Page 44 - 《中国药房》2024年10期
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KEYWORDS     Hirudo；  non-alcoholic  fatty  liver  disease；  ApoE －/－   mice；  lipid  accumulation；  inflammatory  response；  SIRT1；
          PPARγ


              非 酒 精 性 脂 肪 性 肝 病（non-alcoholic  fatty  liver   1.2 主要药品与试剂
          disease，NAFLD）又称代谢相关脂肪性肝病，以肝实质细                         本研究所用水蛭粉为脉血康胶囊（重庆多普泰制药
          胞脂肪变性和脂肪贮积为主要特征。该疾病影响着全                             股份有限公司，国药准字 Z10970056，批号 20211021，每
                            [1]
          球30%～40%的人口 ，与糖尿病、心脑血管疾病的发生                         粒装 0.25 g）内容物；油红 O 染液、伊红染液、苏木精染
                  [2]
          密切相关 。NAFLD 的发病机制复杂，涉及胰岛素抵                          液、OCT 包埋剂（批号分别为 G1015、G1002、G1004、
                                                              GP1007）均购自武汉塞维尔生物科技有限公司；兔源
          抗、氧化应激、炎症激活和线粒体功能障碍等“多重打击
                                                              PPARγ 抗 体 、SIRT1 抗 体（批 号 分 别 为 WL01800、
               [3]
          假说”。目前，NAFLD 的治疗主要依赖生活方式的改
                                                              WL02995）均购自沈阳万类生物科技有限公司；兔源甘
          变，虽有诸多新药正处于临床试验阶段，但全球范围内
                                                              油醛-3-磷酸脱氢酶（GAPDH）抗体、辣根过氧化物酶标
          尚无针对该疾病的药物获批上市。
                                                              记的山羊抗兔IgG二抗（批号分别为2118、7074P2）均购
              过 氧 化 物 酶 体 增 殖 物 激 活 受 体 γ（peroxisome
                                                              自美国Cell Signaling Technology公司；特超敏ECL化学
          proliferator-activated receptor γ，PPARγ）在 NAFLD 患者  发光试剂盒、BCA 蛋白浓度测定试剂盒（批号分别为
          体内呈低表达，若被激活则可有助于减少患者肝脏脂质                            P0018AM、P0010S）均购自上海碧云天生物技术股份有
                                                        [4]
          堆积，提示 PPARγ 可能是 NAFLD 的潜在治疗靶点 。                     限公司；总胆固醇（total cholesterol，TC）、甘油三酯（tri‐
          沉默信息调节因子 1（silence information regulator type       glyceride，TG）、低密度脂蛋白胆固醇（low-density lipo‐
          1，SIRT1）是抗 NAFLD 研究的新靶点，其过表达可抑制                     protein cholesterol，LDL-C）、高密度脂蛋白胆固醇（high-
          高脂饮食引起的肝脏脂质堆积及炎症反应，并可调控糖                            density lipoprotein cholesterol，HDL-C）、肿瘤坏死因子 α
          脂代谢、胰岛素分泌等多条代谢通路，在 NAFLD 的发                        （tumor necrosis factor-α，TNF-α）、白细胞介素 1β（inter‐
                               [5]
          生、发展中具有关键作用 。                                       leukin-1β，IL-1β）、IL-6、核因子 κB（nuclear factor-κB，
                                                              NF-κB）酶联免疫吸附测定（ELISA）试剂盒（批号分别为
              水蛭为水蛭科动物蚂蟥 Whitmania pigra Whitman、
                                                              MM-0632M1、MM-0631M1、MM-43685M1、MM-44105M1、
          水蛭 Hirudo nipponica Whitman 或柳叶蚂蟥 Whitmania
                                                              MM-0132M1、MM-0040M1、MM-0049H1、MM-44130M1）
          acranulata Whitman的干燥全体，具有破血逐瘀、通经消
                                                              均购自江苏酶免实业有限公司。
          癥的功效，其相关中成药制剂已被广泛用于糖尿病、心
                                                              1.3 实验动物与饲料
          脑血管疾病等血脂代谢异常相关疾病的临床治疗                       [6―7] 。
                                                                  SPF 级 雄 性 ApoE  －/－  小 鼠 30 只 和 野 生 型 雄 性
          现代药理研究表明，水蛭具有调节脂质代谢、抗炎、减轻
                                                              C57BL/6J 小鼠 10 只，体重 16～20 g，均购自广东药康生
                        [8]
          氧化损伤等作用 ；同时，本课题组前期研究证实，水蛭                           物科技有限公司，动物生产许可证号为SCXK（粤）2020-
          可显著抑制载脂蛋白 E 基因敲除（ApoE             －/－ ）小鼠的动脉        0054。所有小鼠均饲养于广东药科大学附属第一医院
          粥样硬化（atherosclerosis，AS）形成，有明显的降脂作用。                SPF 级动物实验室[室温（23±2）℃，相对湿度（50±
                                           [9]
          考虑到 NAFLD 的病理基础与 AS 相似 ，故本研究拟以                      10）%，每12 h昼夜交替]，自由进食和饮水。本研究方案
          高脂饮食诱导 ApoE       －/－ 小鼠建立 NAFLD 模型，基于              得到广东药科大学附属第一医院动物管理委员会的批
          PPARγ、SIRT1初步探讨水蛭对NAFLD小鼠的保护作用                      准（受理编号00311859）。
          及潜在机制，旨在为水蛭抗 NAFLD 药理作用的深入研                             60%脂肪供能高脂饲料（批号XTHF60）购自江苏省
          究及后续临床应用提供参考。                                       协同医药生物工程有限责任公司；基础维持饲料（批号
          1 材料                                                GDMLAC-260）由广东省医学实验动物中心提供。
                                                              2 方法
          1.1 主要仪器
                                                              2.1 造膜、分组与给药
              本研究所用主要仪器包括 CryoStar NX50 型冰冻
                                                                  所有小鼠均适应性饲养1周。将30只雄性ApoE                  －/－
          切片机、Multiskan MK3 型酶标仪（美国 Thermo Fisher
                                                              小鼠随机分为模型组和水蛭低、高剂量组，每组10只；另
          Scientific公司），Leica 819型病理刀片（上海徕卡仪器有
                                                              取同周龄野生型雄性C57BL/6J小鼠10只，作为对照组。
          限公司），LUKYM-Ⅰ型样品冷冻研磨仪（广州露卡测序                         对照组小鼠以基础维持饲料喂养，其余各组小鼠以高脂
          仪器有限公司），BG-Power 600i 型电泳仪（北京百晶生                    饲料喂养 12 周以建立 NAFLD 模型（12 周后，每组各处
          物技术有限公司），Y-THM型光学显微镜、Tanon 4600型                    死小鼠2只，观察其肝组织病理变化，若可见明显脂肪空
          超灵敏化学发光成像系统（上海天能生命科学有限公                             泡则确认造模成功 ）。第13周，水蛭低、高剂量组小鼠
                                                                              [10]
          司）等。                                                灌胃 0.45、0.9 g/kg 水蛭粉（分别相当于成人临床等效剂


          · 1194 ·    China Pharmacy  2024 Vol. 35  No. 10                            中国药房  2024年第35卷第10期
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