Page 36 - 《中国药房》2023年18期
P. 36

理后，再按“2.2”项下条件进样分析，记录峰面积。以对                         2.4.5 稀释可靠性考察
          照品质量浓度为横坐标（x）、卡培他滨与内标的峰面积                               按“2.4.3”项下方法制备质量浓度相当于低、中、高
          比值为纵坐标（y），用加权最小二乘法计算回归方程。                           质量浓度质控血浆样品5、20、40倍的卡培他滨质控血浆
          结果显示，卡培他滨的回归方程为 y＝0.055 2x+0.491 9                  样品，再用空白血浆进行稀释，使3个质量浓度质控血浆
         （R ＝0.999 4），线性范围为 6.25～800 ng/mL，定量下限               样品的终质量浓度分别为10、100、600 ng/mL，按“2.3”项
             2
          为 6.25 ng/mL，符合 2020 年版《中国药典》（四部）“生物                下方法预处理后，再按“2.2”项下条件进样分析，记录峰面
          样品定量分析方法验证指导原则”的要求。                                 积。每个稀释倍数下各质量浓度样品平行制备3份，根据
          2.4.3 精密度和准确度考察                                     同批随行回归方程计算卡培他滨的质量浓度。如表3所
              取大鼠空白血浆 100 μL，加入“2.1”项下对照品贮                    示，在不同稀释倍数下，所有质量浓度质控血浆样品的
          备液，制成卡培他滨质量浓度分别为 6.25、10、100、600                    RSD均不高于9.84%（n＝3），符合2020年版《中国药典》
          ng/mL（定量下限和低、中、高质量浓度）的质控血浆样                        （四部）“生物样品定量分析方法验证指导原则”的要求。
          品。按“2.3”项下方法预处理后，再按“2.2”项下条件进                       表3 不同稀释倍数下卡培他滨质控血浆样品的稀释可
          样分析，记录峰面积。各浓度连续进样6次考察日内精                                 靠性结果（n＝3，%%）
          密度，连续进样 5 d 考察日间精密度。将峰面积代入同                         理论质量浓度/     稀释5倍         稀释20倍        稀释40倍
                                                              （ng/mL）       x±s  RSD      x±s  RSD    x±s  RSD
          批随行回归方程计算卡培他滨的质量浓度，并与理论质
                                                               10       9.57±0.59  6.19  9.17±0.92  9.07  9.26±0.91  9.84
          量浓度相比，计算准确度。如表1显示，日内和日间精密                           100      98.81±0.81  0.82  98.31±7.52  7.65  96.43±2.32  2.40
          度的 RSD 均不高于 3.49%（n＝6 或 n＝5），准确度为                   600      581.45±6.93  0.89  588.35±5.89  0.75  592.33±10.63  1.34
          99.08%～104.79%，符合 2020 年版《中国药典》（四部）                 2.4.6 稳定性考察
         “生物样品定量分析方法验证指导原则”的要求。                                   按“2.4.3”项下方法制备低、中、高质量浓度的质控
          表1 大鼠血浆中卡培他滨的精密度与准确度考察结果                            血浆样品，每个质量浓度样品平行制备3份，分别于室温
           理论质量浓度/  实测质量浓度（x±s）/  准确度（x±s，n＝6）/  精密度RSD/%    （20 ℃）下存放 24 h、4 ℃下存放 48 h、－80 ℃下存放 48
          （ng/mL）     （ng/mL）      %      日内（n＝6）  日间（n＝5）    h、－80 ℃和室温下反复冻融3次后，按“2.3”项下方法预
            6.25      6.19±0.89  99.08±0.14  0.14    1.20     处理，再按“2.2”项下条件进样分析，所有样品均按同批
           10         9.55±1.91  104.79±7.65  2.95   3.49
           100       104.53±6.91  102.27±3.46  1.40  2.29     随行回归方程计算卡培他滨的质量浓度。结果显示，各
           600       601.23±6.89  100.20±2.70  0.47  1.79     样品在上述不同条件下稳定性良好，RSD 均不高于
          2.4.4 提取回收率和基质效应考察                                  7.24%（n＝3），符合 2020 年版《中国药典》（四部）“生物
              按“2.4.3”项下方法制备低、中、高质量浓度的质控                      样品定量分析方法验证指导原则”的要求。
