Page 51 - 《中国药房》2024年10期

叶分别聚在一起，表明提取的主成分能反映出桑叶炮制 定、性质活泼、易受环境因素影响，可能由加入的炼蜜
[7]
前后的主要特征。 （外源性物质）产生热降解反应生成 ，并非桑叶原有成
t[3] 分，因此，本研究后续仅对异绿原酸C进行定量分析。
0 2 4 6 8 10 15 10
－2
－6
－10 －8 －4 5 0 2.5.1 线性关系考察
8 －5 －10 －15
6 8 精密吸取“2.1.1”项下异绿原酸C对照品溶液适量，
4 6
2 4 以 50% 甲醇稀释成质量浓度分别约为 0.02、0.04、0.08、
0 2 0.10、0.20 mg/mL 的对照品溶液，按“2.2”项下色谱条件
－2 0
－4 －2 进样测定，记录色谱图。以异绿原酸 C 的质量浓度为
－6 －4 横坐标（X）、峰面积为纵坐标（Y）进行线性回归。结果
－6
t[1] －8 －6 －4 t[2] 显示，异绿原酸 C 的回归方程 Y＝16 469 883.934 4X－
－2
0
2
4
6 8 10 5 0 －5 －10 49 854.327 9（R ＝0.999 0）。结果表明，异绿原酸C检测
2
10 15
图4 PCA三维得分图 质量浓度在0.02～0.20 mg/mL范围内线性关系良好。
2.4.2 OPLS-DA 2.5.2 精密度试验
将生桑叶、蜜炙桑叶中标定的共有峰峰面积导入 取“2.5.1”项下质量浓度为 0.08 mg/mL 的异绿原酸
SIMCA 14.1 软件进行 OPLS-DA。由 OPLS-DA 模型得 C 对照品溶液，按“2.2”项下色谱条件进样测定，记录峰
面积。结果显示，异绿原酸 C 峰面积的 RSD 为 1.95%
分图（图5）可知，生桑叶位于得分图的左侧，蜜炙桑叶位
于得分图的右侧，与 PCA 结果较为一致，表明其化学成 （n＝6），表明仪器精密度良好。
2.5.3 稳定性试验
分具有差异性。得分图中 X、Y 矩阵解释参数 RX ＝
2
取蜜炙桑叶（编号 M1），按“2.1.2”项下方法制备供
0.855、RY ＝0.968，预 测 能 力 参 数 Q ＝0.841，均 大 于
2
2
试品溶液，分别在室温下放置 0、3、6、9、12、24 h 时按
0.5，表明所建模型稳定且预测能力较强。修改假设检验
“2.2”项下色谱条件进样测定，记录峰面积。结果显示，
的次数为200次，得到矩阵解释参数R 和预测能力参数
2
异绿原酸 C 峰面积的 RSD 为 2.70%（n＝6），表明该溶液
Q 的截距值分别为 0.536 和－1.530，表明建立的 OPLS-
2
在室温下放置24 h内稳定性良好。
DA 模型没有出现过拟合现象，可以用于生桑叶和蜜炙
2.5.4 重复性试验
桑叶的差异性标志物分析。
取蜜炙桑叶（编号 M1），共 6 份，按“2.1.2”项下方法
生桑叶
8 蜜炙桑叶 制备供试品溶液，再按“2.2”项下色谱条件进样测定，记
6 4 录峰面积并采用标准曲线法计算异绿原酸 C 的含量。
OPLS-DA得分 －2 2 0 结果显示，异绿原酸 C 含量的 RSD 为 1.00%（n＝6），表
－4
－6
－8 明方法重复性良好。
－10 2.5.5 加样回收率试验
－5 －4 －3 －2 －1 0 1 2 3 4
t[1] 取已知异绿原酸C含量的蜜炙桑叶（编号M1），共6
图5 OPLS-DA得分图 份，按质量比1∶1加入异绿原酸C对照品，按“2.1.2”项下
结合变量重要性投影（variable importance in pro‐ 方法制备供试品溶液，再按“2.2”项下色谱条件进样测
jection，VIP）值分析（图 6），以 VIP 值＞1 为标准筛选桑 定，记录峰面积并计算加样回收率。结果显示，异绿原
[6]
叶蜜炙前后的差异性标志物 。结果显示，峰 2（VIP＝ 酸 C 的平均加样回收率为 102.62%（RSD＝1.74%，n＝
1.947 45）、H（5-羟甲基糠醛，VIP＝1.915 01）、1（VIP＝ 6），表明方法准确度良好。
1.914 45）、17（异绿原酸 C，VIP＝1.215 93）、16（VIP＝ 2.5.6 样品含量测定
1.014 39）为桑叶蜜炙前后的差异性标志物。 分别取生桑叶、蜜炙桑叶各 10 批，按“2.1.2”项下方
法制备供试品溶液，再按“2.2”项下色谱条件进样测定，
2.5
2.0 记录峰面积，采用标准曲线法计算异绿原酸 C 的含量。
1.5
VIP 1.0 每批样品平行测定3次，取平均值。结果显示，生桑叶中
0.5
0 异绿原酸C含量分别为0.115 2、0.095 4、0.081 7、0.049 9、
－0.5
－1.0 0.112 0、0.110 1、0.091 3、0.067 0、0.114 1、0.098 9 mg/g，
2 H 1 17 16 4 20 21 23 3 10 22 14 8 15 13 5 18 9 12 11 6 7 19
峰号 平均为 0.093 6 mg/g；蜜炙桑叶中异绿原酸 C 含量分别
图6 OPLS-DA的VIP得分图 为 0.161 3、0.114 4、0.099 1、0.081 0、0.191 6、0.149 2、
2.5 桑叶蜜炙前后差异性标志物的含量测定 0.140 4、0.096 5、0.115 1、0.129 9 mg/g，平均为 0.127 8
综合上述分析，筛选得到桑叶蜜炙前后 5 种差异性 mg/g。将含量测定结果导入SPSS 24.0软件进行独立样
标志物，并指认出了其中2种差异性标志物，分别为5-羟 本 t 检验分析，检验水准 α＝0.05。结果显示，蜜炙桑叶
甲基糠醛、异绿原酸 C。由于 5-羟甲基糠醛的结构不稳 中异绿原酸C平均含量较生桑叶显著升高（P＜0.05）。

中国药房 2024年第35卷第10期 China Pharmacy 2024 Vol. 35 No. 10 · 1201 ·