 1.23 96.98 3.42
2 μL低、中、高浓度质控工作液，按“2.4.2”项下方法制备 氯喹（内标） 400 97.47 1.09 98.98 5.24
定量下限、低、中、高质量浓度的质控乳汁样本（贝他斯 表3结果显示，在低、中、高质量浓度下，贝他斯汀和
汀质量浓度为 2、5、40、160 ng/mL，羟氯喹质量浓度为 羟氯喹的平均提取回收率分别为 96.97%～101.71%、
50、150、400、800 ng/mL），各质量浓度均平行制备 6 份， 99.16%～101.60%（RSD 均 ＜15%），基 质 效 应 分 别 为
按“2.3”项下方法前处理后，按“2.1”项下条件进样分析， 85.02%～91.45%、95.57%～98.70%（RSD均＜15%）。内
考察批内精密度，并以“测得浓度/真实浓度×100%”计 标 氯 喹 的 平 均 提 取 回 收 率 为 97.47%，基 质 效 应 为
算其准确度。采用同法在3 d内制备并测定3批次样品， 98.98%，且 RSD 均＜15%。上述结果表明，本研究的样
考察批间精密度和准确度。结果见表2。 品前处理方法适用于待测化合物的提取分析，且基质中
表2 人乳汁中贝他斯汀和羟氯喹的批内、批间准确度 的内源性物质对测定结果的影响不明显。
与精密度 2.4.5 稳定性试验
批内（n＝6） 批间（n＝3） 取空白乳汁，按“2.4.3”项下方法配制成低、中、高质
化合物 理论质量浓度/（ng/mL）
准确度/% 精密度/% 准确度/% 精密度/% 量浓度的质控乳汁样本，分别于室温放置6 h、－20 ℃反
贝他斯汀 2 109.45 4.58 111.39 3.14 复冻融3次、样品前处理后于自动进样器（15 ℃）中放置
5 105.71 2.74 107.74 2.15
40 100.23 2.31 101.43 1.16 24 h，每个条件下每个质量浓度平行制备6份，考察待测
160 98.72 1.94 100.47 5.54 化合物在上述各条件下的稳定性。结果见表4。
羟氯喹 50 98.86 2.66 91.83 6.63 表4 人乳汁中贝他斯汀与羟氯喹的稳定性
150 102.59 2.88 104.25 1.41
400 100.68 1.76 103.15 2.17 理论质量浓度/ 室温放置6 h 样品前处理后于自动进样 －20 ℃反复冻融3次
800 98.25 1.72 101.52 3.08 化合物 （n＝6） 器中放置24 h（n＝6） （n＝6）
（ng/mL）
表2结果显示，在低、中、高质量浓度下，贝他斯汀的 准确度/% 精密度/% 准确度/% 精密度/% 准确度/% 精密度/%
贝他斯汀 5 104.15 1.23 110.23 1.99 95.39 5.43
批内和批间准确度为 98.72%～107.74%，精密度均＜ 40 94.99 1.09 104.48 1.31 93.02 4.97
15%；羟氯喹的批内和批间准确度为98.25%～104.25%， 160 92.79 2.35 103.78 2.75 91.03 4.85
羟氯喹 150 96.25 2.52 96.81 1.54 90.62 5.55
精密度均＜15%；两种药物定量下限的准确度偏差均在 400 96.02 2.36 97.23 1.57 94.75 3.65
参考值的±20% 以内，精密度均＜20%，符合 2020 年版 800 93.29 2.11 95.45 1.75 89.50 4.08
《中国药典》（四部）通则“生物样品定量分析方法验证指 表4结果显示，在上述各条件下，贝他斯汀和羟氯喹
导原则” 要求。 低、中、高质量浓度质控乳汁样本的测得值与理论值的
[11]
2.4.4 提取回收率和基质效应试验 偏差均在±15%范围内，表明人乳汁中各待测化合物在
取空白乳汁，按“2.4.3”项下方法配制成低、中、高质 上述实验条件下稳定性良好。
量浓度的质控乳汁样本，各质量浓度均平行制备6份，按 2.5 临床应用
“2.3”项下方法前处理后，再按“2.1”项下条件进样分析， 本研究采集了1例患有荨麻疹、过敏性皮炎、唇炎且
测得待测化合物峰面积 A1；另取空白乳汁，加甲醇沉淀 同时服用贝他斯汀和羟氯喹的哺乳期患者信息。患者
蛋白后，于上清液中加入低、中、高质量浓度的质控工作 28岁，产后7个月，体重70 kg，给药方案为苯磺贝他斯汀
液，各质量浓度均平行制备6份，测得待测化合物峰面积 片10 mg，每日2次口服；硫酸羟氯喹片200 mg，每日2次

· 1366 · China Pharmacy 2024 Vol. 35 No. 11 中国药房 2024年第35卷第11期