Page 35 - 《中国药房》2023年18期
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究二者联用后的药动学参数变化具有重要意义。基于                            2.3 样品的预处理
          此，本文拟建立测定大鼠血浆中卡培他滨血药浓度的超                               精密量取待测血浆样品100 μL，置于1.5 mL离心管
          高效液相色谱-串联质谱（UPLC-MS/MS）法，通过测定联                     中，先加入20 μL内标溶液（质量浓度为200 ng/mL），再
          用斑蝥酸钠和未联用斑蝥酸钠大鼠体内卡培他滨的血药                           加入800 μL乙酸乙酯，涡混10 min后，于4 ℃、13 000 r/min
          浓度，来计算并比较两者主要的药动学参数，以明确斑蝥                          离心10 min。将上层乙酸乙酯层转移至2.0 mL的EP管
          酸钠对卡培他滨在大鼠体内药动学行为的影响，旨在为                           中，为使药物萃取完全，剩余下层沉淀再加入800 μL乙
          二者联用的安全性和有效性提供理论依据。                                酸乙酯以同样的方式萃取第2次；合并2次上层萃取液，
          1 材料                                               以 37 ℃氮气流吹干。吹干后的残渣储存于－80 ℃冰
          1.1 主要仪器                                           箱中，临用前加入 100 μL 甲醇复溶，涡混 10 min 后，以
              本研究所用主要仪器包括1290 LC/TQ型超高效液                     13 000 r/min离心10 min，取上清液进样分析。
          相色谱仪、TSQ 6470型三重四极杆串联质谱仪及数据处                       2.4 方法学考察
          理系统（美国 Agilent 公司），GENESPEED1730R 型冷冻              2.4.1 专属性考察
          高速离心机（香港科技有限公司），JN300-2 型氮气吹扫                          精密量取“2.1”项下对照品贮备液和内标贮备液，用
          仪（苏州吉米诺仪器有限公司），FA805N 型十万分之一                       甲醇稀释，制成卡培他滨与内标的混合对照品溶液。取
          电子天平（上海菁海仪器有限公司）等。
                                                             大鼠空白血浆，按“2.3”项下方法预处理，不加内标，制成
          1.2 主要药品与试剂
                                                             空白血浆样品。另取大鼠给药 2 h 后的血浆样品，按
              卡培他滨对照品（批号420018-201802，纯度≥99%）
                                                            “2.3”项下方法预处理，制成卡培他滨血浆样品。将上述
          购自中国食品药品检定研究院；甲苯磺丁脲对照品                             处理后的样品分别按“2.2”项下条件进样分析。如图 1
         （内标，批号 BD154332，纯度≥98%）购自上海毕得医
                                                             所示，卡培他滨、内标的保留时间分别为2.49、2.75 min，
          药科技有限公司；斑蝥酸钠注射液（批号 180303，规格
                                                             卡培他滨的色谱峰与内标峰分离良好，互不干扰，两峰
          2 mL∶0.1 mg）购自贵州金桥药业有限公司；卡培他滨片
                                                             在空白血浆色谱图中相同位置处没有内源性杂质峰干
         （批号SH2902，规格0.5 g）购自上海罗氏制药有限公司；
                                                             扰，表明该方法专属性良好。
          肝素钠（批号605K0213，纯度≥99%）购自北京索莱宝科
          技有限公司；质谱级甲醇、乙腈、甲酸均购自德国 Merck                             100
                                                                   80
          公司；水为超纯水。                                                60
          1.3 动物                                                  counts/%  40
                                                                   20
              SPF 级健康雄性 SD 大鼠，体重（230±10）g，由贵州
                                                                    0
          医科大学实验动物中心提供，生产许可证号为 SCXK                                  0  0.4   0.8   1.2   1.6   2.0   2.4   2.8   3.2   3.6   4.0   4.4   4.8
                                                                                       t/min
         （黔）2018-0001，大鼠在（22±2） ℃的环境下饲养7 d，光                                       A.空白血浆样品
          照和黑暗各12 h循环，给药前禁食12 h并自由饮水。                              100                  1
          2 分析方法的建立                                                80                     2
          2.1 对照品溶液和内标溶液的制备                                       counts/%  60
                                                                   40
              分别精密称取卡培他滨对照品或内标适量，加入甲                               20
          醇溶解，制成质量浓度均为 1 mg/mL 的贮备液，用滤膜                             0
                                                                     0  0.4   0.8   1.2   1.6   2.0   2.4   2.8   3.2   3.6   4.0   4.4   4.8
          滤过后，取续滤液，置于4 ℃冰箱保存，临用时用甲醇稀                                                   t/min
                                                                                   B.混合对照品溶液
          释至所需浓度，即得对照品溶液或内标溶液。
                                                                   100                  1
          2.2 色谱与质谱条件                                              80
              本研究的色谱条件为：以 Agilent XBridge Aq C18                  counts/%  60
         （2.1 mm×50 mm，1.7 μm）为色谱柱，0.1% 甲酸溶液                       40                     2
                                                                   20
         （A）- 0.1% 甲酸乙腈溶液（B）为流动相进行梯度洗脱                              0
         （0～1 min，5%B；1～2.5 min，60%B；2.5～3.5 min，80%B；               0  0.4   0.8   1.2   1.6   2.0   2.4   2.8   3.2   3.6   4.0   4.4   4.8
                                                                                       t/min
          3.5～5.0 min，5%B）；流速为 0.4 mL/min；柱温为 35 ℃；                                  C.血浆样品
          进样量为2 μL。                                              1：卡培他滨；2：内标。
                                                             图 1 空白血浆样品、混合对照品溶液、血浆样品的色
              本研究的质谱条件为：采用电喷雾离子源以正离子
          模式扫描，扫描方式为选择反应监测；离子源温度为                                 谱图
          350 ℃；离子化电压为 3 500 V；气帘气压为 35 psi；雾化               2.4.2 标准曲线绘制和定量下限考察
          气压力为55 psi；辅助气压力为50 psi；卡培他滨、内标定                       取大鼠空白血浆，加入“2.1”项下对照品溶液，制成

          量分析的离子对（m/z）分别为 360.16→174.00、271.11→              卡培他滨质量浓度分别为 6.25、12.5、25、50、100、200、
          91.00，碰撞能量分别为24、40 eV。                             400、800 ng/mL的标准血浆溶液。按“2.3”项下方法预处


          中国药房  2023年第34卷第18期                                              China Pharmacy  2023 Vol. 34  No. 18    · 2205 ·
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