Page 85 - 《中国药房》2024年9期
P. 85

含 ZIF-8 NPs、TMZ、TMZ@ZIF-8 NPs 25 μg/mL 的新鲜         0.40 mmol/mL，六水硝酸锌与2-甲基咪唑物质的量比为
          DMEM高糖培养基，培养8 h。移出旧培养基并合并，用                        1∶8，溶液混合时的加入方式为液下注入，搅拌时间为
          PBS 冲洗，胰蛋白酶消化后，将单细胞悬液分别收集到                         45 min，离心速率为 12 000 r/min。最终制备出形态规
          不同的离心管中以 2 000 r/min 离心 3 min，去除上清液。               整、分散均匀、粒径大小适宜（约110 nm）的ZIF-8 NPs作
          将沉淀的细胞块重悬于冷 PBS 中，以 2 000 r/min 离心 3               为药物递送系统。成功合成的ZIF-8 NPs溶液为白色并
          min，弃上清液。将沉淀重悬于结合缓冲液后转移至流                          伴有蓝色乳光；TMZ@ZIF-8 NPs 溶液为粉红色。ZIF-8
          式细胞管中。加入 Annexin Ⅴ-FITC 5 μL，室温避光孵                 NPs 和 TMZ@ZIF-8 NPs 分散在溶液中均呈现均匀澄清
          育15 min。检测前5 min加入5 μL碘化丙啶（propidium               的稳定状态，无浑浊、无分层、无沉降；材料由白色变为
          iodide，PI）染料。采用流式细胞仪检测 1 h 内细胞凋亡                   粉红色，表明TMZ负载成功。结果见图1。
          情况，细胞凋亡率（%）＝凋亡细胞数/细胞总数×100%。
          2.6 体内抗肿瘤活性实验
                                                              ZIF-8 NPs
          2.6.1 大鼠U87细胞脑部造模
              取密度为 80%～90% 的 U87 细胞，消化细胞后加入
          EP 管中，以 2 000 r/min 离心 3 min，去除上清液后加入
          PBS 离心，去除上清液后二次加入 PBS 离心，去除上清
          液后加入微量PBS，混匀，得细胞悬液。取10 μL细胞悬
                                                              TMZ@ZIF-8 NPs
          液，以 10 μL 台盼蓝+80 μL 培养液进行细胞培养。取
          10 μL染色的细胞悬液滴入细胞计数板，进行细胞计数。
              大鼠麻醉后将其固定在脑立体定位仪上，剪去头颅
                                                                         离心前                  离心后                        复溶后                     冻干粉末
          上皮，划掉紧挨头颅的薄膜，横平竖直固定进样针，接着                               图1 ZIF-8 NPs、TMZ@ZIF-8 NPs外观图片
          安装微量进样泵及进样针，下针深度 2.5 mm，静置 5
                                                             3.2 TMZ@ZIF-8 NPs的LE测定结果
          min，开始按压微量注射泵，进 U87 细胞悬液 20 min，再
                                                                 采用酸解法测得TMZ@ZIF-8 NPs的LE为（28.79±
          次静置10 min。观察大鼠大脑肿瘤位置、大小、颜色、生
                                                             1.26）%。
                                               3
          长情况等，待肿瘤体积生长至 150～200 mm 时，视为造
                [9]
          模成功 ，可进行后续实验。                                      3.3 体外溶出实验结果
                                                                 动态膜透析法结果显示，TMZ@ZIF-8 NPs 于酸性
          2.6.2 大鼠体内TMZ@ZIF-8 NPs富集的观察
                                                             介质中，前 12 h，附着在 ZIF-8 NPs 表面的 TMZ 快速释
              将造模成功的大鼠随机分为 3 组，分别为 TMZ 组、
                                                             放；12 h 后，ZIF-8 NPs 的纳米结构逐渐崩解、溶蚀，内部
          ZIF-8 NPs 组、TMZ@ZIF-8 NPs 组，每组 10 只。参考文
                                                             包裹的 TMZ 得以缓慢释放。当释放 48 h 时，TMZ 的
          献[10―12]的方法，在制备 ZIF-8 NPs 过程中，加入荧光
                                                             CDR 为（71.57±3.27）% ；当 释 放 72  h 时 ，CDR 为
          染料1，1′-二十八烷基-3，3，3′，3′-四甲基吲哚三碳花青
                                                            （72.36±3.62）%。结果见图2。
          碘（1，1′-dioctadecyl-3，3，3′，3′-tetramethylindotricarbo‐
                                                                       100
          cyanine，DiR）甲醇溶液即得 ZIF-8 NPs-DiR、TMZ@ZIF-
          8 NPs-DiR；取 TMZ 溶解在适量甲醇中，加入 DiR（DiR                          80
          母液挥干后加入等体积甲醇），搅拌24 h，以12 000 r/min                           60
          离心 15 min，挥干，分散在 0.9% 生理盐水中即得 TMZ-                          CDR/%  40
          DiR。其中 TMZ-DiR 组、TMZ@ZIF-8 NPs-DiR 组注射
                                                                       20
          TMZ 含量为 2.5 mg/kg，注射 24 h 后，将大鼠处死，采用
                                                                        0
          小动物活体成像系统观察药物在大鼠体内的富集情况。                                        0          12            24            36           48         60             72
          所有实验至少重复3次。                                                                t/h
          2.7 统计学处理                                          图2 TMZ@ZIF-8  NPs 中 TMZ 的 累 积 释 放 曲 线 图
              采用SPSS 23.0软件进行统计分析。计量资料满足                          （n＝3）
          正态分布以 x±s 表示，多组间比较采用方差分析，进一                        3.4 材料的表征结果
          步两两比较使用SNK-q检验。检验水准α＝0.05。                            （1）激光粒度仪分析结果显示，ZIF-8 NPs的粒径为
          3 结果                                              （110.47±3.60） nm，多分散系数为0.12±0.02，Zeta电位
          3.1 ZIF-8 NPs和TMZ@ZIF-8 NPs的制备及工艺优化                为（20.93±2.05）  mV。 TMZ@ZIF-8  NPs 的 粒 径 为
          结果                                                （126.23±7.92） nm，多分散系数为0.13±0.03，Zeta电位
              单因素和正交试验确定的 ZIF-8 NPs 的制备条件：                   为（28.46±1.94）  mV。 与 ZIF-8  NPs 相 比 ，由 于
          六水硝酸锌浓度为 0.05 mmol/mL，2-甲基咪唑浓度为                    TMZ@ZIF-8  NPs 负 载 了 TMZ，粒 径 增 加 ，同 时 由 于


          中国药房  2024年第35卷第9期                                                China Pharmacy  2024 Vol. 35  No. 9    · 1103 ·
   80   81   82   83   84   85   86   87   88   89   90