Page 13 - 《中国药房》2023年18期
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仲景《伤寒论》的芍药甘草汤（白芍、甘草）为基础，加用                         4 000 V；喷雾气压力为40 psi；干燥气体流速为10 L/min；
          巴戟天和仙茅而成。方中巴戟天归肾、肝二经，可补肾                           干燥气体温度为 340 ℃。用于定量分析的离子对（m/z）
          壮阳，兼养精血，为君药；仙茅补肾脾之阳，强肝健筋散                          分别为313→256.1（OLZ）、316.1→87.2（内标）。
          寒，助巴戟天温补肾肝，为臣药；白芍入肝、脾二经，甘草                         2.2 溶液的制备
          味甘性平、调和诸药，两者共为佐使药。本课题组前期                           2.2.1 对照品溶液的制备
          研究发现，YRTJ可以治疗由OLZ引起的高泌乳素血症，                            精密称取 OLZ 对照品 2.5 mg，加入甲醇溶解，并定
          但 YRTJ 是否会影响 OLZ 的药动学过程尚不清楚。为                      容至 25 mL 容量瓶中，制成质量浓度为 0.1 mg/mL 的
          此，本研究采用液相色谱-质谱（liquid chromatography-              OLZ 溶液。取上述 OLZ 溶液，加入甲醇稀释，制成质量
          mass spectroscopy，LC-MS）技术测定了大鼠血浆中OLZ              浓度为 500 μg/mL 的 OLZ 储备液；临用时，用甲醇稀释
          浓度，考察了YRTJ对OLZ在大鼠体内药动学的影响，旨                        成所需质量浓度的对照品溶液。
          在为临床合理用药提供依据。
                                                             2.2.2 内标溶液的制备
          1 材料                                                   精密称取内标对照品 2.5 mg，加入乙腈溶解，并定
          1.1 主要仪器
                                                             容至25 mL容量瓶中，制成质量浓度为 0.1 mg/mL 的内
              本 研 究 所 用 主 要 仪 器 包 括 Agilent  1260 液 相 色
                                                             标储备液。取上述内标储备液，加入甲醇稀释，制成质
          谱-G6460 三重四极杆质谱联用仪（美国 Agilent 公司）、
                                                             量浓度为250 ng/mL的内标溶液。
          XW-80A 型旋涡混合器（海门市其林贝尔仪器制造有限
                                                             2.3 血浆样品的处理
          公司）、Milli-Q 超纯水纯化系统（美国 Millipore 公司）、
                                                                 取血浆样品 50 μL，置于 1.5 mL 的 EP 管内，加入
          5810R型高速冷冻离心机（德国Eppendorf公司）。
                                                            “2.2.2”项下内标溶液 100 μL，快速旋涡振荡 1 min，以
          1.2 主要药品与试剂
                                                             14 000 r/min离心15 min，取5 μL上清液进样分析。
              OLZ 对照品（批号 O830525，纯度≥98%）购自上海
                                                             2.4 方法学考察
          麦克林生化科技股份有限公司；奥氮平-d3 对照品（内
                                                             2.4.1 专属性考察
          标，批号B71387，纯度≥98%）购自上海源叶生物科技有
                                                                 分别取不同来源的大鼠空白血浆、空白血浆+OLZ
          限公司；YRTJ（批号20220413，规格10 g/袋）由南方医科
                                                            （质量浓度为500 ng/mL）、大鼠单次给药后1 h的血浆样
          大学南方医院药学部提供；肝素钠溶液（批号M052787）
                                                             品各 50 μL，分别按“2.3”项下方法处理（其中空白血浆
          购自北京迈瑞达科技有限公司。
                                                             不加内标溶液），再按“2.1”项下条件进样分析，记录色谱
          1.3 动物
                                                             图。如图1所示，OLZ及内标在分析物保留时间处均无
              SD大鼠24只，雌性，6～8周龄，体重180～200 g，购
                                                             杂质干扰，空白血浆中的内源性物质不干扰OLZ及内标
          自珠海百试通生物科技有限公司[动物质量合格证明
                                                             的测定，表明本方法专属性较好。
          号：44822700014688；实验动物生产许可证号：SCXK
                                                             2.4.2 线性关系及定量下限考察
         （粤）2020-0051]。所有大鼠于标准环境下适应性饲养 1
                                                                 取大鼠空白血浆，加入“2.2.1”项下对照品溶液，制
          周。动物实验符合南方医科大学南方医院实验动物伦
          理委员会的有关规定及要求（伦理证号：NFYY-2022-                       成 OLZ 质量浓度分别为 5、50、150、300、500、750、1 000
          0316）。                                             ng/mL 的质控样品，按“2.3”项下方法处理后，再按“2.1”
          2 方法与结果                                            项下条件进样分析，记录峰面积。以OLZ质量浓度为横
          2.1 色谱与质谱条件                                        坐标（x）、OLZ 与内标峰面积比值为纵坐标（y），采用加
          2.1.1 色谱条件                                         权最小二乘法作回归分析。结果显示，OLZ的回归方程
                                                                           2
              以 Agilent  Poroshell  EC-C18（50  mm×3.0  mm，2.7   为y＝0.006x（R ＝0.993 2），表明OLZ在5～1 000 ng/mL
          μm）为色谱柱；以 0.1% 甲酸的乙腈溶液（A）-5 mmol/L                 范围内呈良好的线性关系。定量下限为5 ng/mL。
          甲酸铵溶液（B）为流动相进行梯度洗脱（0～0.5 min，                      2.4.3 基质效应与提取回收率考察
          95%B；0.5～1.7 min，50%B；1.7～2.5 min，5%B；2.5～5            将不同来源的大鼠空白血浆，按“2.3”项下方法处理
          min，95%B）；流速为0.5 mL/min；进样量为5 μL。                  后，加入“2.2.1”项下对照品溶液，制成低、中、高质量浓
          2.1.2 质谱条件                                         度（10、500、750 ng/mL）的样品，每个质量浓度样品平行
              采用电喷雾正离子源，扫描方式为多反应监测                           制备 6 份，再按“2.1”项下条件进样分析，记录峰面积为
         （multiple reaction monitoring，MRM）；毛细管电压为           A。分别制备OLZ和内标质量浓度与前者一致的标准溶


          中国药房  2023年第34卷第18期                                              China Pharmacy  2023 Vol. 34  No. 18    · 2183 ·
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