Page 91 - 《中国药房》2024年9期
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脓毒症是一种由感染引起的全身炎症反应综合征，                         赛多利斯仪器系统有限公司）、D3024 型台式高速微量
          因炎症细胞过度分泌炎症介质和细胞因子，导致免疫功                           离心机（美国Scilogex公司）、RT-6000型酶标分析仪（深
                                  [1]
          能障碍和组织器官功能受损 。肺组织是脓毒症患者最                           圳雷杜生命科学股份有限公司）、GZX-9070 MBE 型数
          先损伤的靶器官之一，因此脓毒症通常会导致急性肺损                           显鼓风干燥箱（上海博迅医疗生物仪器股份有限公司）、
          伤（acute lung injury，ALI），以下简称为脓毒症 ALI      [2―3] 。  Tanon 5200型曝光仪（上海天能科技有限公司）、DYC型
          脓毒症ALI是一种失控的炎症反应，可导致大量炎症细                          系列电泳仪（北京六一生物科技有限公司）、RES3050型
          胞浸润肺组织；一方面，其可启动肿瘤坏死因子α（tumor                       动物呼吸机（河北赛维医疗科技有限公司）。
          necrosis factor-α，TNF-α）级联反应，在肺部聚集大量中              1.3 实验动物
          性粒细胞，促进其他炎症因子释放，引起肺损伤；另一方                              本研究所用动物为C57BL6小鼠，雄性（排除雌性小
          面，中性粒细胞释放弹性蛋白酶，促使大量中性粒细胞                           鼠的雌激素抗炎作用），6周龄，体重16～18 g，购自上海
                                                       [4]
          进入肺组织，引起肺水肿、蛋白质渗漏，加重肺损伤 。                          斯莱克实验动物有限责任公司，动物生产许可证号为
          目前治疗脓毒症 ALI 的关键是快速有效地控制或减少                         SCXK（沪）2022-009。所有动物实验均按照遵义医科大学
                          [5]
          肺的过度炎症反应 。糖皮质激素是治疗脓毒症ALI的                          动物中心研究委员会指南操作，伦理批号为（2021）-2-24。
          常用药物，虽然治疗效果明显，但也具有严重副作用。                           2 方法
              葫芦素B（cucurbitacin B，CB）是从葫芦科等植物中               2.1 分组、造模与给药
          分离得到的一种四环三萜类化合物，具有改善中枢神经                               将小鼠分为对照组、模型组、地塞米松组（阳性对
          系统疾病、抗肿瘤、预防糖尿病、抗炎、抗氧化等药理作                          照，2 mg/kg，剂量参考文献[8]设置）和 CB 低、高剂量组
            [6]
          用 。相关研究报道，CB对脂多糖诱导的巨噬细胞炎症                         （25、50 mg/kg，剂量参考文献[9]设置），每组20只。各药
                                [7]
          反应具有明显的抑制作用 。因此，笔者推测CB对脓毒                          物组小鼠腹腔注射相应药物，对照组与模型组小鼠腹腔
          症ALI可能也具有抑制作用。基于此，本研究建立脓毒                          注射等体积生理盐水，每天1次，连续3 d。末次给药24
          症 ALI 动物模型，探讨 CB 对脓毒症 ALI 的预防作用及                   h后，除对照组小鼠外，其余各组小鼠参照文献[10]方法，
          机制，以期为脓毒症ALI的治疗提供参考。                               采用腹腔注射脂多糖（10 mg/kg）的方法构建脓毒症ALI
          1 材料                                               模型，当造模小鼠相比对照组小鼠中性粒细胞数显著升
          1.1 主要药品与试剂                                        高同时肺功能显著降低时，表明造模成功。造模结束
              CB 对照品（批号 2022-0442，纯度＞98%）购自维琪                后，对照组小鼠无死亡，地塞米松组死亡6只，模型组和
          生物科技（上海）有限公司；苏木精-伊红（HE）染色液（批                       CB 低剂量组均死亡 12 只，CB 高剂量组死亡 9 只，最终
          号 G1120）购自北京索莱宝科技有限公司；BCA 蛋白定                      每组选取8只小鼠进行后续实验。
          量试剂盒购自北京普利莱基因技术有限公司；脂多糖                            2.2 小鼠肺功能检测
         （批号#202307）购自美国Sigma公司；鼠源白细胞介素6                         腹腔注射脂多糖24 h后，采用RES3050型动物呼吸
         （interleukin-6，IL-6）、IL-6 受 体（interleukin-6  receptor，  机及AniKes2005软件共同测量小鼠肺总阻力、肺出气阻
          IL-6R）、Janus 激 酶 2（Janus  kinase  2，JAK2）、磷 酸 化    力、肺动态顺应性、呼吸峰值流速和最大通气量。
          JAK2（p-JAK2）、信 号 转 导 及 转 录 活 化 因 子 3（signal        2.3 小鼠血常规指标检测
          transducer and activator of transcription 3，STAT3）、磷酸  肺功能检测后，以戊巴比妥钠（50 mg/kg）麻醉小鼠，
          化STAT3（p-STAT3）、GAPDH一抗和辣根过氧化物酶标                   摘除眼球采血，迅速吸取 45 µL 全血，与 5 µL 抗凝剂充
          记的兔抗鼠免疫球蛋白 G 二抗（批号分别为#3771、                        分混匀（剩余全血静置离心后取上层血清备用），采用血
          #3230、#9145、#9133、#3629、#3917、#5174、#58802）均购      常规检测仪检测小鼠全血中白细胞总数、中性粒细胞
          自美国CST公司；地塞米松对照品（批号D829854，纯度                      数、淋巴细胞数。
          99%）购自上海麦克林生化科技有限公司；IL-6、IL-1β、                    2.4 小鼠肺组织干湿比测定
          TNF-α 的酶联免疫吸附测定（ELISA）试剂盒（批号分别                         采血结束后，在冰上摘除小鼠右肺（左肺同时取出
          为 E-ELN-M0044c、E-ELN-M0037c、E-ELN-M0049c）均         备用），分离气管和食管，获取右肺叶，并立即测定小鼠
          购自武汉伊莱瑞特生物科技股份有限公司；超氧化物歧                           肺组织湿重（记为 d）。随后，将肺组织在 60 ℃下干燥
          化酶（superoxide dismutase，SOD）、丙二醛（malondialde‐      72 h以去除所有水分，测定肺组织干重（记为w），并计算
          hyde，MDA）、髓过氧化物酶（myeloperoxidase，MPO）的             肺组织干湿比（w/d×100%）。
          检测试剂盒（批号分别为 A001-1、A003-1、A044-1-1）均               2.5 小鼠肺组织病理学形态观察
          购自南京建成生物工程研究所有限公司。                                     取“2.4”项下小鼠左肺部分组织固定于 4% 甲醛溶
          1.2 主要仪器                                           液中 72 h，经乙醇梯度脱水、二甲苯透明、石蜡包埋后，
              本研究所用主要仪器有 BS124S 型电子天平（北京                     切成4 μm厚的组织切片，取部分切片（剩余部分用于免


          中国药房  2024年第35卷第9期                                                China Pharmacy  2024 Vol. 35  No. 9    · 1109 ·
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