Page 21 - 《中国药房》2023年19期
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用 BCA 试剂盒检测各组蛋白浓度，混合蛋白样品和上                         表1 各组小鼠体重、肝重和肝脏系数结果（x±s，n＝6）
          样缓冲液，在95 ℃条件下加热5 min，以充分变性蛋白。                       组别              体重/g        肝重/g      肝脏系数/%
                                                              空白组            26.99±1.72  1.30±0.05  0.048±0.00
          以50 μg蛋白上样，经十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶
                                                              NAFLD-HCC组     20.38±2.90 a  1.43±0.12  0.071±0.01 a
          电 泳 后 ，转 至 PVDF 膜 ；加 入 LC3、Beclin1、P62 及            DOX组           18.64±2.96  1.02±0.23 b  0.054±0.01 b
          GAPDH一抗（稀释比分别为1∶1 000、1∶1 000、1∶1 000、              LGZG组          23.47±1.39  1.14±0.05 b  0.049±0.00 b
                                                              DOX+LGZG组      21.73±1.64  1.01±0.11 b  0.047±0.01 b
          1∶5 000），4 ℃封闭过夜；以 TBST 洗涤 3 次，每次 15
                                                                a：与空白组比较，P＜0.05；b：与NAFLD-HCC组比较，P＜0.05。
          min，加入相应二抗（稀释比为1∶10 000）室温孵育1 h；经
                                                             有灰白色肿瘤结节；LGZG组小鼠肝脏表面颜色稍微改
          曝光、显影后，应用化学发光成像系统观察，利用 Al‐
                                                             善，肿瘤结节数目较干预前减少；DOX组改善效果不明
          phaView 凝胶图像分析软件进行图像处理，以 GAPDH
                                                             显；DOX+LGZG 组小鼠肝脏表面颜色较干预前有较大
          作为内参蛋白，计算目标蛋白与内参蛋白的灰度值比
                                                             改善，肿瘤结节数目明显减少。结果见图1。
          值，以表示蛋白表达水平。LC3 在细胞中以 LC3Ⅰ和
                                                                 HE染色结果显示，空白组小鼠肝小叶结构清晰、完
          LC3Ⅱ两种形式存在，LC3Ⅱ/LC3Ⅰ的比值表示 LC3 蛋
                                                             整，细胞排列整齐，无脂肪变性，未见炎症细胞浸润；
          白的表达水平。
                                                             NAFLD-HCC 组小鼠肝细胞体积增大，有大量的空泡状
          2.9 统计学方法
                                                             细胞，炎症细胞大量浸润，脂肪变性明显，部分细胞出现
              采用 SPSS 17.0 软件进行统计学处理，计量资料以
                                                             气球样变、细胞密度增大、小细胞性增生的病变；LGZG
          x±s 表示，多组间数据比较用单因素方差分析，组间两
                                                             组小鼠肝脏细胞质内可见细小空泡，炎症细胞浸润减
          两比较用LSD-t检验。检验水准α＝0.05。
                                                             轻；DOX组小鼠肝脏空泡样变及炎症细胞浸润有改善效
          3 结果                                               果但不明显，DOX+LGZG组小鼠肝小叶结构恢复明显，
          3.1 小鼠一般情况、体重、肝重及肝脏系数的比较结果                         空泡样变及炎症细胞浸润明显减轻。结果见图1。
              在模型建立及药物干预期间各组小鼠的饮食、活动                         3.3 小鼠肝脏组织纤维化程度的结果
          均无明显异常，NAFLD-HCC 组小鼠随着给药时间延长                           Masson染色结果（见图2）显示，空白组小鼠肝脏组
          活动逐渐减少，精神萎靡，毛发蓬乱无光泽；给药组小鼠                          织无明显染色；与空白组比较，NAFLD-HCC 组小鼠肝
          整体情况均有改善。实验结束时，与空白组比较，                             脏组织癌细胞周围纤维化，视野内有广泛致密的蓝色胶
          NAFLD-HCC组小鼠体重显著降低（P＜0.05），肝重有上                    原沉积，蓝染纤维间隔形成，胶原面积百分比显著增加
          升趋势，肝脏系数显著增加（P＜0.05）；与 NAFLD-HCC                  （P＜0.05），胶原纤维含量增多，纤维化程度加重；与
          组比较，DOX组、LGZG组、DOX+LGZG组小鼠肝重和肝                     NAFLD-HCC 组比较，LGZG 组、DOX+LGZG 组小鼠肝
          脏系数均显著降低（P＜0.05）。结果见表1。                            脏组织纤维化范围均有所减轻，尤其以 DOX+LGZG 组
          3.2 小鼠肝脏组织病理形态学观察结果                                小鼠改善最为显著，胶原面积百分比显著降低（P＜
              肉眼观察结果显示，空白组小鼠肝脏大小正常，表                         0.05），胶原纤维含量减少，纤维化程度减轻；与 DOX 组
          面光滑，颜色红润，质地柔软；NAFLD-HCC组小鼠肝脏                       比较，DOX+LGZG 组小鼠胶原面积百分比显著降低
          肿大，边缘钝而厚，表面粗糙，触之有油腻感，仔细观察                         （P＜0.05），肝脏纤维化程度减轻。







           组织形态











           病理形态




                 A.空白组            B. NAFLD-HCC组          C. DOX组            D. LGZG组          E. DOX+LGZG组
                                        图1 各组小鼠肝脏组织形态图及HE染色图


          中国药房  2023年第34卷第19期                                              China Pharmacy  2023 Vol. 34  No. 19    · 2319 ·
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