Page 92 - 《中国药房》2024年9期

疫组化实验）进行 HE 染色。采用显微镜观察小鼠肺组 表1 各组小鼠肺功能比较（x±s，n＝8）
织病理变化，并拍照。 肺总阻力/ 肺出气阻力/ 肺动态顺应性/ 呼吸峰值流速/ 最大通气量/
组别
2.6 小鼠血清中炎症因子、氧化应激指标水平以及肺组 （kPa/L） （kPa/L） （L/kPa） （mL/s） （L/min）
对照组 51.34±2.78 58.65±4.32 18.43±0.78 109.76±4.32 107.43±3.56
织中MPO水平检测 模型组 97.45±2.66 a 98.63±4.21 a 9.43±0.69 a 99.27±4.26 a 97.56±3.27 a
采用ELISA法检测。取“2.3”“2.4”项下小鼠适量血 地塞米松组 57.77±2.56 b 65.32±3.27 b 13.69±0.65 b 105.42±4.21 b 104.35±3.29 b
清样品或左肺组织，根据试剂盒说明书方法，检测小鼠 CB低剂量组 62.41±2.27 b 73.89±3.98 b 12.12±0.63 b 102.67±4.81 b 103.82±2.67 b
CB高剂量组 54.67±2.39 b 68.65±3.29 b 12.46±0.62 b 108.48±4.21 b 106.56±3.13 b
血清中炎症因子（IL-6、IL-1β、TNF-α）、氧化应激指标
a：与对照组比较，P＜0.01；b：与模型组比较，P＜0.01。
（SOD和MDA）水平以及肺组织中MPO水平。
2.7 小鼠肺组织中p-STAT3阳性表达检测 性粒细胞数、淋巴细胞数、肺组织干湿比均显著升高
采用免疫组化法检测。取“2.5”项下小鼠肺组织切 （P＜0.01）。与模型组比较，地塞米松组和CB各剂量组
片在60 ℃下烘烤1 h，以二甲苯去除石蜡，经梯度乙醇脱 小鼠上述指标均显著逆转（P＜0.01）。结果见表2。
水、抗原修复后，以 3% 牛血清白蛋白封闭，加入 p- 表2 各组小鼠血常规指标和肺组织干湿比比较（x±s，
STAT3 一抗（稀释度为 1∶500）孵育过夜；加入相应二抗 n＝8）
孵育10 min，磷酸盐缓冲液（PBS）洗涤3次，每次3 min； 组别 白细胞总数/（10 L ） 中性粒细胞数/（10 L ） 淋巴细胞数/（10 L ） 肺组织干湿比/%
－1
9
－1
9
－1
9
以苏木精染色，经梯度乙醇和二甲苯脱水后，以中性树 对照组 3.27±1.24 2.21±0.83 1.04±0.05 1.54±0.48
模型组 7.89±1.04 a 5.49±0.86 a 1.87±0.04 a 5.67±0.87 a
脂密封。采用光学显微镜观察肺组织中 p-STAT3 蛋白
地塞米松组 4.56±1.12 b 3.45±0.94 b 1.28±0.06 b 3.29±0.76 b
表达情况，每只切片随机选取1个视野，以棕黄色为阳性 CB低剂量组 5.47±1.22 b 4.08±0.75 b 1.49±0.04 b 3.94±0.68 b
染色，采用Image J软件测定每个视野中的光密度值，光 CB高剂量组 4.78±1.09 b 3.76±0.64 b 1.41±0.04 b 4.15±0.62 b
密度值越大，蛋白阳性表达水平越高。 a：与对照组比较，P＜0.01；b：与模型组比较，P＜0.01。
2.8 小鼠肺组织中 IL-6/JAK2/STAT3 信号通路相关蛋 3.3 CB对脓毒症ALI小鼠肺组织病理学形态的影响
白表达水平检测
对照组小鼠肺组织形态规则，肺泡结构清晰完整。
采用 Western blot 法检测。取各组小鼠肺组织适
模型组小鼠肺组织出现肺泡塌陷、肺泡壁和肺泡间隔增
量，裂解后提取总蛋白，并用BCA法测定蛋白含量。将
厚以及炎症细胞浸润。与模型组比较，地塞米松组和
蛋白进行变性处理，然后取适量蛋白样品进行十二烷基
CB各剂量组小鼠肺组织病理损伤减轻。结果见图1。
硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳，并将其转移至 PVDF 膜
上。采用5%脱脂奶粉封闭2 h，加入IL-6、IL-6R、JAK2、
p-JAK2、STAT3、p-STAT3、GAPDH 一抗（稀释度均为
1∶1 000），孵育过夜；以 TBST 洗膜，然后加入相应二抗
（稀释度为1∶500），孵育30 min；以TBST洗膜，采用增强
化学发光试剂显影。采用凝胶成像仪分析蛋白条带灰
度值，以 IL-6、IL-6R 与内参（GAPDH）的灰度值比值表 20 μm 20 μm
A.对照组 B.模型组
示其表达水平，以p-JAK2与JAK2、p-STAT3与STAT3的
灰度值比值表示JAK2、STAT3的磷酸化水平。
2.9 统计学方法
采用SPSS 20.0软件进行统计分析，数据表示为x±s。
多组间比较采用单因素方差分析，组间两两比较采用
LSD-t法。检验水准α＝0.05。 20 μm 20 μm
3 结果 C.地塞米松组 D. CB低剂量组
3.1 CB对脓毒症ALI小鼠肺功能的影响
与对照组比较，模型组小鼠肺总阻力、肺出气阻力
均显著升高（P＜0.01），肺动态顺应性、呼吸峰值流速、
最大通气量均显著降低（P＜0.01）。与模型组比较，地
塞米松组和CB各剂量组小鼠上述指标均显著逆转（P＜
20 μm
0.01）。结果见表1。
E. CB高剂量组
3.2 CB对脓毒症ALI小鼠血常规指标和肺组织干湿比 红色箭头：炎症浸润。
的影响 图1 CB 对脓毒症 ALI 小鼠肺组织病理学形态影响的
与对照组比较，模型组小鼠全血中白细胞总数、中 显微图（HE染色）

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