Page 18 - 《中国药房》2023年18期

胃癌是全世界范围内最常见的消化道恶性肿瘤之 股 份 有 限 公 司 ；葡 萄 糖 含 量 检 测 试 剂 盒（批 号
一。2022年全国最新癌症报告显示，胃癌在我国的发病 012522220602）、5-乙炔基-2′脱氧尿嘧啶核苷（EdU）细
率仅次于肺癌和结直肠癌，对我国人民的身心健康造成 胞增殖检测试剂盒（批号 092321220429）均购自上海碧
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极大威胁 。胃癌的发生、发展是一个多阶段、多因素共 云天生物技术有限公司；乳酸含量检测试剂盒（批号
同作用的结果，研究认为，抑制胃癌细胞的恶性生物学 ATVG20031）购自亚科因（武汉）生物技术有限公司；
行为是胃癌外科治疗的重要基础 。糖酵解是肿瘤细胞 RIPA裂解液购自美国ABW公司；二喹啉甲酸（BCA）蛋
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能量供应的主要途径，可为肿瘤细胞提供增殖所需的能 白试剂盒（英国Abcam公司）；兔源自噬相关蛋白轻链3
量及必需的氨基酸等合成原料，抑制糖酵解可阻滞胃癌 Ⅰ（light chain 3Ⅰ，LC3Ⅰ）、LC3Ⅱ抗体（批号分别为
细胞快速增殖及迁移 。自噬是细胞程序性死亡的一种 00109445、00109011）及鼠源 Akt、磷酸化 Akt（p-Akt）、
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类型，研究发现，促进胃癌细胞自噬可有效抑制胃癌的 PI3K、磷酸化PI3K（p-PI3K）、β-肌动蛋白（β-actin）抗体、
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进展 。因此，寻找有效降低胃癌细胞糖酵解水平及促 HRP 标记的山羊抗鼠 IgG 二抗（批号分别为 10022173、
进胃癌细胞自噬的手段对抑制胃癌的发展尤为重要。 10022023、10017175、10010983、10021787、20000374）均购
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阿托伐他汀属于他汀类药物。Shen等 通过回顾性 自武汉三鹰生物技术有限公司。
研究发现，阿托伐他汀可显著抑制子宫肌瘤的生长，但 1.3 细胞株
对胃癌细胞的影响尚不明确。磷脂酰肌醇-3-激酶 人胃癌AGS细胞购自上海酶研生物科技有限公司。
（phosphatidylinositol-3-kinase，PI3K）/蛋白激酶 B（又称 2 方法
Akt）信号通路广泛存在于细胞中，是参与细胞生长、增 2.1 细胞培养
殖与凋亡等生物学行为的重要信号通路，已被证实与胃 AGS细胞接种于含10%FBS、1%青-链霉素的F-12K
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癌的发生、发展密切相关 。现有研究发现，阿托伐他汀 培养基中，置于37 ℃、5%CO2培养箱中培养，每隔2～3 d
对脑胶质瘤细胞增殖抑制及凋亡促进的作用机制可能 更换一次培养液，待细胞贴壁后生长密度达到80%时传
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与PI3K/Akt信号通路相关 。但是阿托伐他汀是否可通 代，选取第4代对数期生长细胞用于实验。
过 PI3K/Akt 信号通路来影响胃癌细胞的恶性生物学行 2.2 分组与给药
为尚未可知。本研究探讨了阿托伐他汀对人胃癌 AGS 选取第 4 代对数期生长的 AGS 细胞，调整密度至
细胞增殖、自噬及糖代谢的影响，以及 PI3K/Akt 信号通 2×10 个/mL，接种到 96 孔板中，每孔 100 μL。实验分
5
路在其中发挥的作用，以期为阿托伐他汀在胃癌治疗中 为预实验和正式实验。预实验分为对照组和低、中、高
的作用研究提供参考。 浓度实验组；对照组不做干预，低、中、高浓度实验组分
1 材料 别加入 12.5、25、50 μmol/L 阿托伐他汀 ，干预 24 h。根
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1.1 主要仪器 据预实验结果，为避免细胞死亡过多影响实验，选择有
本研究所用主要仪器包括BDS400型倒置荧光显微 显著抑制作用的 25 μmol/L 阿托伐他汀（结果详见
镜（北京赛百奥科技有限公司）、HWO301型CO2培养箱 “3.1”）进行正式实验。正式实验分为对照组、阿托伐他
（美国 Forma 公司）、MultiskanAscent 型酶标仪（美国 汀组、阳性对照组、抑制剂组和激活剂组；对照组不做干
Thermo Fisher Scientific 公司）、OI1000 型凝胶成像系统 预，阿托伐他汀组加入25 μmol/L阿托伐他汀，阳性对照
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（广州光仪生物科技有限公司）、BBS-V500 型超净工作 组加入 50 mg/L 5-氟尿嘧啶 ，抑制剂组加入 25 μmol/L
台（济南卓隆生物技术有限公司）等。 阿托伐他汀和 10 μmol/L PI3K/Akt 信号通路抑制剂
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1.2 主要药品与试剂 LY294002 ，激活剂组加入 25 μmol/L 阿托伐他汀和 10
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阿托伐他汀对照品（批号B09A7R12611）、5-氟尿嘧 μmol/L PI3K/Akt 信号通路激活剂 SC79 ，干预 24 h，每
啶对照品（批号 M17GS148678）、PI3K/Akt 信号通路抑 组设3个复孔。
制剂LY294002（批号J05GS150604）、激活剂SC79（批号 2.3 测定指标
F08J11F115126）均购自上海源叶生物科技有限公司，纯 2.3.1 细胞活力检测
度均不低于 98%；胎牛血清（FBS）和 F-12K 培养基均购 按“2.2”项下预实验分组、给药，另设只含生长培养
自美国Gibco公司；1%青-链霉素、4%多聚甲醛、聚乙二 基不含细胞的空白组，药物干预 24 h 后，加入 10 μL
醇辛基苯基醚（Triton X-100）、牛血清白蛋白（bovine se‐ CCK-8溶液，2 h后，用酶标仪检测450 nm波长处各组的
rum albumin，BSA）、三 羟 甲 基 氨 基 甲 烷 - 盐 酸 - 吐 温 光密度（optical density，OD），每组检测3次，计算细胞活
（TBST）均购自北京索莱宝生物科技公司；CCK-8 细胞 力：细胞活力＝（实验组OD值－空白组OD值）/（对照组
计数试剂盒（批号 C6205060）购自翌圣生物科技（上海） OD值－空白组OD值）×100%。

· 2188 · China Pharmacy 2023 Vol. 34 No. 18 中国药房 2023年第34卷第18期