Page 49 - 《中国药房》2024年10期

叶的研究多集中在不同加工方式与药材品质之间的关 2 方法与结果
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系，以及对不同基原桑叶的质量评价 ，对于其炮制机制 2.1 溶液的制备
及蜜炙前后化学成分与药效变化的研究尚不充分。由 2.1.1 对照品溶液
于桑叶蜜炙前后的药理作用存在差异，为了准确寻找两 精密称取绿原酸、新绿原酸A、隐绿原酸、咖啡酸、5-
者的差异性标志物和药效物质基础，有必要对桑叶炮制 羟甲基糠醛、芦丁、槲皮苷、异槲皮苷、异绿原酸B、异绿
前后的化学成分进行系统分析。为此，本研究采用高效 原酸 C、黄芩苷对照品适量，分别置于 10 mL 容量瓶中，
液相色谱（HPLC）法建立桑叶蜜炙前后的指纹图谱，并 以 50% 甲醇溶解并定容，超声（功率 250 W，频率 40
运用主成分分析（principal component analysis，PCA）、正 kHz，下同）处理10 min，并用50%甲醇补足减失的质量，
交偏最小二乘-判别分析（orthogonal partial least squares- 制得相应单一对照品溶液。精密吸取上述各单一对照
discriminant analysis，OPLS-DA）等化学计量学方法，对 品溶液适量，混合，制得每 1 mL 含 68.18 μg 绿原酸、
指纹图谱中的多个成分信息进行分析，筛选影响其质量 63.64 μg 新绿原酸 A、63.64 μg 隐绿原酸、72.73 μg 咖啡
的差异性标志物，并对差异性标志物进行定量分析，旨 酸、70.45 μg 5-羟甲基糠醛、68.18 μg 芦丁、75.00 μg 槲
在为蜜炙桑叶的质量控制提供参考。 皮苷、63.64 μg异槲皮苷、50.00 μg异绿原酸B、56.82 μg
1 材料 异绿原酸C、68.18 μg黄芩苷的混合对照品溶液。
2.1.2 供试品溶液
1.1 主要仪器
分别取各批次生桑叶、蜜炙桑叶 50.0 g，精密称定，
本研究所用主要仪器有Waters e2695型HPLC系统
置于圆底烧瓶中，加 15 倍量水，浸泡 30 min，回流提取
（美国 Waters 公司）、KQ-250B 型超声波清洗器（昆山市
40 min；第 2 次加 10 倍量水，回流提取 25 min；合并 2 次
超声仪器有限公司）、RV8型旋转蒸发仪[艾卡（广州）仪
滤液，滤过，40 ℃减压浓缩，定容至1 000 mL，超声处理
器设备有限公司]、FA2104型十万分之一天平（上海舜宇
10 min，以水补足减失的质量。取上述溶液 25 mL，
恒平科学仪器有限公司）等。 60 ℃水浴蒸干，以50%甲醇溶解并定容，再次超声处理
1.2 主要药品与试剂
10 min，经0.45 μm微孔滤膜，滤过，即得各供试品溶液。
绿原酸对照品（批号A22GB158446）、新绿原酸A对
2.2 色谱条件
照 品（批 号 EJ27A029）、隐 绿 原 酸 对 照 品（批 号
采 用 Agilent TC-C18 色 谱 柱（250 mm×4.6 mm，5
EJ09A018）、咖啡酸对照品（批号P04M9F60454）、5-羟甲
μm），以乙腈（A）-0.04% 磷酸溶液（B）为流动相进行梯
基糠醛对照品（批号 H12M9Z61023）、芦丁对照品（批号
度 洗 脱（0～10 min，5%A→7%A；10～60 min，7%A→
D13HB202516）、槲皮苷对照品（批号 P17J6F2）、异槲皮
18%A；60～85 min，18%A→25%A；85～95 min，25%A→
苷对照品（批号 X29O11Y128907）、异绿原酸 B 对照品
37%A；95～105 min，37%A→60%A；105～115 min，
（批号DH15C231）、异绿原酸C对照品（批号EJ28A046）、 60%A→70%A）；流速为1.0 mL/min；进样量为10 μL；检
黄芩苷对照品（批号 P20A9F59353）均购自上海源叶生 测波长为310 nm；柱温为30 ℃。
物科技有限公司，纯度均大于 98.0%；乙腈、甲醇均为色 2.3 桑叶蜜炙前后指纹图谱的建立
谱纯，其余试剂均为分析纯；水为自制超纯水。 2.3.1 精密度试验
10 批生桑叶饮片经青岛大学附属医院药品调剂科 取生桑叶（编号S9），按“2.1.2”项下方法制备供试品
马大龙主管药师鉴定均为桑科植物桑 M.alba L. 的干燥 溶液，按“2.2”项下色谱条件连续进样测定 6 次，记录色
叶。蜜炙桑叶饮片参考2020年版《中国药典》（一部）蜜 谱图。结果显示，以芦丁为参照峰，计算得到各共有峰
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炙法 ，由本课题组所在实验室自行炮制，所得炮制品的 相对保留时间的 RSD 均不高于 0.07%，相对峰面积的
含水量均小于14%，符合药典规定。样品来源信息见表 RSD均不高于2.32%（n＝6），表明方法精密度良好。
1（编号 S1～S10 为生桑叶饮片，编号 M1～M10 为蜜炙 2.3.2 稳定性试验
桑叶饮片）。 取生桑叶（编号S9），按“2.1.2”项下方法制备供试品
表1 样品来源信息 溶液，于室温下放置 0、3、6、9、12、24 h 时按“2.2”项下色
编号 批号 来源 编号 批号 来源 谱条件进样测定，记录色谱图。结果显示，以芦丁为参
S1 A220803 安徽六安 M1 A220803 安徽六安 照峰，计算得到各共有峰相对保留时间的RSD均不高于
S2 221201 四川眉山 M2 221201 四川眉山 0.10%，相对峰面积的RSD均不高于2.74%（n＝6），表明
S3 C220090301 河北保定 M3 C220090301 河北保定
S4 221202 安徽亳州 M4 221202 安徽亳州 供试品溶液在室温下放置24 h内稳定性良好。
S5 221101551 广东惠州 M5 221101551 广东惠州 2.3.3 重复性试验
S6 220701 广西南宁 M6 220701 广西南宁 取生桑叶（编号 S9），共 6 份，按“2.1.2”项下方法制
S7 220950161 广东普宁 M7 220950161 广东普宁 备供试品溶液，再按“2.2”项下色谱条件进样测定，记录
S8 221201 安徽安庆 M8 221201 安徽安庆
S9 221201 广东广州 M9 221201 广东广州 色谱图。结果显示，以芦丁为参照峰，计算得到各共有
S10 20221201 河南南阳 M10 20221201 河南南阳 峰相对保留时间的RSD均不高于0.09%，相对峰面积的

中国药房 2024年第35卷第10期 China Pharmacy 2024 Vol. 35 No. 10 · 1199 ·