Page 82 - 《中国药房》2024年4期

干预9 h，LPS组细胞先用无血清DMEM培养基干预6 h 3.3.2 绣球藤提取物对细胞上清液中 NO、PGE2、TNF-
后再加入200 ng/mL LPS继续干预3 h，各药物组先用含 α、IL-6、MCP-1含量的影响
相应质量浓度药物的无血清 DMEM 培养基干预 6 h 后 与正常对照组比较，LPS 组细胞上清液中 NO、
再加入200 ng/mL LPS继续干预3 h。收集各组细胞，以 PGE2、TNF-α、IL-6、MCP-1 含量均显著升高（P＜0.01）；

PBS漂洗，于室温下在4%多聚甲醛中固定10 min；再用 与LPS组比较，绣球藤提取物25、50 μg/mL组细胞上清
PBS 漂洗后，以山羊血清于 37 ℃下封闭 1 h；吸干，滴加 液中 NO 含量和绣球藤提取物各质量浓度组细胞上清
p65 一抗（稀释比例为 1∶400），4 ℃下避光孵育过夜； 液中 PGE2、TNF-α、IL-6、MCP-1 含量均显著降低（P＜
用 PBS 漂洗后，加入 FITC 标记的 IgG 二抗（稀释比例为 0.05 或 P＜0.01），且有一定的浓度依赖趋势。结果
1∶50），37 ℃下避光孵育 1 h；以 PBS 漂洗，加入 DAPI 试
见表2。
剂避光孵育 2 min；再用 PBS 漂洗后，滴加防荧光淬灭
表2 绣球藤提取物对细胞上清液中 NO、PGE2、TNF-
剂，使用激光共聚焦显微镜观察 p65 蛋白的核转移情况
α、IL-6、MCP-1含量的影响（x±s，n＝3）
（p65蛋白呈绿色荧光，细胞核呈蓝色荧光）。
组别 NO/（μmol/L） PGE 2/（pg/mL） TNF-α/（pg/mL） IL-6/（pg/mL） MCP-1/（pg/mL）
2.5 统计学方法 正常对照组 1.64±0.68 128.79±8.97 382.03±9.32 23.35±2.12 784.44±85.61
a
采用 SPSS 22 软件对数据进行统计分析。数据以 LPS组 15.25±1.13 a 633.52±30.18 a 3 041.56±184.24 209.45±7.14 a 1 639.15±121.34 a
b
绣球藤提取物 15.17±1.31 501.85±32.54 b 2 140.96±262.14 162.54±2.93 b 1 451.14±77.09 c
x±s 表示，多组间比较应用单因素方差分析，进一步两
12.5 μg/mL组
两比较采用 LSD-t 检验（方差齐）或 Dunnett’s T3 检验 绣球藤提取物 11.91±0.79 b 368.71±34.99 b 1 640.46±64.23 b 124.07±5.44 b 1 098.95±37.66 b
25 μg/mL组
（方差不齐）。检验水准α＝0.05。
绣球藤提取物 6.27±0.79 b 260.60±54.96 b 1 148.61±86.81 b 102.88±11.96 b 961.18±56.76 b
3 结果 50 μg/mL组
3.1 绣球藤提取物对小鼠耳廓肿胀的影响 a：与正常对照组比较，P＜0.01；b：与LPS组比较，P＜0.01；c：与
与对照组比较，阿司匹林组和绣球藤提取物高剂量 LPS组比较，P＜0.05。
组小鼠的耳肿胀度均显著降低（P＜0.05 或 P＜0.01）。 3.3.3 绣球藤提取物对细胞中iNOS、COX-2、p65、p-p65
结果见表1。 蛋白表达的影响
表1 绣球藤提取物对小鼠耳廓肿胀和大鼠肉芽肿的影 与正常对照组比较，LPS 组细胞中 iNOS、COX-2 蛋
响（x±s） 白的相对表达量和 p-p65/p65 均显著升高（P＜0.01）；与
组别 小鼠耳廓肿胀度（n＝12）/mg 大鼠肉芽净重（n＝10）/mg LPS 组比较，绣球藤提取物各质量浓度组细胞中 iNOS、
对照组 17.4±4.4 28.0±8.6
阿司匹林组 11.3±4.5 a 17.2±6.9 a COX-2 蛋 白 的 相 对 表 达 量 和 p-p65/p65 均 显 著 降 低
绣球藤提取物低剂量组 18.8±5.2 24.9±5.2 （P＜0.01）；而 p65 蛋白的相对表达量组间比较差异均
绣球藤提取物中剂量组 14.0±4.6 20.4±5.4 b
绣球藤提取物高剂量组 13.1±4.2 b 21.7±2.8 b 无统计学意义（P＞0.05）。结果见图1、图2。
a：与对照组比较，P＜0.01；b：与对照组比较，P＜0.05。
3.2 绣球藤提取物对大鼠肉芽肿的影响 iNOS 130 kDa
与对照组比较，阿司匹林组和绣球藤提取物中、高 COX-2 73 kDa
剂量组大鼠的肉芽净重均显著降低（P＜0.05 或 P＜
GAPDH 37 kDa
0.01）。结果见表1。
Ⅰ Ⅱ Ⅲ Ⅳ Ⅴ
3.3 绣球藤提取物对 LPS 诱导 RAW264.7 细胞炎症损 A. iNOS和COX-2
伤的影响 p65 65 kDa
3.3.1 绣球藤提取物的细胞毒性
p-p65 65 kDa
绣球藤提取物 12.5、25、50 μg/mL 组细胞的 OD 值
（2.79±0.12、2.74±0.11、2.76±0.10）与 正 常 对 照 组 β-actin 43 kDa
（2.78±0.11）比较，差异均无统计学意义（P＞0.05，n＝ Ⅰ Ⅱ Ⅲ Ⅳ Ⅴ
B. p65和p-p65
10），而绣球藤提取物 100、200 μg/mL 组细胞的 OD 值 Ⅰ：正常对照组；Ⅱ：LPS组；Ⅲ：绣球藤提取物12.5 μg/mL组；Ⅳ：
（2.32±0.12、1.80±0.14）均较正常对照组显著降低（P＜ 绣球藤提取物25 μg/mL组；Ⅴ：绣球藤提取物50 μg/mL组。
0.01，n＝10）。因此，本研究后续实验采用 12.5、25、50 图1 绣球藤提取物对细胞中iNOS、COX-2、p65、p-p65
μg/mL作为绣球藤提取物的干预浓度。 蛋白表达影响的电泳图

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