Page 50 - 《中国药房》2024年10期

RSD均不高于2.08%（n＝6），表明方法重复性良好。 槲皮苷（峰15）、异绿原酸C（峰17）、黄芩苷（峰19）、5-羟
2.3.4 指纹图谱的建立及共有峰的标定 甲基糠醛（峰H）。结果见图2。
分别取 10 批生桑叶（编号 S1～S10）、蜜炙桑叶（编 0.7
号 M1～M10），按“2.1.2”项下方法制备供试品溶液，再
0.6
按“2.2”项下色谱条件进样测定，记录色谱图。将得到的 混合对照品
0.5
图谱导入《中药色谱指纹图谱相似度评价系统（2012
版）》，分别以 S9 和 M9 样品的图谱为参照图谱，采用平 响应值/AU 0.4
[5]
均数法 ，设定时间宽度为0.1 min，进行多点校正和全谱 0.3 蜜炙桑叶对照指纹图谱R
峰匹配后生成对照色谱图R，最终分别建立生桑叶和蜜 0.2
炙桑叶的指纹图谱。结果显示，10批生桑叶指纹图谱共 0.1
标定 23 个共有峰，蜜炙桑叶指纹图谱共标定 24 个共有
0 生桑叶对照指纹图谱R
峰，两者共有峰的总面积均占样品总峰面积的 80% 以 0 10 20 30 40 50 60 70 80 90 100 110
上。结果见图1。 时间/min
3：新绿原酸A；4：绿原酸；5：隐绿原酸；6：咖啡酸；11：芦丁；13：异
2 200 槲皮苷；14：异绿原酸B；15：槲皮苷；17：异绿原酸C；19：黄芩苷；H：5-
2 000
1 800 羟甲基糠醛。
1 600 图2 混合对照品和蜜炙桑叶、生桑叶的对照指纹图谱
1 400
信号/mV 1 200 R的叠加图
1 000
800
600 将生桑叶、蜜炙桑叶指纹图谱中11个共有峰峰面积
400 导入Graph Pad Prism 8软件进行比较。结果显示，桑叶
200
0 蜜炙后峰 4、14、17 呈现出不同程度的增加趋势；峰 H 为
0 10 20 30 40 50 60 70 80 90 100 110
时间/min 桑叶蜜炙后的新成分，其峰面积增长率为100%；其余各
A.生桑叶
共有峰峰面积变化不明显或有不同程度减少。结果
2 600
2 400 见图3。
2 200
2 000 5×10 6
1 800 4×10 6 生桑叶
1 600
蜜炙桑叶
信号/mV 1 400 3×10 6
1 200
1 000
800 峰面积 2×10 6
600
400 6
200 1×10
0
0
0 10 20 30 40 50 60 70 80 90 100 110 H 3 4 5 6 11 13 14 15 17 19
时间/min 峰号
B.蜜炙桑叶 图3 桑叶蜜炙前后11个共有峰峰面积比较
图1 10批生桑叶和蜜炙桑叶的HPLC指纹图谱及其对
照指纹图谱R 2.4 桑叶蜜炙前后化学计量学分析
2.4.1 PCA
2.3.5 相似度评价 以生桑叶、蜜炙桑叶中标定的共有峰峰面积为变
分别以生桑叶、蜜炙桑叶的对照指纹图谱 R 为参
量，应用 SIMCA 14.1 软件进行 PCA，计算主成分特征
照，采用《中药色谱指纹图谱相似度评价系统（2012版）》
计算生桑叶和蜜炙桑叶的相似度。结果显示，10批生桑 值、方差贡献率及相关系数矩阵，并绘制 PCA 三维得分
图（图4）。结果显示，当提取到第4个主成分时，累计方
叶 的 相 似 度 分 别 为 0.995、0.997、0.994、0.974、0.996、
0.996、0.998、0.982、0.998、0.999，10 批蜜炙桑叶的相似 差贡献率达到 85.15%（第 1 主成分的方差贡献率为
37.45%，第2主成分的方差贡献率为23.50%，第3主成分
度分别为 0.990、0.996、0.990、0.971、0.993、0.991、0.999、
0.991、0.988、0.997，表明生桑叶和蜜炙桑叶各批次间质 的方差贡献率为 15.32%，第 4 主成分的方差贡献率为
量差异较小，整体质量相对稳定。 8.88%），且特征值＞1，表明前4个主成分可以反映生桑
2.3.6 共有峰指认及峰面积差异分析 叶、蜜炙桑叶中的大部分成分信息。相关系数矩阵结果
将生桑叶、蜜炙桑叶的对照指纹图谱R与混合对照 显示，峰13（异槲皮苷）、14（异绿原酸B）、15（槲皮苷）对
品色谱图中各色谱峰的保留时间进行比对，指认出生桑 第 1 主成分的贡献较大，峰 12、22、21 对第 2 主成分的贡
叶和蜜炙桑叶指纹图谱中的11个共有峰，分别为新绿原 献较大，峰 2、1、H（5-羟甲基糠醛）对第 3 主成分的贡献
酸 A（峰 3）、绿原酸（峰 4）、隐绿原酸（峰 5）、咖啡酸（峰 较大，峰17（异绿原酸C）、20、3（新绿原酸A）对第4主成
6）、芦丁（峰 11）、异槲皮苷（峰 13）、异绿原酸 B（峰 14）、 分的贡献较大。PCA三维得分图显示，生桑叶和蜜炙桑

· 1200 · China Pharmacy 2024 Vol. 35 No. 10 中国药房 2024年第35卷第10期