Page 45 - 《中国药房》2024年8期

100 为 3∶1 时，得上述各待测杂质的检测限分别为 0.52、
50 N-亚硝基普萘洛尔
0 0.08、0.02、0.17、0.52 ng/mL。
0 2 4 6 8 10 12 14 16 18 20 2.3.6 稳定性试验
100
50 N-亚硝基美托洛尔 取“2.2.1”～“2.2.6”项下各供试品溶液，于进样器内
0
0 2 4 6 8 10 12 14 16 18 20 放置 0、2、4、6、8、12 h 时按“2.1”项下色谱与质谱条件进
100 样测定，记录峰面积。结果显示，各待测杂质峰面积的
相对丰度/% 0 N-亚硝基阿替洛尔 RSD均不高于7.3%（n＝6），表明各样品在上述条件下稳
50
100 0 2 4 6 8 10 12 14 16 18 20 定性良好。
50 N-亚硝基艾司洛尔 2.3.7 耐用性试验
0
0 2 4 6 8 10 12 14 16 18 20 以N-亚硝基艾司洛尔对照品溶液为例，分别对柱温
100
50 N-亚硝基比索洛尔 和流动相流速进行±10%的变动，即于柱温36 ℃、流速
0 0.60 mL/min，柱温 40 ℃、流速 0.60 mL/min，柱温 44 ℃、
0 2 4 6 8 10 12 14 16 18 20
时间/min 流速 0.60 mL/min，柱温 40 ℃、流速 0.54 mL/min，柱温
图2 各待测杂质对照品溶液的选择离子流图 40 ℃、流速0.66 mL/min条件下进样测定。结果显示，N-
表1 N-亚硝基类杂质的质谱信息 亚硝基艾司洛尔的色谱峰峰形无变化，峰面积的RSD为
5.5%（n＝5），提示方法耐用性良好。
待测杂质 保留时间/min 分子式（加合离子） 理论m/z 实测m/z 质量偏差/ppm
N-亚硝基普萘洛尔 17.91 C 16H 20N 2O 3 （+H） 289.154 7 289.154 2 0.9 2.4 样品测定
N-亚硝基美托洛尔 15.12 C 15H 24N 2O 4 （+H） 297.180 9 297.180 6 0.5 取各批次原料药/制剂适量，按“2.2.1”～“2.2.6”项下
N-亚硝基阿替洛尔 7.27 C 14H 21N 3O 4 （+H） 296.160 5 296.160 1 0.7 方法配制供试品溶液，再按“2.1”项下色谱与质谱条件进
N-亚硝基艾司洛尔 16.09 C 16H 24N 2O 5 （+H） 325.175 8 325.175 5 0.5
N-亚硝基比索洛尔 16.89 C 18H 30N 2O 5 （+H） 355.222 7 355.222 3 0.6 样测定，记录峰面积并代入回归方程计算各批样品中N-
亚硝基类杂质的含量。结果见表3。
表2 线性关系考察与精密度试验结果
表3 样品中N-亚硝基类杂质的含量测定结果
待测杂质 线性回归方程 r 线性范围/（ng/mL） 精密度试验RSD（n＝6）/%
N-亚硝基普萘洛尔 y＝451 444x+215 839 1.000 0 1.01～503.38 2.1 品名 待测杂质 类型 批号 杂质含量/（ng/mg）
N-亚硝基美托洛尔 y＝2 934 300x－638 604 1.000 0 1.02～508.38 1.1 盐酸普萘洛尔 N-亚硝基普萘洛尔 原料药 CP07-190101 －
N-亚硝基阿替洛尔 y＝1 179 437x－835 394 1.000 0 0.97～483.63 0.7 171201 8.91
N-亚硝基艾司洛尔 y＝1 660 282x+690 076 1.000 0 1.11～554.27 1.1 片剂 5190601 2.87
N-亚硝基比索洛尔 y＝76 507x－191 437 0.999 9 1.05～523.92 7.3 5190602 2.84
180901 1.18
2.3.3 重复性试验 180903 1.07
按“2.2.1”～“2.2.6”项下方法制备同一批次原料药/ 190101 2.45
190110 1.49
制剂的供试品溶液，共 6 份，按“2.1”项下色谱与质谱条
酒石酸美托洛尔 N-亚硝基美托洛尔 片剂 20200401 1.43
件进样测定，记录峰面积并代入回归方程计算各待测杂 20200402 1.77
质含量。结果显示，各待测杂质含量的 RSD 均不高于 2107129 1.56
2109A25 3.37
6.2%（n＝6），提示方法重复性良好。
阿替洛尔 N-亚硝基阿替洛尔 片剂 220801 1.33
2.3.4 准确度试验 盐酸艾司洛尔 N-亚硝基艾司洛尔 注射液 2C0092C04 0.19
取同一批次的原料药/制剂适量，精密称定，精密加 富马酸比索洛尔 N-亚硝基比索洛尔 片剂 2301094 1.27
入N-亚硝基类杂质对照品溶液适量（加入量与已知量相 －：低于检测限。
当），按“2.2.1”～“2.2.6”项下方法制备供试品溶液（每样 2.5 毒性预测与关注阈值估算
品平行操作 6 份），再按“2.1”项下色谱与质谱条件进样 采用 Discovery Studio 软件对上述 5 种 N-亚硝基类
测定，记录峰面积并计算加样回收率，结果显示，各待测 杂质进行潜在发育毒性、致突变性、啮齿动物致癌性和
杂质的平均加样回收率为 90.97%～97.07%，RSD 为 中毒剂量（TD50 ）等模块的毒理学预测 [8―11] ，参考人用药
2.5%～6.6%（n＝6），提示方法准确度良好。 品注册技术要求国际协调会（International Council for
2.3.5 定量限与检测限考察 Harmonisation of Technical Requirements for Pharmaceu‐
取按“2.2.7”项下方法配制的各 N-亚硝基类杂质对 ticals for Human Use，ICH）发布的协调指导原则 M7
照品贮备液，用溶剂逐级稀释，再按“2.1”项下色谱与质 （R2），按照更为保守的大鼠 TD50值和人体重 50 kg 来计
谱条件进样测定，记录峰面积。当信噪比约为10∶1时， 算各杂质的人每日最大摄入量（线性外推至肿瘤发生风
得 N-亚硝基普萘洛尔、N-亚硝基美托洛尔、N-亚硝基阿 险为十万分之一），同时结合5种β受体拮抗剂类药物药
替洛尔、N-亚硝基艾司洛尔、N-亚硝基比索洛尔的定量 品说明书中的主成分日最大剂量进一步估算各杂质的
[12]
限分别为 1.04、0.25、0.05、0.55、1.05 ng/mL；当信噪比约 关注阈值 ，结果见表4。

中国药房 2024年第35卷第8期 China Pharmacy 2024 Vol. 35 No. 8 · 939 ·