Page 86 - 《中国药房》2024年4期
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X射线是一种具有极短波长的电磁辐射，已被广泛                          SCXK（鄂）2020-0018。小鼠在 SPF 环境中饲养，室温
          用于医学成像诊断和肿瘤治疗中。然而 X 射线的电离                           20～26 ℃，相对湿度40%～70%，昼夜明暗交替12 h；所
          辐射会对患者的正常组织产生巨大持久的损伤，引发放                            有动物均自由食用灭菌饲料、饮用灭菌水。本实验方案
          射性口腔炎、放射性肺炎、放射性直肠炎等副反应，极大                           经首都医科大学附属北京中医医院实验动物福利伦理
          地影响患者的生存质量，因此辐射前后及时给予辐射防                            委员会批准（批准文号BJTCM-M-2022-10-02）。
          护药物是减轻患者正常组织辐射损伤的必要措施。                              2 方法
              氨磷汀是目前已知防护效果最好的辐射防护剂，对                          2.1 分组、造模与给药
          造血系统和胃肠辐射损伤防护的剂量降低系数分别为                                 将 30 只小鼠在 SPF 环境中适应性喂养 7 d 后，于照
                  [1]
          2.7 和 1.8 ，并已作为细胞保护剂被美国 FDA 批准用于                    射前24 h称重并随机分为正常对照组、模型组和氨磷汀
          减轻卵巢癌或肺癌患者使用顺铂后引起的肾脏毒性和                             组，每组10只。氨磷汀组小鼠腹腔注射氨磷汀150 mg/kg
                                     [2]
          头颈癌患者放疗导致的口干症 。已有研究证实，氨磷                           （参考前期氨磷汀的毒理研究和辐射防护效果、临床应
          汀经转化后可形成活性物质 WR-1065 及 WR-33278，其                   用剂量等因素，选择毒性反应较低的剂量），正常对照组
          辐射防护机制主要是清除射线产生的氧自由基，增强                             和模型组小鼠腹腔注射等体积生理盐水。给药 30 min
          DNA保护和修复功能，消耗细胞内氧分子 。                               后，将模型组和氨磷汀组小鼠置于生物学 X 射线辐照
                                              [3]
              人体肠道微生物菌群可以影响宿主发育、代谢、免                          仪中进行一次性全身照射，照射剂量 4 Gy，照射剂量率
          疫等多方面生理功能，微生物菌群稳态平衡与肠炎、肥                            1 Gy/min，辐照距离 180 mm。照射后尽快将小鼠送回
                                    [4]
          胖、神经系统疾病等密切相关 。肠道微生物还可以影                            SPF环境中。
          响宿主对电离辐射的敏感性和病理反应，大剂量急性辐                            2.2 一般情况观察和外周血象检测
          射损伤和低剂量慢性辐射损伤时均可见肠道菌群组成                                 观察并记录小鼠照射后 14 d 内的死亡情况。各组
                      [5]
          发生明显变化 。同时，电离辐射亦会导致肠道菌群的                            小鼠分别于照射前 2 h 和照射后第 1、4、7、10、14 天取血
          衍生物发生改变，而这些衍生物往往参与了辐射损伤引                            10 μL，加兽用全自动血液细胞分析仪稀释液10 μL后，
                                 [6]
          起的多种细胞功能的调节 。因此，调节肠道微生态平                            检测小鼠外周血中白细胞、血小板和红细胞计数，分析
          衡有望成为一种新的减轻机体辐射损伤的治疗策略。                             照射后第7天各类白细胞（中性粒细胞、淋巴细胞、单核
          本研究拟采用16S rRNA扩增子测序技术探究氨磷汀对                         细胞）的比例变化。
          急性辐射损伤小鼠肠道菌群的影响，从肠道微生物菌群                            2.3 小鼠粪便标本采集和肠道菌群基因测序
          调节角度研究氨磷汀的辐射防护作用机制。                                     照射后第 7 天，采用应激性排便法收集每组 3 只小
          1 材料                                                鼠的新鲜粪便，并置于灭菌冻存管中，－80 ℃保存、备
          1.1 主要仪器                                            用。采用DNA Kit试剂盒提取粪便样本的总DNA，用超
              本研究所用主要仪器包括 Nanodrop  2000 型超微                  微量分光光度计测定 DNA 浓度和纯度，对提取所得细
                                             TM
          量分光光度计（美国 Thermo Fisher Scientific 公司）、             菌DNA的16S rRNA基因V3～V4区进行PCR扩增。扩
                     TM
          QuantiFluor -ST 微型荧光计（美国 Promega 公司）、               增引物序列为：正向引物 5′-CCTACGGGNGGCWG-
          GeneAMP® 9700型聚合酶链式反应（PCR）仪（美国ABI                   CAG-3′，反 向 引 物 5′-GGACTACHVGGGTWTCTAAT-
          公司）、BC-2800vet型兽用全自动血液细胞分析仪（深圳                      3′；产物大小为 465 bp。利用含 2% 溴化乙锭的琼脂糖
          迈瑞动物医疗科技股份有限公司）、RS2000 Pro225型生                     进行凝胶电泳检验 PCR 扩增产物，用 AxyPrep DNA 凝
          物学X射线辐照仪（美国Rad Source公司）。                           胶回收试剂盒切胶回收 DNA 产物并纯化，产物使用
          1.2 主要药品与试剂                                         QuantiFluor -ST微型荧光计进行DNA定量测定。使用
                                                                       TM
              氨磷汀对照品（批号 A6493，纯度 98%）购自上海士                    Nextera XT DNA Sample Preparation Kit 建库试剂盒构
          锋生物科技有限公司；TIANamp Stool DNA Kit 试剂盒                 建测序文库并经质检后，用 Illumina NovaSeq 6000 测序
         （批号 DP328）购自天根生化科技（北京）有限公司；                          平台对文库进行 PE250 双端测序。原始序列数据经质
          Phusion 高保真 DNA 聚合酶（批号 F630L）购自美国                   控、去噪、拼接、去嵌合等处理后进行DADA2方法聚类，
          Thermo Fisher Scientific公司；AxyPrep DNA凝胶回收试         默认以100%相似度将序列聚类成为操作分类单元（ope-
          剂盒（批号 AP-GX-50）购自美国 Axygen 公司；Nextera               rational taxonomic units，OTUs）。根据聚类结果对OTUs
          XT DNA Sample Preparation Kit 建库试剂盒（批号 FC-          进 行 单 样 本 的 多 样 性 分 析（α 多 样 性 分 析）和 基 于
          131-1024）购自美国Illumina公司。                            UniFrac算法的各组样本之间的多样性分析[β多样性分
          1.3 动物                                              析 ，利 用 主 坐 标 分 析（principal  co-ordinates  analysis，
              SPF 级 C57BL/6J 小鼠 30 只，雄性，体重（20±2）g，            PCoA）显示样本微生物组模式]。根据分类学信息，在各
          购自湖北省实验动物研究中心，实验动物生产许可证号                            分类水平上完成群落结构的统计分析，利用线性判别分


          · 460 ·    China Pharmacy  2024 Vol. 35  No. 4                               中国药房  2024年第35卷第4期
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