Page 46 - 《中国药房》2024年8期
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表4 毒性预测与关注阈值估算结果
                                                      TD 50/[mg/（kg·d）]
           杂质名称        潜在发育毒性    致突变性   啮齿动物致癌性                      杂质的人每日最大摄入量/ng  主成分日最大剂量/mg  杂质的关注阈值/（ng/mg）
                                                    小鼠        大鼠
           N-亚硝基普萘洛尔      无        有       有         78.3     0.24        240          240           1.0
           N-亚硝基美托洛尔      有        无       有         79.6     0.084 2     84.2         200           0.4
           N-亚硝基阿替洛尔      有        无       有         49.7     0.854       854          200           4.3
           N-亚硝基艾司洛尔  a   有        无       无        116       0.036 1     36.1         200           0.2
           N-亚硝基比索洛尔      有        无       无         96.8     0.467       467           10           46.7
             a：无长期用药依据，按疗程≤1个月计算。
          3 讨论                                                势 。本研究预测结果显示，5种β受体拮抗剂类药物的
                                                                [8]
          3.1 色谱条件的选择                                         N-亚硝基类杂质存在不同程度的发育毒性、致突变性、
              供试品溶液均含有高质量浓度的主成分，如果直接                          致癌性，N-亚硝基普萘洛尔、N-亚硝基美托洛尔、N-亚硝
          进入质谱系统，会污染离子源并产生基质效应，因此主                            基阿替洛尔、N-亚硝基艾司洛尔、N-亚硝基比索洛尔的
          成分与其对应的 N-亚硝基类杂质需达到足够的色谱分                           关注阈值分别为1.0、0.4、4.3、0.2、46.7 ng/mg；同时，杂质

          离度，才能通过切换阀将主成分切入废液、待测杂质切                            含量实测结果显示，有多批样品的杂质含量超过其关注
          入质谱检测器，以保证杂质的检测并保护质谱系统。本                            阈值，相关企业应予以关注。此外有报道指出，制剂中
          课题组在色谱条件优化过程中发现，以梯度洗脱程序Ⅰ                            的亚硝酸盐对亚硝化反应有较大影响，有些辅料对N-亚
          进行洗脱时，普萘洛尔、美托洛尔、艾司洛尔、比索洛尔                           硝基类杂质的产生也有明显的促进作用                  [15―17] 。相关企
          的主成分峰与对应 N-亚硝基类杂质峰的保留时间均相                           业应重视辅料的选择和使用，严格控制亚硝酸盐水平，
          差超过 10 min，有效避免了主成分对杂质测定的干扰。                        并持续关注β受体拮抗剂类药物中的N-亚硝基类杂质，
          然而在该洗脱条件下，阿替洛尔及其对应杂质的保留时                            以提高该类药物使用的安全性。
          间分别为2.64、4.63 min，为避免高质量浓度主成分的干                         综上所述，本文所建方法简单快捷、灵敏度高、专属
          扰，本课题组对梯度洗脱程序Ⅰ进行了调整，得梯度洗                            性强，可用于多种β受体拮抗剂类药物中N-亚硝基类杂
          脱程序Ⅱ，从而增加了二者保留时间的差值，以保证检                            质的测定；同时，明确了各杂质的关注阈值，可为该类药
          测的准确性和可靠性。                                          物的质量控制和安全性评价提供参考。
          3.2 质谱条件的选择                                         参考文献
              Orbitrap HRMS具有高通量、高选择性、高灵敏度等                   [ 1 ]  国家药典委员会 . 中华人民共和国药典临床用药须知：
              [13]
          优势 ，其常用的定量模式包括full MS-SIM、目标-选择                          化学药和生物制品卷[M].2020 年版 . 北京：中国医药科
          离子监测（target-selected ion monitoring，target-SIM）、平        技出版社，2022：318-331.
          行反应监测（parallel reaction monitoring，PRM）模式。本              Chinese Pharmacopoeia Commission. Chinese pharmaco‐
          课题组前期比较了上述3种模式下各待测杂质的质谱响                                 peia  clinical  medication  instruction：chemical  drugs  and
          应情况，其中full MS-SIM模式和target-SIM模式下各杂                      biological  products[M].  2020  edition.  Beijing：Chinese
          质的质谱响应差异不大，均可满足灵敏度和专属性要                                  Medicine Publishing House，2022：318-331.
          求，而PRM模式则因涉及二级子离子的选择，需要根据                           [ 2 ]  LÓPEZ-RODRÍGUEZ R，MCMANUS J A，MURPHY N
                                                                   S，et al. Pathways for N-nitroso compound formation：se-
          不同的待测杂质设置不同的参数，且部分待测杂质的灵
                                                                   condary  amines  and  beyond[J].  Org  Process  Res  Dev，
          敏度低于 full MS-SIM 模式，因此本研究最终选择了可
                                                                   2020，24（9）：1558-1585.
          获取更多质谱信息的full MS-SIM模式。
                                                              [ 3 ]  MARTELLI  A，ALLAVENA  A，SOTTOFATTORI  E，et
          3.3 毒性预测与关注阈值分析
                                                                   al.  Low  clastogenic  activity  in  vivo  of  the  N-nitroso  de‐
              目前，对于β受体拮抗剂类药物中N-亚硝基类杂质
                                                                   rivatives of 5 beta-adrenergic-blocking drugs proved to be
                                         [14]
          的毒性研究仍停留在体外细胞水平 ，需要更广泛的证
                                                                   potent genotoxins in vitro[J]. Toxicol Lett，1994，73（3）：
          据来评估相关药物的风险以便制订药物使用监控策略。                                 185-191.
          Discovery Studio 软件为美国 CambridgeSoft 公司开发的          [ 4 ]  ROBBIANO L，MARTELLI A，ALLAVENA A，et al. For‐
          面向生命科学领域的分子建模和模拟软件，其毒性预测                                 mation of the N-nitroso derivatives of six beta-adrenergic-
          模块（TOPKAT）可用于预测小分子化合物的毒性相关                               blocking agents and their genotoxic effects in rat and hu‐
          指标，具有分析速度快、成本低、不依赖实验条件等优                                 man hepatocytes[J]. Cancer Res，1991，51（9）：2273-2279.


          · 940 ·    China Pharmacy  2024 Vol. 35  No. 8                               中国药房  2024年第35卷第8期
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