Page 34 - 《中国药房》2024年2期
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支气管肺发育不良（bronchopulmonary dysplasia，            购自美国 Proteintech 公司；超氧化物歧化酶（superoxide
          BPD）是多发于早产儿的慢性肺损伤性疾病，该病具有                           dismutase，SOD）、过氧化氢酶（catalase，CAT）、丙二醛
          较高的病死率，使存活患儿多遗留有明显的肺功能不全                           （malondialdehyde，MDA）ELISA 试剂盒（批号分别为
          并伴随生长发育迟滞，严重威胁患儿的生活质量                       [1―2] 。  20211016、20211112、20211218）均购自南京建成生物工
          研究证实，在机械通气及氧疗过程中，吸入氧浓度过高                            程研究所；β-肌动蛋白（β-actin）抗体（批号 191050722）、
          及氧疗时间较长均可导致早产儿体内释放大量的活性                             羊抗兔二抗（批号 139931）均购自北京中杉金桥生物技
          氧和自由基，引发白细胞介素 6（interleukin-6，IL-6）、肿               术有限公司；DAB 显色剂（批号 G32415）购自广州展晨
          瘤坏死因子α（tumor necrosis factor-α，TNF-α）等炎症因           生物科技有限公司；RIPA 裂解液（批号 20220416）购自
          子释放量明显升高，并进一步诱导炎症反应及氧化应激                            武汉伊莱瑞特生物科技有限公司；Trizol 试剂（批号
          反应的发生，从而引起肺损伤，甚至进展为BPD                   [2―3] 。但   NR0002）购自北京康瑞纳生物科技有限公司。
          目前关于BPD的病因及发生机制尚未完全揭示，且临床                           1.3 实验动物
          缺乏切实有效的预防及治疗手段。因此探究 BPD 有效                              新生SD大鼠60只，2日龄，雌雄各半，体重5～10 g，
          的预防与治疗方法具有重要意义。                                     购自北京希诺谷生物科技有限公司，实验动物生产许可
              阿奇霉素是一种半合成的 15 元环结构的大环内酯                        证号 SCXK（京）2021-0001。所有大鼠饲养于 SPF 级动
          类抗生素，其在血液中的半衰期长达 35～48 h，药效持                        物实验房，温度22～25 ℃，相对湿度40%～60%，均自由
          续时间较长，具有良好的抗菌药物后效应，在免疫调控                            摄食、饮水，隔日更换垫料。本实验方案经成都市妇女
                                  [4]
          及抗炎方面发挥重要的作用 。目前已有研究证实了阿                            儿童中心医院动物实验伦理委员会批准通过[批件号：
          奇霉素在预防及治疗BPD方面的作用，然而其具体作用                           科研伦审2023（51）-2号]。
          机制尚未确切 。故基于上述背景，本研究考察了阿奇                            2 方法
                      [5]
          霉素对新生大鼠 BPD 的改善作用及机制，旨在为 BPD                        2.1 分组、建模与给药

          的预防和治疗提供参考。                                             将 60 只新生 SD 大鼠随机分为阴性对照（NC）组、
          1 材料                                                BPD 组、阿奇霉素组、布地奈德组（阳性对照），每组 15
          1.1 主要仪器                                            只，其中NC组大鼠正常呼吸空气，其余3组大鼠通过在
              本研究所用主要仪器包括 BH-5160CRP 型全自动                     高浓度氧（保持氧含量＞90%）中暴露 14 d 构建 BPD 大
                                                                    [6]
          血液分析仪（南京贝登医疗股份有限公司）、PE-300型显                        鼠模型 。待建模成功后，阿奇霉素组大鼠按200 mg/kg
                                                                                   [6]
          微镜（广州科适特科学仪器有限公司）、HD-3001型核酸                        腹腔注射阿奇霉素注射液 ，布地奈德组大鼠按1.5 mg/kg
                                                                                          [2]
          蛋白浓度检测仪（上海金鹏分析仪器有限公司）、Light                         雾化吸入布地奈德混悬液20 min ，同时2组均予以等量
          Cycler480型实时荧光定量聚合酶链式反应（PCR）仪（瑞                     生理盐水灌胃，每日 1 次，连续 14 d；BPD 组和 NC 组大
          士Roche公司）、DW-86L959BPT型80 ℃超低温冰箱（杭                  鼠不做任何处理。
          州诺丁科学器材有限公司）、GenoSens 220 型凝胶成像                     2.2 肺组织病理学观察
          系统（上海勤翔科学仪器公司）。                                         每组各取 5 只大鼠，处死，分离肺组织，一部分置
          1.2 主要药品与试剂                                         于－80 ℃超低温冰箱中保存，另一部分由4%多聚甲醛
              阿 奇 霉 素 注 射 液（规 格 2  mL∶0.1  g，国 药 准 字          固定。取出固定的肺组织，通过石蜡包埋切片，然后分
          H20051466）购自亚宝药业集团股份有限公司；吸入用布                       别放入二甲苯及梯度乙醇（70%、80%、90%、100%）中脱
          地奈德混悬液（阳性对照药，规格2 mL∶1 mg，国药准字                       蜡至水，苏木素染色，磷酸盐缓冲液冲洗，经盐酸、乙醇
          H20203649）购自深圳太太药业有限公司/健康元海滨药                       分化后再次通过梯度乙醇（100%、90%、80%、70%）脱
          业有限公司；苏木精-伊红（HE）染液（批号 G1005）购自                      水，二甲苯透明处理后封片。在PE-300型显微镜下观察
          武汉赛维尔生物科技有限公司；兔源血管内皮生长因子                            各组大鼠的肺组织病理学变化，并进一步通过 Image J
         （vascular endothelial growth factor，VEGF）单克隆抗体       软件检测放射状肺泡计数和肺泡平均截距。
         （批号ab32152）、兔源缺氧诱导因子1α（hypoxia-inducible             2.3 支气管肺泡灌洗液中白细胞计数检测
          factor-1α，HIF-1α）单克隆抗体（批号 ab129733）、兔源                  麻醉各组剩余 10 只大鼠，由大鼠气管插入细静脉
          HIF-2α单克隆抗体（批号2608）均购自武汉益普生物科技                      管，注入生理盐水，然后收集支气管肺泡灌洗液（bron‐
          有限公司；TNF-α、IL-6、IL-1β酶联免疫吸附测定（ELISA）                choalveolar lavage fluid，BALF），离心后留取沉淀并通过
          试剂盒（批号分别为 KE1002、KE10007、19811-1-AP）均               全自动血液分析仪检测其中白细胞计数。


          · 156 ·    China Pharmacy  2024 Vol. 35  No. 2                               中国药房  2024年第35卷第2期
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