Page 22 - 《中国药房》2024年8期

5
PI3K 110 kDa
FAM102A mRNA表达水平 3 2 a a p-PI3K 85 kDa
a
4
Akt
60 kDa
p-Akt
60 kDa
0 1 GAPDH 37 kDa
Ⅰ Ⅱ Ⅲ Ⅳ Ⅴ Ⅰ Ⅱ Ⅲ Ⅳ
A. mRNA表达水平柱状图（x±s，n＝3） A.电泳图 Ⅴ
0.5
FAM102A 42 kDa Ⅰ
Ⅱ
0.4 Ⅲ
GAPDH 37 kDa 0.3 Ⅳ
Ⅴ
Ⅰ Ⅱ Ⅲ Ⅳ Ⅴ 蛋白表达水平
B.蛋白表达电泳图 0.2
a
a a
2.5 a a 0.1 0
FAM102A蛋白表达水平 1.5 a Ⅰ：对照组；Ⅱ：gracillin 0.25 μmol/L组；Ⅲ：gracillin 0.5 μmol/L
2.0
p-PI3K/PI3K p-Akt/Akt
B.柱状图（x±s，n＝3）
1.0
组；Ⅳ：gracillin 1 μmol/L组；Ⅴ：gracillin 2 μmol/L组；a：与对照组比
0.5
较，P＜0.05。
0 图6 各组A549 细胞中PI3K/Akt信号通路相关蛋白的
Ⅰ Ⅱ Ⅲ Ⅳ Ⅴ
C.蛋白表达水平柱状图（x±s，n＝3） 表达水平
Ⅰ：对照组；Ⅱ：gracillin 0.25 μmol/L组；Ⅲ：gracillin 0.5 μmol/L
组；Ⅳ：gracillin 1 μmol/L组；Ⅴ：gracillin 2 μmol/L组；a：与对照组比 4 讨论
较，P＜0.01。 细胞自噬即细胞自体吞噬，是真核生物体内一种高
图4 各组 A549 细胞中 FAM102A mRNA 和蛋白的表 度保守的进化过程，可通过降解吸收受损细胞器、无用
达情况
蛋白和衰老核酸来维持物质代谢、细胞器更替及能量平
[9]
p62 62 kDa 衡，但过度自噬最终会导致细胞死亡 。本研究结果显
Beclin-1 60 kDa 示，gracillin 能明显抑制 A549 细胞的增殖，并有一定的
LC3B-Ⅰ 14 kDa 浓度和时间依赖趋势。另外，通过生物透射电子显微镜
LC3B-Ⅱ 16 kDa
观察发现，2 μmol/L 的 gracillin 作用于 A549 细胞 24 h
GAPDH 37 kDa
后，细胞胞浆内可见具典型双层膜结构的自噬小体，表
Ⅰ Ⅱ Ⅲ Ⅳ Ⅴ
A.电泳图 明 gracillin 可诱导 A549 细胞发生自噬。GFP-LC3 蛋白
3
p62
Beclin-1 b 在自噬小体膜上的聚集是判断自噬发生的另一个重要
LC3B-Ⅱ/LC3B-Ⅰ a 指标 ，当未发生自噬时，GFP-LC3融合蛋白弥散分布于
[9]
蛋白表达水平 胞浆内；当发生自噬时，GFP-LC3 融合蛋白会转移至自
a
2
1
a
a
噬小体膜上，形成多个明亮的绿色荧光斑点，每个荧光
斑点相当于1个自噬小体，故可通过荧光斑点的聚集程
0
Ⅰ Ⅱ Ⅲ Ⅳ Ⅴ 度来评价细胞自噬水平的高低；此外，在自噬发生过程
B.柱状图（x±s，n＝3）
Ⅰ：对照组；Ⅱ：gracillin 0.25 μmol/L组；Ⅲ：gracillin 0.5 μmol/L 中，位于胞浆的 LC3-Ⅰ被修饰和加工成 LC3-Ⅱ并定位
组；Ⅳ：gracillin 1 μmol/L组；Ⅴ：gracillin 2 μmol/L组；a：与对照组比 到自噬小体中，故 LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ比值的大小亦可用于
较，P＜0.05；b：与对照组比较，P＜0.01。 [10]
图5 各组A549 细胞中自噬相关蛋白的表达情况 评估自噬水平的高低 。Beclin-1作为形成自噬小体的
3.6 A549 细胞中 PI3K/Akt 自噬信号通路相关蛋白的 必需蛋白和自噬通路的反应中间体，参与调控自噬囊泡
表达情况 的形成和自噬的启动，与其他自噬相关蛋白相互作用，
与对照组比较，gracillin 2 μmol/L组细胞中 PI3K 蛋 直接或间接影响自噬及肿瘤的反馈调节，该蛋白表达下
[11]
白的磷酸化水平和gracillin 1、2 μmol/L组细胞中Akt蛋 调或缺失会导致自噬功能受损 。p62作为机体重要的
白的磷酸化水平均显著降低（P＜0.05）。结果见图6。 自噬调控因子，可将自噬与其他信号通路联系起来，通

· 916 · China Pharmacy 2024 Vol. 35 No. 8 中国药房 2024年第35卷第8期