Page 80 - 《中国药房》2024年4期

绣球藤是毛茛科 Ranunculaceae 铁线莲属 Clematis （tumor necrosis factor-α，TNF-α）、白细胞介素6（interleu‐
植物毛茛状铁线莲 Clematis ranunculoides Franch. 的干 kin-6，IL-6）、单核细胞趋化蛋白1（monocyte chemotactic
燥全草，主要分布于我国云南西北部、四川西南部、广西 protein-1，MCP-1）酶联免疫吸附测定（ELISA）试剂盒
西北部、贵州西南部和西藏喜马拉雅地区，具有良好的 （批号均为 2210-1）均购自深圳市达科为生物技术股份
[1]
药用价值和观赏价值 。该药始载于《滇南本草》，以全 有限公司；前列腺素E2 （prostaglandin E2，PGE2 ）ELISA试
草或根入药，味苦、淡、微辛，性微寒，具有清热解毒、利 剂盒（批号 J17011754）购自武汉华美生物工程有限公
尿、祛瘀通络的功效。然而，目前关于绣球藤的研究有 司；一氧化氮（nitric oxide，NO）试剂盒（批号 20221121）
限，其药用价值并未得到充分发掘。 购自南京建成生物工程研究所；BCA蛋白浓度测定试剂
铁线莲属植物分布广泛，我国约有150种，包括威灵 盒（批号22343569）购自北京兰杰柯科技有限公司；兔源
仙、东北铁线莲、小木通等。该属植物的主要化学成分 甘油醛-3-磷酸脱氢酶（GAPDH）、β-肌动蛋白（β-actin）、
包括皂苷类、黄酮类、木脂素类、香豆素类和生物碱类 诱导型一氧化氮合酶（inducible nitric oxide synthase，
等，其中皂苷类成分以齐墩果烷型五环三萜为主，黄酮 iNOS）、p65、磷酸化p65（phosphorylated p65，p-p65）单克
[2]
类成分以黄酮糖苷为主 。目前，同属植物威灵仙的相 隆 抗 体（批 号 分 别 为 5174S、4970S、13120S、8242T、
[3]
关研究较为多，其抗炎活性明确 。作为铁线莲属植物 3033T）均购自美国 CST 公司；兔源环氧合酶 2（cyclo‐
的一员，本课题组推测绣球藤的药理活性亦有相似之 oxygenase-2，COX-2）单克隆抗体、辣根过氧化物酶标记
处。基于此，本研究从抗炎角度出发，通过二甲苯致小 的 山 羊 抗 兔 IgG 二 抗（批 号 分 别 为 100022L-13、
鼠耳肿胀实验和大鼠棉球肉芽肿实验评价绣球藤对急、 GR3366929-3）均购自英国 Abcam 公司；异硫氰酸荧光
慢性炎症的抑制活性，并探讨绣球藤对脂多糖（lipopoly‐ 素（fluorescein isothiocyanate，FITC）标 记 的 山 羊 抗 兔
saccharide，LPS）诱导的小鼠巨噬细胞RAW264.7炎症反 IgG 二抗（批号 BJ07284902）购自北京博奥森生物技术
应的改善作用及可能机制，挖掘其药用价值，为绣球藤 有限公司；4′，6-二脒基-2-苯基吲哚（DAPI）试剂（批号

的进一步开发提供实验依据。 20210830）购自北京索莱宝科技有限公司。
1 材料 1.3 实验动物
1.1 主要仪器 SPF 级雄性昆明小鼠（体重 18～20 g，共 60 只）和
本研究所用主要仪器有 CCL-170A-8 型 CO2恒温培 SPF 级雄性 SD 大鼠（体重 180～220 g，共 50 只）均购自
养箱（新加坡 ESCO 公司），LSM900 型激光共聚焦显微 斯贝福（北京）生物技术有限公司，动物生产许可证号均
镜、Axio Observer 3 型荧光显微镜（德国 Carl Zeiss 公 为SCXK（京）2019-0010。上述动物均在SPF级环境（温
司），Multiskan GO型全波长酶标仪（美国Thermo Fisher 度20～26 ℃，相对湿度40%～70%，每12 h明暗交替）下
Scientific 公司），Mini-Protean 小型垂直电泳槽、Mini 饲养，自由饮水、进食。本研究所涉及的实验操作均符
Trans-Blot 转印系统（美国Bio-Rad公司），WD-9423B型 合云南中医药大学实验动物伦理规定，并经过该校动物
®
化学发光分析仪（北京六一生物科技有限公司）等。 实验伦理审查委员会批准（编号R-062023071）。
1.2 主要药品与试剂 1.4 细胞株
绣球藤药材采自云南省大理、丽江等地，经云南中 小鼠巨噬细胞RAW264.7购自中国科学院细胞库。
医药大学中药学院张洁教授鉴定为毛茛科铁线莲属植 2 方法
物毛茛状铁线莲C. ranunculoides Franch.的全草。 2.1 绣球藤提取物的制备
阿司匹林肠溶片（批号 BJ71068，规格 100 mg）购自 取绣球藤药材适量，粉碎，加 10 倍量水，提取 1.5

意大利Bayer S.p.A.；LPS、二甲基亚砜（DMSO）、MTT试 h×2次，合并提取液，抽滤，减压浓缩后，冷冻干燥，得绣
剂（批号分别为 059M4031V、WXBB8079V、2031162）均 球藤提取物粉末（得率15.8%）。经紫外分光光度法测定
购自美国Sigma公司；二甲苯（批号220111）购自四川西 （平行 3 次），其中含总皂苷（24.57±0.70）%、总黄酮
陇科学有限公司；磷酸盐缓冲液（PBS）、DMEM培养基、 （1.53±0.10）%。
胎牛血清（批号分别为 2436350、2522571、1997802c）均 2.2 绣球藤提取物对二甲苯致小鼠耳廓肿胀的影响
购自美国 Gibco 公司；RIPA 裂解液、特超敏 ECL 化学发 检测
光试剂盒（批号分别为072021211125、P0018AM）均购自 取昆明小鼠，按体重随机分为对照组、阿司匹林组
上海碧云天生物技术股份有限公司；肿瘤坏死因子 α （阳性对照，0.25 g/kg，以 0.5% 羧甲基纤维素纳为溶剂）

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