Page 26 - 《中国药房》2023年19期
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的抗菌消炎活性目前尚不得知。据文献报道，艾纳香中                            μL。在该色谱条件下，标准品和供试品溶液中艾纳香素
                                         [6]
          艾纳香素的含量最高可达 2.60 mg/g ，但艾纳香素的提                      的保留时间约为11.30 min，其HPLC图见图1（空白对照
          取工艺研究较少，导致其价格昂贵，从而阻碍了艾纳香                            的图谱略）。
          素的开发。因此，本研究采用 Box-Behnken 响应面法优
                                                                    250                 11.303
          化从艾纳香中提取艾纳香素的工艺，并通过体内外实验评                                 200
                                                                    150
          价艾纳香素的抗菌消炎活性，以期为艾纳香的合理利用                                 mAU  100
                                                                     50
         （包括其提取废弃物的回收利用）、新型抗菌消炎药物的                                    0
                                                                       0             2           4         6          8        10       12        14        16       18
          研发，以及进一步实现艾纳香素的工业化生产提供参考。                                                  t/min
                                                                               A.艾纳香素标准品溶液
          1 材料
                                                                    160
          1.1 主要仪器                                                  120
              本研究所用主要仪器包括Agilent 1260型高效液相                         mAU  80
                                                                     40                 11.370
          色谱（HPLC）仪（美国Agilent公司）、SW-CJ-ID型单人净                         0
          化工作台（苏州净化设备有限公司）、ZQLY-180N型振荡                                0             2           4         6          8        10       12        14        16       18
                                                                                     t/min
          培养箱（上海知楚仪器有限公司）、AR1530/C 型电子分                                           B.供试品溶液
          析天平（美国Ohaus公司）等。                                     图1 艾纳香素标准品溶液和供试品溶液的HPLC图
          1.2 主要药品与试剂
                                                              2.1.3 线性关系考察
              艾纳香茎叶购自贵州罗甸县种植户，经贵州大学植
                                                                  精密吸取艾纳香素标准品溶液 4、8、12、16、20 μL，
          物物种鉴定中心王华磊教授鉴定为艾纳香B. balsamifera                    按“2.1.2”项下色谱条件进样检测，记录峰面积。以进样
         （L.） DC. 原植物[鉴定号 2018（033）]；艾纳香素标准品
                                                              量为横坐标（X）、峰面积为纵坐标（Y）进行线性回归，得
         （用于 HPLC 和核磁共振-质谱鉴定，批号 20052223，纯                    回归方程为Y＝449.89X－138.96（R²＝0.998 0）。结果表
          度＞98%）购自上海同田生物技术有限公司；艾纳香素                           明，艾纳香素的进样量在0.31～1.56 μg范围内与峰面积
         （用于抗菌消炎活性检测，纯度＞98%）由贵州省生化工                           线性关系良好。
          程中心自提；地塞米松（批号 201112，纯度 99.3%）购自                    2.1.4 精密度试验
          浙江仙琚制药有限公司；头孢呋辛钠（批号20220804，纯                           精密吸取同一批供试品溶液，按“2.1.2”项下色谱条
          度 99.25%）购自北京索莱宝科技有限公司；化脓链球菌                        件连续进样测定6次，记录峰面积。结果显示，峰面积的
         （ATCC 19615）、金黄色葡萄球菌（ATCC 13565）、无乳链                 RSD为0.75%（n＝6），表明方法精密度良好。
          球菌（ATCC 13813）、变异链球菌（ATCC 25175）、枯草芽                2.1.5 重复性试验
          孢杆菌（ATCC 6633）、藤黄微球菌（ATCC 7468）均购自                      取艾纳香干燥茎叶粉末，按“2.1.1”项下方法平行制
          中国食品药品检定研究院；10%氯化钠胰酪胨大豆肉汤                           备6份供试品溶液，按“2.1.2”项下色谱条件进样检测，记
         （批号200226）购自上海博微生物科技有限公司；其他试                         录峰面积，以外标法计算样品含量。结果显示，样品平
          剂均为国产分析纯。                                           均含量的RSD为1.66%（n＝6），表明方法重复性良好。
          1.3 实验动物                                            2.1.6 稳定性试验
              SPF 级昆明小鼠 200 只，雌雄各半，体重（20±2） g，                    取同一批供试品溶液，分别于室温（25 ℃）放置 0、
          购自斯贝福（北京）生物技术有限公司，动物生产许可证                           4、8、12、24、48 h 后，按“2.1.2”项下色谱条件进样检测，
          号为 SCXK（京）2019-0010。本实验经贵州大学实验动                     记录峰面积。结果显示，峰面积的 RSD 为 0.94%（n＝
          物伦理分委员会审核批准（伦理批件号为 EAE-GZU-                         6），表明供试品溶液在室温下放置48 h内稳定性良好。
          2021-T018）。                                         2.1.7 加样回收率试验
          2 方法与结果                                                 精密量取已知样品含量的同一批供试品溶液 9 份，
          2.1 艾纳香素的含量测定                                       分为 3 组，分别加入 0.1、0.2、0.4 mL 艾纳香素标准品溶
          2.1.1 溶液的制备                                         液，按“2.1.2”项下色谱条件进样检测，记录峰面积，以外
              精密称取艾纳香素标准品适量，以甲醇配制成质量                          标法计算样品含量，并计算加样回收率。结果显示，艾
          浓度为 78 µg/mL 的艾纳香素标准品溶液。精密称取艾                       纳香素的平均加样回收率分别为 99.52%、101.02%、
          纳香干燥茎叶粉末，经超声提取2 h（提取温度40 ℃、功                        101.21%，RSD 分别为 0.83%、1.22%、1.15%（n＝3），表明
          率 180 W、频率 40 kHz）后过滤，取续滤液作为供试品                     方法准确度良好。
          溶液。                                                 2.2 提取工艺的单因素实验
          2.1.2 色谱条件                                          2.2.1 提取溶剂的筛选
              色谱柱为 Agilent-C18 （250 mm×4.6 mm，5 µm）；流             精密称取艾纳香干燥茎叶粉末20 g，按液料比10∶1
          动相为甲醇-0.1%磷酸溶液（60∶40，V/V）；柱温为30 ℃；                 （mL/g）分别加入甲醇、95% 乙醇、二氯甲烷、乙酸乙酯，
          流速为 0.8 mL/min；检测波长为 290 nm；进样量为 10                 选择提取温度为提取溶剂沸点值，回流提取2 h，考察不


          · 2324 ·    China Pharmacy  2023 Vol. 34  No. 19                            中国药房  2023年第34卷第19期
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