Page 21 - 《中国药房》2024年8期

细胞状态受影响太大，故根据作用 24 h 的细胞存活率
计算 IC50，结果显示，gracillin 作用 24 h 的 IC50 为 2.55
μmol/L。本研究根据上述 IC50值，在确保大部分细胞存
活的条件下，将后续机制研究的 gracillin 梯度浓度依次
设置为0.25、0.5、1、2 μmol/L，作用时间为24 h。
100 作用12 h
a 作用24 h
a b
75 b 作用48 h A.对照组 B. gracillin组
细胞存活率/% 50 b b b 图2 各组A549细胞中自噬小体形成情况的显微图
红色箭头：双层膜结构的自噬小体。

25 b 度的升高，膜上的 GFP-LC3 绿色荧光斑点增多，表明该
b
成分能诱导细胞产生自噬，有一定的浓度依赖趋势。结
0
0（正常对照） 1 2 3 4 果见图3。
gracillin浓度/（μmol/L）
a：与正常对照组比较，P＜0.05；b：与正常对照组比较，P＜0.01。 3.4 A549细胞中FAM102A mRNA和蛋白的表达情况
图1 gracillin对A549细胞存活率的影响 与对照组比较，gracillin 0.5、1、2 μmol/L 组细胞中
3.2 A549细胞自噬小体形成情况
FAM102A mRNA 和蛋白的表达水平均显著升高（P＜
对照组A549细胞结构完整，未见明显异常；gracillin
0.01）。结果见图4。
组 A549 细胞胞浆内可见含双层膜结构的自噬小体，同
3.5 A549细胞中自噬相关蛋白的表达情况
时可见含多层膜结构的自噬泡以及细胞器碎片。结果
与对照组比较，gracillin 1、2 μmol/L 组细胞中 p62
见图2。
3.3 A549 细胞中 GFP-LC3 在自噬小体膜上的聚集 蛋白的表达水平均显著降低，Beclin-1 蛋白的表达水平
情况 均 显 著 升 高（P＜0.05）；gracillin 2 μmol/L 组 细 胞 中
与对照组比较，gracillin 不同浓度组细胞自噬小体 LC3B- Ⅱ/LC3B- Ⅰ 比 值 显 著 升 高（P＜0.01）。 结 果
膜上可见明显的GFP-LC3绿色荧光斑点，且随着药物浓 见图5。

GFP-LC3荧光

DAPI

合并

对照组 gracillin 0.25 μmol/L组 gracillin 0.5 μmol/L组 gracillin 1 μmol/L组 gracillin 2 μmol/L组
箭头：GFP-LC3绿色荧光斑点。
图3 各组A549 细胞中GFP-LC3在自噬小体膜上聚集的激光共聚焦图

中国药房 2024年第35卷第8期 China Pharmacy 2024 Vol. 35 No. 8 · 915 ·