Page 45 - 《中国药房》2024年10期
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量的1、2倍,剂量参考前期预实验结果设置;以5%羧甲                         Prism 8.0软件作图。计量资料以x±s表示,多组间比较
          基纤维素钠溶液为溶剂,灌胃体积为10 mL/kg),对照组                      采用单因素方差分析,进一步两两比较采用LSD-t检验。
          和模型组小鼠灌胃等体积 0.5% 羧甲基纤维素钠溶液,                        检验水准α=0.05。
          每天1次,连续8周。                                         3 结果
          2.2 样本收集与小鼠体重、肝脏质量、肝脏指数检测                          3.1 水蛭对NAFLD小鼠体重、肝脏质量及肝脏指数的
              末次给药后,各组小鼠禁食12 h,于次日上午称重;                      影响
          腹腔注射 2% 戊巴比妥钠麻醉后摘除眼球取血,血样静                             与对照组比较,模型组小鼠的体重、肝脏质量、肝脏
          置 1 h 后,以 3 000 r/min 离心 15 min,分离上层血清,置           指数均显著升高(P<0.01);与模型组比较,水蛭低、高
          于-20 ℃冰箱中保存,备用。随后,处死各组小鼠,迅速                        剂量组小鼠的体重、肝脏质量、肝脏指数均显著降低
          取出肝脏,以 4 ℃生理盐水清洗,并用滤纸吸除多余水                        (P<0.01)。结果见表1。
          分,称定肝脏质量,计算小鼠的肝脏指数[肝脏指数                            表1 水蛭对 NAFLD 小鼠体重、肝脏质量及肝脏指数
         (%)=小鼠肝脏质量(g)/小鼠体重(g)×100%]。称定肝                          的影响(x±s,n=8)
          脏质量后,取一部分肝组织于 10% 甲醛中固定,用于苏                         组别           体重/g        肝脏质量/g       肝脏指数/%
          木精-伊红(HE)染色和油红 O 染色实验;其余肝组织以                        对照组        28.71±1.41    1.04±0.10    3.63±0.23
                                                              模型组        33.36±0.81 a  1.56±0.12 a  4.69±0.29 a
          液氮速冻后,置于-80 ℃冰箱中保存,备用。
                                                              水蛭低剂量组     29.59±1.42 b  1.09±0.10 b  3.69±0.30 b
          2.3 小鼠血清炎症相关因子及血脂水平检测                               水蛭高剂量组     29.64±0.96 b  1.06±0.04 b  3.59±0.06 b
              采用 ELISA 法检测。取“2.2”项下各组小鼠的血清                      a:与对照组比较,P<0.01;b:与模型组比较,P<0.01。
          样品,严格按照相应试剂盒说明书操作,使用酶标仪检                           3.2 水蛭对 NAFLD 小鼠血清炎症相关因子及血脂水
          测其炎症相关因子(NF-κB、IL-1β、IL-6、TNF-α)和血脂                平的影响
          指标(TC、TG、LDL-C、HDL-C)水平。                               与对照组比较,模型组小鼠血清NF-κB、IL-1β、IL-6、
          2.4 小鼠肝组织病理形态学观察                                   TNF-α和TG、TC、LDL-C水平均显著升高,HDL-C水平
              取“2.2”项下经 10% 甲醛固定的各组小鼠肝组织适                    显著降低(P<0.01);与模型组比较,水蛭低、高剂量组
          量,一部分经脱水、石蜡包埋后切片,进行HE染色,使用                         小鼠血清 NF-κB、IL-1β、IL-6、TNF-α 和 TG、TC、LDL-C
          显微镜观察其肝组织病理损伤情况;另一部分经OCT包                          水平均显著降低,HDL-C 水平均显著升高(P<0.05 或
          埋剂包埋后冷冻切片,进行油红 O 染色,使用显微镜观                         P<0.01)。结果见表2。
