Page 79 - 《中国药房》2023年22期
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伊布替尼主要由细胞色素 P450 代谢，在相同的服                      2.3 样本前处理
          药剂量下，不同人群可能存在较大的浓度差异，且这种                               取血浆样本780 μL，分别加入“2.2.2”项下质控溶液
          差异无法避免      [4―5] 。有研究认为，较高的伊布替尼药-时                10 μL 和内标工作液 10 μL，再加入水 700 μL，混匀，得
          曲线下面积（area under curve，AUC）与药物不良反应的                载样前样本；取该样本，经固相萃取柱（先加入甲醇 1
                  [6]
          发生有关 。因此，该药的峰浓度可用于预测患者是否                           mL，再加入水1 mL活化），依次用水1 mL、甲醇-水溶液
          存在较高的药物毒性风险。虽然有研究报道了使用液                           （60∶40，V/V）1 mL淋洗，再用甲醇-甲酸溶液（98∶2，V/V）
          相色谱-串联质谱（liquid chromatography-tandem mass         0.5 mL 洗脱 2 次后，收集洗脱液，在 40 ℃下以氮气流吹
          spectrometry，LC-MS/MS）技术检测伊布替尼的血药浓                 干，残渣用甲醇-甲酸溶液（98∶2，V/V）100 μL 复溶，以
            [7]
          度 ，但该方法的设备价格高，操作复杂，很难在医疗机                          12 000 r/min离心10 min，取上清液进样检测。
          构普及。为此，本研究建立了检测人血浆中伊布替尼浓                           2.4 方法学考察
          度的高效液相色谱（HPLC）法，并应用于临床，旨在为伊                        2.4.1 专属性试验
          布替尼的个体化给药及药物毒性风险预测提供参考。                                取 5 份不同来源的空白血浆，不加入质控溶液和内
          1 材料                                               标工作液，其余按“2.3”项下方法处理后，再按“2.1”项下
          1.1 主要仪器                                           色谱条件进样检测，记录色谱图（图 1A）。取空白血
              本研究所用主要仪器包括 1260 Infinity Ⅱ型 HPLC              浆，加入“2.2.2”项下定量下限质量浓度质控溶液（0.8
          仪[安捷伦科技（中国）有限公司]，KDC-1044型低速离心                     μg/mL）及内标工作液，按“2.3”项下方法处理后，再按
          机、HC-3018 型高速离心机（安徽中科中佳科学仪器有                      “2.1”项下色谱条件进样检测，记录色谱图（图 1B）。取
          限公司），XW-80A型涡旋机（海门市其林贝尔仪器制造                        某患者用药（每日服用伊布替尼胶囊1次，每次420 mg，
          有 限 公 司），MG-2200 型 氮 气 吹 干 仪（东 京 EYELA             服药 30 d）2 h 后血浆样本，加入内标工作液，按“2.3”项
          公司）。                                               下方法处理后，再按“2.1”项下色谱条件进样检测，记录
          1.2 主要药品与试剂                                        色谱图（图1C）。结果显示，伊布替尼与内标的保留时间
              伊布替尼对照品（批号S81126，纯度99%）购自上海                    分别约为22.7、11.6 min，空白血浆对目标成分和内标检
          源叶生物科技有限公司；泽布替尼对照品（内标，批号                           测无干扰，表明本方法的专属性良好。
          420076-202001，纯度 99.5%）购自中国食品药品检定研                 2.4.2 线性关系与定量下限考察
          究院；乙腈、甲醇均为色谱级，甲酸、磷酸二氢钾均为分                              取“2.2.2”项下系列标准曲线溶液和内标工作液，按
          析纯，水为注射用无菌用水。                                     “2.3”项下方法处理，得质量浓度分别为10、25、50、100、
          1.3 血浆样本                                           200、400、500 ng/mL 的标准曲线溶液，再按“2.1”项下色
              空白血浆由未使用过伊布替尼或泽布替尼的健康                          谱条件进样检测。以伊布替尼质量浓度为横坐标（x）、
          志愿者提供。提供者均签署了知情同意书。                                伊布替尼峰面积与内标峰面积的比值为纵坐标（y），采
          2 方法与结果                                            用加权最小二乘法进行线性回归，得伊布替尼的回归方
                                                                                      2
          2.1 色谱条件                                           程为 y＝1.041 4x+0.137 9（R ＝0.998 9），表明伊布替尼
              以 Agilent 5 TC-C18 （2）（250 mm×4.6 mm，5 μm）为    检测质量浓度在10～500 ng/mL范围内与峰面积比值的
          色谱柱，乙腈-0.5%磷酸二氢钾溶液（43∶57，V/V）为流动                   线性关系良好。其定量下限为10 ng/mL。
          相；流速为1 mL/min；检测波长为260 nm；柱温为40 ℃；                 2.4.3 准确度与精密度试验
          进样量为20 μL；运行时间为25 min。                                 取“2.2.2”项下质控溶液和内标工作液，按“2.3”项下
          2.2 溶液的配制                                          方法处理，得质量浓度分别为 10、25、200、400 ng/mL 的
          2.2.1 对照品储备液与内标储备液                                 溶液，再按“2.1”项下色谱条件进样检测，每样本平行测
              精密称取伊布替尼、内标对照品各 10.00 mg，分别                    定10份，考察批内精密度；每样本平行测定5份，连续测
          用甲醇溶解并定容至10 mL容量瓶中，制得质量浓度均                         定 3 d，考察批间精密度。将实测质量浓度与理论质量
          为1 mg/mL的对照品储备液和内标储备液。                             浓度进行比较，以相对误差（relative error，RE）考察准确
          2.2.2 系列标准曲线溶液、质控溶液与内标工作液                          度。结果显示，批内、批间精密度试验的 RSD 均不高于
              取“2.2.1”项下对照品储备液 40 μL，加入甲醇 960                12.77%，RE 为－2.14%～6.51%，表明本方法的准确度、
          μL，制得质量浓度为40 μg/mL的伊布替尼工作溶液，再                      精密度良好。结果见表1。
          用甲醇稀释，得质量浓度分别为0.8、2.0、4.0、8.0、16、32、               2.4.4 提取回收率试验
          40 μg/mL 的系列标准曲线溶液（分别以 0.8、2.0、16、32                   取“2.2.2”项下低、高质量浓度的质控溶液（质量浓
          μg/mL作为定量下限、低、中、高质量浓度的质控溶液）。                       度分别为 2.0、32 μg/mL）和内标工作溶液，按“2.3”项下
          取“2.2.1”项下内标储备液20 μL，加入甲醇980 μL，得质                 方法处理后，再按“2.1”项下色谱条件进样检测，记录伊
          量浓度为20 μg/mL内标溶液；取该溶液400 μL，加入甲                    布替尼峰面积与内标峰面积的比值（A1 ）。取空白血浆，
          醇600 μL，得质量浓度为8 μg/mL的内标工作液。                       按“2.3”项下方法处理后，加入相应质量浓度的质控溶液


          中国药房  2023年第34卷第22期                                              China Pharmacy  2023 Vol. 34  No. 22    · 2757 ·
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