Page 56 - 《中国药房》2024年10期

（2）热稳定性：按“2.1”项下方法制备 Cur/mPEG- 至1.5 mL EP管中，同时取水400 μL为阳性对照溶液、生
PBLA 胶束溶液，按“2.2.6”项下方法制备 Cur 对照品溶 理盐水400 μL为阴性对照溶液；随后，各EP管中再分别
液。取上述2种溶液，置于85 ℃水浴中，分别于放置0、 加入2%红细胞悬液400 μL，于37 ℃恒温培养箱中孵育
1、1.5、2、3、4 h时按“2.2.4（2）”项下方法测定各溶液的A 2 h后，以1 500 r/min离心10 min，观察外观颜色并拍照，
值并以外标法计算Cur含量，再按“2.2.7（1）”项下方法计 取上清液按“2.2.4（2）”项下方法测定 A 值。与此同时，
算药物残留率，并绘制药物含量变化曲线。每样品平行 为了避免胶束本身颜色对结果的影响，取上述4个浓度
操作 3 次。结果（图 2B）显示，在 4 h 时，Cur 对照品降解 的 Cur/mPEG-PBLA 胶束溶液各 400 μL 至 1.5 mL EP 管
了73.44%，而Cur/mPEG-PBLA胶束仅降解了38.61%。 中，以水替代2%红细胞悬液，进行平行实验。按下式计
2.2.8 纳米胶束物理稳定性研究 算溶血率：溶血率（%）＝（At－Anc－As ）/（Apx－Anc ）×100%
（1）稀释稳定性：取 mPEG-PBLA 胶束溶液、Cur/ （式中，At为在测溶液 A 值，Anc为阴性对照溶液 A 值，Apx
mPEG-PBLA 胶束溶液各 1 mL，用水分别稀释 0、5、10、 为阳性对照溶液 A 值，As 为平行实验中相同浓度 Cur/
25、50、100 倍，采用激光粒度仪测定其粒径。每样品平 mPEG-PBLA胶束溶液A值）。外观观察结果（图4A）显
行操作3次。结果（图3A）显示，经稀释后，2种胶束的平 示，Cur/mPEG-PBLA 胶束溶液和阴性对照溶液都没有
均粒径均在±15 nm 内波动，表明胶束制剂经过稀释后 发生溶血现象；而阳性对照溶液呈橙红色，出现了溶血
仍具有良好的稳定性。 现象。溶血率检测结果（图 4B）显示，4 个浓度 Cur/
200 mPEG-PBLA胶束溶液 200 mPEG-PBLA胶束溶液（室温） mPEG-PBLA胶束溶液的溶血率均低于5%，表明该纳米
180 Cur/mPEG-PBLA胶束溶液 mPEG-PBLA胶束溶液（4 ℃）
Cur/mPEG-PBLA胶束溶液（室温）
[16]
160 Cur/mPEG-PBLA胶束溶液（4 ℃） 胶束静脉给药后不会引发溶血现象 。
140 150
120
粒径/nm 100 粒径/nm 100 0.25
80
0.20
60 0.15
40 50 溶血率/%
20 0.10
0 0 0.05
0 20 40 60 80 100 0 2 4 6 8 0
稀释倍数 时间/d 阳性 阴性 25 50 100 200 25 50 100 200
A.稀释稳定性 B.储存稳定性 对照 对照 Cur/mPEG-PBLA胶束
溶液 溶液 Cur/mPEG-PBLA胶束溶液（μmol/L） 溶液浓度/（μmol/L）
180
mPEG-PBLA胶束溶液 A.外观 B.溶血率（x±s，n＝3）
160 Cur/mPEG-PBLA胶束溶液
图4 纳米胶束的溶血实验结果
140
粒径/nm 120 2.4 纳米胶束的体外药效学研究
100
2.4.1 Cur/mPEG-PBLA胶束对ALD的预防作用
80
60 将 HepG-2、7702 细胞分为对照组、模型组、不同质
0 5 10 15 20 25 量浓度 Cur 对照品溶液组、不同质量浓度 Cur/mPEG-
时间/h
C.血浆稳定性 PBLA 组，每组设置 5 个复孔。各药物组细胞加入相应
图3 纳米胶束的物理稳定性实验结果（x±s，n＝3）
药液（质量浓度分别为1、2、4、8、10 μg/mL，以Cur计；按
（2）储存稳定性：取 mPEG-PBLA 胶束溶液、Cur/ 前期预实验结果设置，下同），对照组和模型组细胞加入
mPEG-PBLA 胶束溶液各 15 mL，分别于室温和 4 ℃下 等体积培养基，分别培养 24、48 h。随后，除对照组外，
储存，并于放置0、1、2、4、6、8 d时取样，采用激光粒度仪 其余各组细胞均加入终浓度为 400 mmol/L 的无水乙醇
测定其粒径。每样品平行操作3份。结果（图3B）显示， 干预12 h（造模方法参考相关文献 ，无水乙醇浓度和干
[17]
2 种胶束的粒径在上述储存条件下的变化不大，表明其 预时间均根据前期预实验确定，下同）以构建 ALD 模
在8 d内的储存稳定性良好。 型。收集各组细胞，以MTT法测定其存活率，实验重复
（3）血浆稳定性：取 mPEG-PBLA 胶束溶液、Cur/ 3次。采用Origin软件对数据进行统计分析，数据以x±
mPEG-PBLA胶束溶液各2 mL，置于含10%大鼠血浆的 s 表示，两组间比较采用 t 检验。检验水准 α＝0.05
PBS 2 mL中，在37 ℃下以100 r/min振摇孵育24 h，分别 （下同）。
于 0、1、2、4、8、12、24 h 时取样，采用激光粒度仪测定其 针对 HepG-2 细胞的实验结果（图 5A、5B）显示，预
粒径。每样品平行操作 3 次。结果（图 3C）显示，2 种胶 处理24 h时，对照组细胞的平均存活率为100.24%，模型
束的粒径变化不大，表明其血浆稳定性良好。 组细胞的平均存活率为 64.92%；与模型组比较，各药物
2.3 纳米胶束溶血实验 组细胞的存活率（1 μg/mL Cur/mPEG-PBLA 胶束组除
取Cur/mPEG-PBLA胶束溶液适量，用水稀释成25、 外）均有所提高，并有一定的浓度依赖趋势，但相同质量
50、100、200 μmol/L（以 Cur 计）。取上述样品各 400 μL 浓度的 Cur 对照品溶液组与 Cur/mPEG-PBLA 胶束组比

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