Page 83 - 《中国药房》2024年9期
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amide，MTIC]；MTIC 主要作用于 DNA 鸟嘌呤的 O6 和               DeltaVision 型高分辨率活细胞成像系统购自北京东胜
                                           [2]
          N6位点，通过烷基化发挥细胞毒性作用 。TMZ是目前                         创新生物科技有限公司；AE2000 型倒置生物显微镜购
          临床治疗脑胶质瘤的一线化疗药物，具有针对性强、特                           自上海光学仪器厂；ESCO 型细胞培养箱购自深圳市赛
          异性高的优点，疗效显著。然而，TMZ 会产生恶心、呕                         亚泰科仪器设备有限公司；SA-100型脑立体定位仪购自
          吐、溶血、过敏等不良反应。因此，寻找合适的载体来负                          上海玉研科学仪器有限公司；IVIS Lumina LT Series Ⅲ
          载TMZ，提高药效、减少副作用成为当前研究的热点。                          型小动物活体成像系统购自美国 Caliper Life Sciences
              肿瘤细胞内糖酵解增强和缺氧特征所导致的乳酸、                         公司。
          碳酸增多，是肿瘤部位微酸环境形成的原因之一；另外，                          1.2 主要药品与试剂
          肿瘤细胞内的酸性细胞器，如溶酶体和内涵体，具有更                               TMZ（批号 85622-9391，纯度≥99.5%）购自上海迈
                         [3]
          低的 pH（pH5～6） 。因此，pH 常作为内源性刺激响应                     瑞尔化学技术有限公司；2-甲基咪唑（批号 KL03，纯度
                                      [3]
          信号用于肿瘤药物控制释放研究 。沸石咪唑骨架（zeo‐                        98%）购自上海旭硕生物科技有限公司；六水硝酸锌（化
          lite imidazole framework，ZIF）是一种由锌离子（Zn ）和         学纯）购自南京化学试剂股份有限公司；甲醇（色谱纯）
                                                     2+
          咪唑或其衍生物组成的金属有机框架，是锌基金属有机                           购自阿拉丁试剂（上海）有限公司；DMEM 培养基（批号
          骨架材料（Zn-metal-organic frameworks，Zn-MOFs）中应        12100）购自北京索莱宝科技有限公司；青霉素-链霉素
          用最广泛的药物载体。最具代表性的 ZIF 是 ZIF-8，由                     混合溶液（批号C0242）购自上海碧云天生物技术有限公
            2+
          Zn 和 2-甲基咪唑环上的 N 原子配位形成，其特点为高                      司；胰蛋白酶（批号 27250018）购自美国 Gibco 公司；
          孔隙率、易改性、一定的热和化学稳定性、低毒性、极大                          CCK-8 检测试剂盒（批号 20221115）购自北京百瑞极生
          的生物相容性。ZIF-8 对酸敏感，具有 pH 响应释放功                      物科技有限公司；二甲亚砜（细胞培养级）购自德国Bio‐
          能，因此其在药物控制释放方面有很好的表现。据研究                           froxx 公司；荧光染料罗丹明（rhodamine，Rho）（批号
                                                      +
          报道，ZIF-8 对 pH 敏感的原因是酸性条件可导致 Zn -咪                  1710X221236）购自上海懋康生物科技有限公司；An‐
          唑离子配位键裂解，从而瓦解 ZIF-8 的骨架，释放药物；                      nexin Ⅴ-FITC 细胞凋亡检测试剂盒购自爱必信（上海）
          而在正常 pH 条件下（pH7.4），ZIF 可以将药物留置于孔                   生物科技有限公司。
                                                 [4]
          隙内，从而保护环境不受药物毒副作用的影响 。                             1.3 实验动物和细胞
              本研究采用 ZIF-8 纳米粒（nanoparticles，NPs）负载               大鼠脑胶质瘤细胞株 C6、人胶质母细胞瘤细胞系
          TMZ（简称 TMZ@ZIF-8 NPs）构建药物递送系统，借助                   U87 均购自中国科学院上海生命科学研究院细胞资源
          ZIF-8特有的稳定多孔骨架结构，高效包裹TMZ并转移                        中心；SD 大鼠购自北京维通利华实验动物技术有限公
          至病灶部位，以期提高 TMZ 对脑胶质瘤的治疗效果并                         司，动物生产许可证号为SCXK（京）2020-0011。本实验
          降低TMZ的毒副作用。                                        通过哈尔滨商业大学实验动物伦理委员会审查，伦理编
          1 材料                                               号为HSDYXY-2023053。
          1.1 主要仪器                                           2 方法
              XS205DU型十万分之一精密电子天平购自梅特勒-                      2.1 ZIF-8 NPs的制备及其工艺优化
          托利多仪器（上海）有限公司；pHS-2C 型精密酸度计购                           采用室温溶液反应法制备 ZIF-8 NPs 。首先，将
                                                                                                  [5]
          自上海雷磁仪器厂；78-2型双向磁力搅拌器购自常州国                         148.74 mg六水硝酸锌溶解于5～20 mL无水甲醇至终浓
          华电器有限公司；KQ-400KDE 型高功率数控超声波清                       度为 0.025～0.10 mmol/mL。然后，将 328.40 mg 2-甲基
          洗器购自昆山市超声仪器有限公司；TG16W 型微量高                         咪唑溶解于 5～20 mL 无水甲醇中至终浓度为 0.20～
          速离心机购自湖南湘仪离心机厂；Zetasizer Nano ZS90                 0.80 mmol/mL。完全溶解后，将六水硝酸锌溶液缓慢加
          型激光粒度仪购自英国 Malvern 公司；XW-80A 型涡旋                   入到2-甲基咪唑溶液中，六水硝酸锌与2-甲基咪唑物质
          振荡器、SCIENTZ-100FG/A 型冷冻干燥机均购自宁波                    的量比为 1∶2、1∶4、1∶8。将溶液搅拌 30～60 min 并以
          新芝生物科技股份有限公司；JEM-100CX Ⅱ型透射电                       10 000～14 000 r/min离心，收集沉淀物。沉淀物用无水
          子显微镜购自日本电子株式会社；UV-1780型紫外可见                        甲醇和超纯水洗涤3次以去除未反应的试剂。最后，将
          分光光度计、SPD-20AV 型高效液相色谱仪均购自岛津                       产物分散到超纯水中，得到 ZIF-8 NPs。将其水分散溶
          仪器（苏州）有限公司；8400S 型傅里叶变换红外光谱                        液冷冻干燥获得 ZIF-8 NPs 粉末。研究表明，ZIF-8 NPs
         （Fourier transform infrared spectroscopy，FTIR）仪购自北  的制备过程中影响粒径的因素有：六水硝酸锌浓度、2-
          京银河系医疗技术有限公司；HZQ-F160 型振荡培养箱                       甲基咪唑浓度、六水硝酸锌与 2-甲基咪唑物质的量比、
                                                                                                   [5]
          购自江苏迅迪仪器科技有限公司；XFS-280A 型高压蒸                       溶液混合时的加入方式、搅拌时间、离心速率 。本研究
          汽灭菌锅购自上海新丰医疗器械有限公司；Synergy                         以上述6个影响因素为单因素考察内容，以ZIF-8 NPs的
          HTX型多功能酶标仪购自上海三申医疗器械有限公司；                          粒径为参考指标因素水平（表1）进行单因素试验。接着


          中国药房  2024年第35卷第9期                                                China Pharmacy  2024 Vol. 35  No. 9    · 1101 ·
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