Page 18 - 《中国药房》2024年8期

·药学研究·

纤细薯蓣皂苷诱导肺癌A549细胞自噬的作用及机制 Δ

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李 燕 ，李亚梅 ，雷歌燕 ，康佳兰 ，刘明轩 ，张敏鸿 ，杨建琼 （1.赣南医学院第一附属医院药学部，江西
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赣州 341000；2.赣南医学院第一附属医院临床医学研究中心，江西 赣州 341000；3.泰和县人民医院药剂科，
江西 吉安 343700）
中图分类号 R965；R285 文献标志码 A 文章编号 1001-0408（2024）08-0912-06
DOI 10.6039/j.issn.1001-0408.2024.08.03

摘 要 目的 探讨吉祥草中纤细薯蓣皂苷（gracillin）诱导人非小细胞肺癌A549细胞自噬的作用及机制。方法 以A549细胞为
对象，采用CCK-8法检测不同浓度（0.25、0.5、1、2、4 μmol/L）gracillin作用不同时间（12、24、48 h）对细胞增殖的影响。与不加药物
的对照组进行比较，采用生物透射电子显微镜观察gracillin（2 μmol/L）作用24 h对细胞自噬小体形成的影响；通过GFP-LC3质粒
转染实验检测gracillin（0.25、0.5、1、2 μmol/L）作用24 h后GFP-LC3在细胞自噬小体膜上的聚集情况；采用实时定量聚合酶链式反
应法和 Western blot 法检测 gracillin（0.25、0.5、1、2 μmol/L）作用 24 h 后 A549 细胞中序列相似性家族 102 成员 A（FAM102A）
mRNA和蛋白的表达水平，以及自噬相关蛋白[p62、Beclin-1、微管相关蛋白1轻链3B（LC3B）]和磷脂酰肌醇3激酶（PI3K）/蛋白激
酶B（又名Akt）信号通路相关蛋白的表达水平。结果 gracillin对A549细胞具有一定的增殖抑制作用，且呈浓度和时间依赖趋势；
其作用24 h的半数抑制浓度为2.55 μmol/L。gracillin作用24 h后，细胞胞浆内可见含双层膜结构的自噬小体；自噬小体膜上可见
明显的 GFP-LC3 绿色荧光斑点，且有随药物浓度升高而增多的趋势。与对照组比较，gracillin 不同浓度组细胞中 FAM102A
mRNA和蛋白的表达水平（0.5、1、2 μmol/L组）、Beclin-1蛋白的表达水平（1、2 μmol/L组）和LC3B-Ⅱ/LC3B-Ⅰ比值（2 μmol/L组）
均显著升高，p62蛋白的表达水平（1、2 μmol/L组）和Akt蛋白（1、2 μmol/L组）、PI3K蛋白（2 μmol/L组）的磷酸化水平均显著降低
（P＜0.05或P＜0.01）。结论 gracillin可能通过上调FAM102A mRNA和蛋白的表达、抑制PI3K/Akt信号通路来促进A549细胞发
生自噬，从而发挥抑制细胞增殖的作用。
关键词 吉祥草；纤细薯蓣皂苷；非小细胞肺癌细胞；自噬；FAM102A；PI3K/Akt信号通路

Effect and mechanism of gracillin-induced autophagy in lung cancer A549 cells
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LI Yan ，LI Yamei ，LEI Geyan ，KANG Jialan ，LIU Mingxuan ，ZHANG Minhong ，YANG Jianqiong（1. Dept.
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of Pharmacy， the First Affiliated Hospital of Gannan Medical University， Jiangxi Ganzhou 341000， China；
2. Clinical Medicine Research Center， the First Affiliated Hospital of Gannan Medical University， Jiangxi
Ganzhou 341000， China；3. Dept. of Pharmacy， Taihe People’s Hospital， Jiangxi Ji’an 343700， China）
ABSTRACT OBJECTIVE To investigate the effect and mechanism of gracillin from Reineckia carnea on autophagy in non-
small cell lung cancer A549 cells. METHODS Using A549 cells as subjects， the effects of different concentrations of gracillin
（0.25， 0.5， 1， 2， 4 μmol/L） on the proliferation of cells were detected by CCK-8 after being treated for different time （12， 24，
48 h）. Compared with the control group without medication， the effect of gracillin （2 μmol/L） on the formation of autophagosomes
in cells was observed by transmission electron microscope after 24 h of exposure. The aggregation of GFP-LC3 on autophagosome
membrane was detected by GFP-LC3 plasmid transfection after being treated with gracillin （0.25， 0.5， 1， 2 μmol/L） for 24 h.
Quantitative real-time PCR and Western blot assay were used to detect the mRNA and protein expressions of family with sequence
similarity 102 member A（FAM102A）， the expressions of
Δ 基金项目 国家自然科学基金项目（No.82260985）；江西省卫生 autophagy-related proteins [p62， Beclin-1， microtubule-
健康委科技计划项目（No.202210939）；江西省教育厅科学技术研究项 associated protein 1 light chain 3B （LC3B）]， and the
目（No. GJJ2201459）；赣 州 市 科 技 计 划 重 点 实 验 室 项 目（No.
expressions of phosphoinositide 3-kinase （PI3K）/protein kinase
2022DSYS9969） B （Akt） signaling pathway-related proteins in A549 cells after
＊第一作者 副主任药师。研究方向：医院药学、天然药物。E-
being treated with gracillin （0.25， 0.5， 1 and 2 μmol/L） for
mail：liyan7112@163.com
# 通信作者 副教授，硕士。研究方向：天然药物抗肿瘤作用。电 24 h. RESULTS Gracillin significantly inhibited the
话：0797-8283981。E-mail：yangjianqiong2010@163.com proliferation of A549 cells in a concentration- and time-

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