          察其肝组织脂质堆积情况。                                       3.3 水蛭对NAFLD小鼠肝组织病理形态学的影响
          2.5 小鼠肝组织中PPARγ、SIRT1蛋白表达检测                            HE 染色结果显示,对照组小鼠肝组织中肝细胞分
              采用Western blot法检测。取“2.2”项下各组小鼠冻                布均匀,肝小叶结构正常,肝索排列规整;模型组小鼠肝
          存的肝组织适量,加入 RIPA 裂解液,冷冻匀浆,于 4 ℃                     组织可见较多的脂肪空泡和炎症细胞浸润,肝索不清
          以 12 000 r/min 离心 15 min,取上清液并采用 BCA 法测            晰,肝小叶结构模糊;水蛭低、高剂量组小鼠的病理改变
          定蛋白浓度。蛋白经加热变性后,进行十二烷基硫酸                            均有所缓解,脂肪空泡数量明显减少,但仍有少量炎症
          钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳分离,并以湿转法转至聚偏二                           细胞浸润。油红O染色结果显示,模型组小鼠肝组织中
          氟乙烯膜上,用 5% 脱脂奶粉封闭 2 h;加入 PPARγ、                    的脂质堆积较对照组明显增加;而水蛭低、高剂量组小
          SIRT1、GAPDH一抗(稀释比例分别为1∶1 000、1∶1 000、              鼠肝组织中的脂质堆积明显减少,水蛭高剂量组更接近
          1∶10 000),于 4 ℃孵育过夜;以 TBST 洗膜 3 次,加入相              于对照组。结果见图1。
          应二抗(稀释比例为 1∶20 000),于室温孵育 1 h;以                    3.4 水蛭对NAFLD小鼠肝组织中PPARγ、SIRT1蛋白
          TBST洗膜3次,用特超敏ECL化学发光试剂盒显色、曝                        表达的影响
          光。以GAPDH为内参,使用Image J软件分析目的蛋白                          与对照组比较,模型组小鼠肝组织中PPARγ、SIRT1
          的表达水平(目的蛋白的表达水平=目的蛋白的条带灰                           蛋白的表达水平均显著降低(P<0.01);与模型组比较,
          度值/内参蛋白的条带灰度值)。                                    水蛭低、高剂量组小鼠肝组织中 PPARγ、SIRT1 蛋白的
          2.6 统计学方法                                          表 达 水 平 均 显 著 升 高(P<0.05 或 P<0.01)。 结 果
              采 用 SPSS  26.00 软 件 进 行 统 计 分 析 ,GraphPad      见图2。
                          表2 水蛭对NAFLD小鼠血清炎症相关因子及血脂水平的影响(x±s,n=8)
          组别       NF-κB/(pg/mL)  IL-1β/(pg/mL)  IL-6/(pg/mL)  TNF-α/(pg/mL)  TC/(mmol/L)  TG/(mmol/L)  LDL-C/(mmol/L)  HDL-C/(mmol/L)
          对照组       872.21±51.15  97.56±6.04  96.67±4.35  490.59±47.12  3.68±0.47  0.78±0.24  1.19±0.37  2.07±0.28
          模型组      1 091.65±48.90 a  117.82±6.63 a  114.62±5.75 a  588.23±33.10 a  27.50±1.07 a  2.32±0.25 a  21.73±1.76 a  0.44±0.15 a
          水蛭低剂量组    965.17±41.55 b  104.35±3.85 b  104.79±4.17 b  520.23±22.17 b  20.42±1.67 b  1.91±0.16 c  17.29±1.40 b  1.63±0.25 b
          水蛭高剂量组    909.21±39.44 b  97.36±6.10 b  98.05±3.63 b  506.42±35.83 b  16.62±1.32 b  1.28±0.33 b  13.14±1.09 b  1.90±0.18 b
             a:与对照组比较,P<0.01;b:与模型组比较,P<0.01;c:与模型组比较,P<0.05。


          中国药房  2024年第35卷第10期                                              China Pharmacy  2024 Vol. 35  No. 10    · 1195 ·
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