Page 42 - 《中国药房》2024年8期

5种β受体拮抗剂类药物中的N-亚硝基类杂质的含量研究
Δ

田 珩 ，杨仪雪，戴 聪，刘亚雄，严全鸿（广东省药品检验所/国家药品监督管理局药用辅料质量控制与评价
＊
重点实验室，广州 510180）

中图分类号 R917 文献标志码 A 文章编号 1001-0408（2024）08-0936-06
DOI 10.6039/j.issn.1001-0408.2024.08.07

摘 要 目的 测定普萘洛尔、美托洛尔、阿替洛尔、艾司洛尔、比索洛尔原料药/制剂中N-亚硝基类杂质含量，明确其含量的关注
阈值。方法 采用超高效液相色谱-四极杆/静电场轨道阱高分辨质谱技术。以ACE Excel 3 C18-AR为色谱柱，以含0.01 mol/L乙酸
铵的0.2%甲酸溶液-甲醇为流动相进行梯度洗脱，流速为0.60 mL/min，柱温为40 ℃，进样量为5 μL；以可加热的电喷雾离子源为
离子源，以全扫描-选择离子监测模式进行正离子扫描。采用该法对10家企业生产的15批β受体拮抗剂类药物原料药/制剂中N-
亚硝基类杂质含量进行测定，并采用Discovery Studio软件对待测杂质进行毒性预测和关注阈值估算。结果 5种β受体拮抗剂类
药物中，N-亚硝基普萘洛尔、N-亚硝基美托洛尔、N-亚硝基阿替洛尔、N-亚硝基艾司洛尔、N-亚硝基比索洛尔检测质量浓度的线性
范围分别为 1.01～503.38、1.02～508.38、0.97～483.63、1.11～554.27、1.05～523.92 ng/mL（r＞0.999），定量限分别为 1.04、0.25、
0.05、0.55、1.05 ng/mL，检测限分别为 0.52、0.08、0.02、0.17、0.52 ng/mL，精密度、重复性、加样回收率、稳定性、耐用性试验的 RSD
均小于7.5%（n＝6或n＝5）。15批样品中，除1批样品外，其余批次均检出了N-亚硝基普萘洛尔（1.07～8.91 ng/mg）、N-亚硝基美
托洛尔（1.43～3.37 ng/mg）、N-亚硝基阿替洛尔（1.33 ng/mg）、N-亚硝基艾司洛尔（0.19 ng/mg）、N-亚硝基比索洛尔（1.27 ng/mg）。
经预测，上述5种杂质有不同程度的生育毒性、致突变性、致癌性，关注阈值分别为1.0、0.4、4.3、0.2、46.7 ng/mg。结论 所建方法简
单快捷、灵敏度高、专属性强，估算的关注阈值明确，可用于多种β受体拮抗剂类药物中N-亚硝基类杂质的含量控制。
关键词 β受体拮抗剂类药物；N-亚硝基类杂质；超高效液相色谱-四极杆/静电场轨道阱高分辨质谱技术；基因毒性；关注阈值

Content study of N-nitroso impurities in 5 types of β-blockers
TIAN Heng，YANG Yixue，DAI Cong，LIU Yaxiong，YAN Quanhong（Guangdong Institute for Drug Control/
NMPA Key Laboratory for Quality Control and Evaluation of Pharmaceutical Excipients， Guangzhou 510180，
China）

ABSTRACT OBJECTIVE To determine the contents of N-nitroso impurities in raw materials/formulations of propranolol，
metoprolol， atenolol， esmolol and bisoprolol， and clarify the attention threshold. METHODS Ultra-high performance liquid
chromatography-quadrupole/electrostatic field orbitrap high-resolution mass spectrometry（UPLC-Q/Orbitrap HRMS）was adopted. An
ACE Excel 3 C18-AR column was used for the separation and a mixture of 0.2% formic acid solution with 0.01 mol/L ammonium
acetate and methanol was employed as the mobile phase by gradient elution， at a flow rate of 0.60 mL/min. The column
temperature was set at 40 ℃ ， and the sample size was 5 μL. The heated electrospray ionization source was employed in the
positive full mass spectra-selected ion monitoring mode. The contents of N-nitroso impurities in raw materials/formulations of 15 batches
of β-blockers from 10 manufacturers were determined by this method. Discovery Studio software was applied to predict the toxicity
of the impurities and estimate the attention threshold. RESULTS Among 5 kinds of β -blockers， the linear ranges of N-nitroso
propranolol， N-nitroso metoprolol， N-nitroso atenolol， N-nitroso esmolol and N-nitroso bisoprolol were 1.01-503.38， 1.02-508.38，
0.97-483.63， 1.11-554.27 and 1.05-523.92 ng/mL， respectively （r＞0.999）. The limits of quantitation were 1.04， 0.25， 0.05， 0.55
and 1.05 ng/mL， and the limits of detection were 0.52， 0.08， 0.02， 0.17 and 0.52 ng/mL， respectively. RSDs of precision，
reproducibility， recovery， stability and durability tests were all lower than 7.5% （n＝6 or n＝5）. Among the 15 batches of
samples， except for 1 batch， N-nitroso propranolol （1.07-8.91 ng/mg）， N-nitroso metoprolol （1.43-3.37 ng/mg）， N-nitroso atenolol
（1.33 ng/mg）， N-nitroso esmolol （0.19 ng/mg） and N-nitroso bisoprolol （1.27 ng/mg） were detected in all other batches. According
to predictions， the above 5 impurities had varying degrees of reproductive toxicity， mutagenicity and carcinogenicity， with attention
thresholds of 1.0， 0.4， 4.3， 0.2 and 46.7 ng/mg， respectively. CONCLUSIONS The established method is simple， rapid， sensitive
and specific， the estimated attention thresholds are clear， which can be used for the control of N-nitroso impurities in various
β-blockers.
Δ 基金项目 广东省医学科学技术研究基金项目（No.B2023406）
＊第一作者 主管药师，硕士。研究方向：药物分析、质量控制。电 KEYWORDS β-blockers； N-nitroso impurities； UPLC-Q/Orbitrap
话：020-32447921。E-mail：dongqingfish@126.com HRMS； gene toxicity； attention thresholds

· 936 · China Pharmacy 2024 Vol. 35 No. 8 中国药房 2024年第35卷第8期