Page 21 - 《中国药房》2023年19期
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用 BCA 试剂盒检测各组蛋白浓度,混合蛋白样品和上 表1 各组小鼠体重、肝重和肝脏系数结果(x±s,n=6)
样缓冲液,在95 ℃条件下加热5 min,以充分变性蛋白。 组别 体重/g 肝重/g 肝脏系数/%
空白组 26.99±1.72 1.30±0.05 0.048±0.00
以50 μg蛋白上样,经十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶
NAFLD-HCC组 20.38±2.90 a 1.43±0.12 0.071±0.01 a
电 泳 后 ,转 至 PVDF 膜 ;加 入 LC3、Beclin1、P62 及 DOX组 18.64±2.96 1.02±0.23 b 0.054±0.01 b
GAPDH一抗(稀释比分别为1∶1 000、1∶1 000、1∶1 000、 LGZG组 23.47±1.39 1.14±0.05 b 0.049±0.00 b
DOX+LGZG组 21.73±1.64 1.01±0.11 b 0.047±0.01 b
1∶5 000),4 ℃封闭过夜;以 TBST 洗涤 3 次,每次 15
a:与空白组比较,P<0.05;b:与NAFLD-HCC组比较,P<0.05。
min,加入相应二抗(稀释比为1∶10 000)室温孵育1 h;经
有灰白色肿瘤结节;LGZG组小鼠肝脏表面颜色稍微改
曝光、显影后,应用化学发光成像系统观察,利用 Al‐
善,肿瘤结节数目较干预前减少;DOX组改善效果不明
phaView 凝胶图像分析软件进行图像处理,以 GAPDH
显;DOX+LGZG 组小鼠肝脏表面颜色较干预前有较大
作为内参蛋白,计算目标蛋白与内参蛋白的灰度值比
改善,肿瘤结节数目明显减少。结果见图1。
值,以表示蛋白表达水平。LC3 在细胞中以 LC3Ⅰ和
HE染色结果显示,空白组小鼠肝小叶结构清晰、完
LC3Ⅱ两种形式存在,LC3Ⅱ/LC3Ⅰ的比值表示 LC3 蛋
整,细胞排列整齐,无脂肪变性,未见炎症细胞浸润;
白的表达水平。
NAFLD-HCC 组小鼠肝细胞体积增大,有大量的空泡状
2.9 统计学方法
细胞,炎症细胞大量浸润,脂肪变性明显,部分细胞出现
采用 SPSS 17.0 软件进行统计学处理,计量资料以
气球样变、细胞密度增大、小细胞性增生的病变;LGZG
x±s 表示,多组间数据比较用单因素方差分析,组间两
组小鼠肝脏细胞质内可见细小空泡,炎症细胞浸润减
两比较用LSD-t检验。检验水准α=0.05。
轻;DOX组小鼠肝脏空泡样变及炎症细胞浸润有改善效
3 结果 果但不明显,DOX+LGZG组小鼠肝小叶结构恢复明显,
3.1 小鼠一般情况、体重、肝重及肝脏系数的比较结果 空泡样变及炎症细胞浸润明显减轻。结果见图1。
在模型建立及药物干预期间各组小鼠的饮食、活动 3.3 小鼠肝脏组织纤维化程度的结果
均无明显异常,NAFLD-HCC 组小鼠随着给药时间延长 Masson染色结果(见图2)显示,空白组小鼠肝脏组
活动逐渐减少,精神萎靡,毛发蓬乱无光泽;给药组小鼠 织无明显染色;与空白组比较,NAFLD-HCC 组小鼠肝
整体情况均有改善。实验结束时,与空白组比较, 脏组织癌细胞周围纤维化,视野内有广泛致密的蓝色胶
NAFLD-HCC组小鼠体重显著降低(P<0.05),肝重有上 原沉积,蓝染纤维间隔形成,胶原面积百分比显著增加
升趋势,肝脏系数显著增加(P<0.05);与 NAFLD-HCC (P<0.05),胶原纤维含量增多,纤维化程度加重;与
组比较,DOX组、LGZG组、DOX+LGZG组小鼠肝重和肝 NAFLD-HCC 组比较,LGZG 组、DOX+LGZG 组小鼠肝
脏系数均显著降低(P<0.05)。结果见表1。 脏组织纤维化范围均有所减轻,尤其以 DOX+LGZG 组
3.2 小鼠肝脏组织病理形态学观察结果 小鼠改善最为显著,胶原面积百分比显著降低(P<
肉眼观察结果显示,空白组小鼠肝脏大小正常,表 0.05),胶原纤维含量减少,纤维化程度减轻;与 DOX 组
面光滑,颜色红润,质地柔软;NAFLD-HCC组小鼠肝脏 比较,DOX+LGZG 组小鼠胶原面积百分比显著降低
肿大,边缘钝而厚,表面粗糙,触之有油腻感,仔细观察 (P<0.05),肝脏纤维化程度减轻。
组织形态
病理形态
A.空白组 B. NAFLD-HCC组 C. DOX组 D. LGZG组 E. DOX+LGZG组
图1 各组小鼠肝脏组织形态图及HE染色图
中国药房 2023年第34卷第19期 China Pharmacy 2023 Vol. 34 No. 19 · 2319 ·