Page 26 - 《中国药房》2023年23期

P＜0.01）. In the cell experiment in vitro， the expressions of the above-mentioned proteins and genes in the cells treated with
YSTLF at 125， 250 and 500 μg/mL for 24 hours were consistent with those in the animal experiment； there was no significant
difference in the expressions of the above-mentioned proteins and genes between inhibitor control group and 250， 500 μg/mL
YSTLF groups （P＞0.05）. CONCLUSIONS YSTLF can regulate the expression of transcription factor SREBPs， so as to inhibit
the high expression of fatty acid and cholesterol synthesis-related genes， promote the degradation of TC and TG， improve the
abnormality of lipid metabolism and inhibit lipid accumulation， thus playing the role of lipid-lowering.
KEYWORDS Yishen tongluo formula； abnormal lipid metabolism； sterol regulatory element binding proteins； lipid accumulation；
transcription factors

脂质代谢异常是指脂类成分在合成到分解过程中 司），Forma Series Ⅱ Water Jacket 型二氧化碳细胞培养
出现异常，导致脂质蓄积，血浆中脂蛋白的水平、结构和 箱（美国Thermo Fisher Scientific公司）。
功能发生改变 [1―2] 。脂质代谢异常是脂肪性肝病、动脉 1.2 主要药品与试剂
粥样硬化、糖尿病及其并发症、肥胖等代谢相关疾病的 熟 地 黄（批 号 HNTCM-20220519）、黄 芪（批 号
重要致病因素，已经严重影响人们的生活质量 。脂质 HNTCM-20220520）、山茱萸（批号 HNTCM-20220521）、
[3]
代谢异常与固醇调节元件结合蛋白（sterol regulatory 丹参（批号 HNTCM-20220522）、大黄（批号 HNTCM-
element binding proteins，SREBPs）及其调控的下游靶基 20220523）、鬼箭羽（批号 HNTCM-20220524）、血竭（批
因水平密切相关 [4―5] 。SREBPs亚型中SREBP-1c主要调 号HNTCM-20220525）等饮片均购自中国仁和制药有限
节游离脂肪酸合成并参与胰岛素介导的葡萄糖代谢和 公司，由河南中医药大学药学院王辉教授鉴定为真品。
胰岛素抵抗 [6―7] ；SREBP-2 是胆固醇和脂质从头生物合 DMEM培养基（批号10013CVRC）购自美国Corning
成的主要转录调节因子，其靶基因编码多种关键脂肪生 公司；F-12K 培养基（批号 2360245）购自美国 Gibco 公
TM
成酶 [8―9] 。 司；低脂血清购自美国Kalen Biomedical公司；BeyoRT
中医理论认为肾虚血瘀与脂质代谢异常密切相关， Ⅲ cDNA 第一链合成试剂盒（批号 103118190503）购自
肾虚衰则脏腑功能失常，阴阳失调，气化失司，开阖失 碧云天生物技术公司；25-羟基胆固醇（25-hydroxycho‐
度，瘀血壅积于内，导致脂质代谢紊乱 [10―11] 。治疗则当 lesterol，25HC）（批号 113134）购自美国 Med Chem Ex‐
补益肾脾、健运理气、活血化瘀、祛痰化脂。益肾通络方 press 公司；潮霉素 B（批号 V900372）购自德国 Roche 公
是基于以上组方理论形成的中药验方，由丹参、黄芪、山 司；甘油三酯（triglyceride，TG）、总胆固醇（total choles‐
茱萸、大黄、熟地黄、血竭、鬼箭羽7味中药组成。方中熟 terol，TC）、低密度脂蛋白（low-density lipoprotein，LDL）
地黄益肾填精，为君药；黄芪甘温而益元气、补肾助脾、 和高密度脂蛋白（high-density lipoprotein，HDL）试剂盒
内消痰脂，山茱萸配伍补益肝肾而助阴阳，二者共为臣 （ 批 号 分 别 为 E-BC-K261-M、E-BC-K109-M、E-EL-
药；丹参、大黄逐瘀祛痰，佐以鬼箭羽通络兼化痰脂，三 M1363c、E-EL-M1402c）均购自武汉 ElabScience 公司；
TM
者共为佐药；血竭行瘀消脂，又善散瘀生新，为使药。诸 Power Up SYBR Green PCR Master Mix试剂盒（批号
TM
药合用，共奏益肾通络、祛痰化脂之功，主要用于肾虚血 00837276）购自美国 Thermo Fisher Scientific 公司；鼠源
瘀所致脂质代谢异常的治疗。 β-肌动蛋白（β-actin）单克隆抗体（货号sc8432）购自美国
现代药理学研究表明，益肾通络方中黄芪、丹参、大 Santa Cruz 公 司 ；鼠 源 SREBP-1 单 克 隆 抗 体 、兔 源
黄等均具有改善脂代谢异常的作用，并且在临床及基础 SREBP-2 多克隆抗体（货号 ab3259、ab30682）均购自英
实验中观察到其改善脂质代谢的功效显著 [10―13] 。然而 国Abcam公司；辣根过氧化物酶（HRP）标记的山羊抗兔
益肾通络方改善脂质代谢异常的作用及分子机制仍有 免疫球蛋白G（IgG）二抗、HRP标记的山羊抗小鼠IgG二
待进一步确证和阐明。因此，本研究利用 C57BLKS/J 抗（货号 SA00001-2、SA00001-1）均购自武汉 Proteintech
（db/db）转基因小鼠及人肝癌细胞HepG2分别建立体内 公司。
外脂质代谢异常模型，探究益肾通络方调节脂质代谢异 1.3 动物
常、改善脂质蓄积的作用及可能的分子机制，以期为益 本研究所用动物为 8 周龄雄性 C57BLKS/J（db/db）
肾通络方改善脂质代谢异常提供科学依据。 小鼠和同窝对照小鼠（db/m），共 60 只，购自江苏集萃药
1 材料 康生物技术股份有限公司，实验动物生产许可证号为
1.1 主要仪器 SCXK（苏）2018-0008。小鼠购入后饲养于河南中医药
本研究所用的主要仪器有：Eclipset S100 型倒置显 大学动物实验中心动物房中。饲养环境温度为（26±
微镜（日本 Nikon 公司），LightCycler96 型实时荧光定量 3） ℃，湿度为（55±5）%，光照/黑暗周期为12 h/12 h。适
PCR 仪（美国 Roche 公司），PAC300 型电泳仪、转膜仪、 应性饲养1周后进行实验。所有动物实验方案均经河南
ChemiDoc XRS 型自动凝胶成像系统（美国 Bio-Rad 公 中医药大学实验动物伦理委员会审查通过（伦理号

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