          血浆样品，按“2.3”项下方法处理后，再按“2.2”项下条件                      3 药动学研究
                                                                  将 24 只健康雄性 SD 大鼠随机分为 4 组：对照 1 组、
          进样分析，计算卡培他滨与内标峰面积比（A）。取空白血
          浆100 μL，按“2.3”项下方法预处理后，再加入相应质量                      对照2组、实验1组、实验2组，每组6只。对照组大鼠腹
                                                              腔注射生理盐水0.5 mL/kg，实验组大鼠腹腔注射斑蝥酸
          浓度的卡培他滨对照品溶液和内标溶液，使质量浓度与
                                                              钠注射液0.5 mL/kg（相当于25 μg/kg），考虑到临床给药
          前者一致，按“2.2”项下条件进样分析，计算卡培他滨与
                                                              的长期性，故连续给药 7 d。第 8 天给药后，对照 1 组和
          内标峰面积比（B）。另制备卡培他滨对照品溶液和内标
                                                              实验1组大鼠灌胃卡培他滨片5 mg/kg，对照2组和实验
          溶液质量浓度与前者一致的纯溶液（不含血浆），按“2.2”
                                                              2组大鼠静脉注射卡培他滨5 mg/kg[将卡培他滨片研磨
          项下条件进样分析，计算卡培他滨与内标峰面积比（C）。
                                                              成细粉至无颗粒状后，称取一定量的卡培他滨细粉，采
          按如下公式计算提取回收率和基质效应：提取回收率＝
                                                              用助溶剂（N，N-二甲基乙酰胺-聚乙二醇 400-水的体积
          A/C×100%，基质效应＝B/C×100%。每个质量浓度样
                                                              比为 2∶4∶1）溶解后，使卡培他滨的终质量浓度为 2.5
          品平行制备 3 份。如表 2 所示，提取回收率为 85.31%～
                                                              mg/mL，配制时先加入N，N-二甲基乙酰胺并超声2 min，
          91.67%，RSD 均 不 高 于 3.02%（n＝3）；基 质 效 应 为
                                                              再加入聚乙二醇 400，涡旋混匀，最后加入水，超声至澄
          85.84%～95.31%，RSD 均 不 高 于 3.65%（n＝3），符 合
                                                              清透明，用于静脉给药]。分别于灌胃卡培他滨后 0.25、
          2020年版《中国药典》（四部）“生物样品定量分析方法验
                                                              0.5、0.75、1、1.5、2、4、6、8、12、16、24、30 h 和静脉注射卡
          证指导原则”的要求。
                                                              培他滨后 0.033、0.15、0.5、1、1.5、2、4、6、8、12、16、24、30
          表2 大鼠血浆中卡培他滨的提取回收率和基质效应考                            h 从大鼠眼眶静脉丛采集全血 0.2 mL，置于用肝素钠处
               察结果（n＝3）                                       理后的 1.5 mL 离心管中，以 4 ℃、3 500 r/min 离心 10
                          提取回收率/%            基质效应/%           min，分离血浆（血浆的采集和分离过程均在冰浴中进
           质量浓度/（ng/mL）
                          x±s    RSD        x±s     RSD       行），将得到的血浆置于－80 ℃冰箱中冻存，待测。取冻
           10          87.17±3.59  1.69  95.31±7.70  3.65
           100         91.67±6.60  3.02  86.44±4.31  2.17     存的血浆样品放置至室温，按“2.3”项下方法预处理后，
           600         85.31±2.99  1.65  85.84±4.60  2.36     再按“2.2”项下条件进样分析，记录峰面积，并按随行回


          · 2206 ·    China Pharmacy  2023 Vol. 34  No. 18                            中国药房  2023年第34卷第18期
   31   32   33   34   35   36   37   38   39   40   41