Page 45 - 《中国药房》2023年17期

标样品色谱图（见图1B）；取空白血浆适量，加入定量下 2.5.2 标准曲线考察
限质量浓度（20 ng/mL）的SYHA1809溶液，按“2.4”项下 取一定量的系列标准溶液，用空白血浆稀释 20 倍
方法处理，然后进样分析，得定量下限血浆样品色谱图 后，得到质量浓度为 20 000、10 000、4 000、2 000、500、
（见图 1C）；取空白血浆适量，加入定量上限质量浓度 100、40、20 ng/mL 的系列标准样品溶液，按“2.4”项下方

（20 000 ng/mL）的SYHA1809溶液，除不加内标外，其余 法操作后，进样分析。以血浆样品溶液中SYHA1809的
质量浓度为横坐标（X）、SYHA1809 与内标的峰面积比
同法处理，得不含内标的定量上限血浆样品色谱图（见
值为纵坐标（Y），采用加权最小二乘法进行线性回归，得
图 1D）；取比格犬灌胃给药 8 h 后的血浆样品，同法处
2
回 归 方 程 为 Y＝0.000 921X－0.00 140（r ＝0.995 8），
理，得灌胃给药8 h后血浆样品色谱图（见图1E）。结果
SYHA1809的线性范围为20～20 000 ng/mL。
显示，SYHA1809 与内标的保留时间分别为 1.38、1.40
2.5.3 准确度与精密度考察
min，空白血浆样品中内源性物质和内标均不干扰待测
取质量浓度分别为 0.400、1.20、160、320 μg/mL 的
物的测定。
QC溶液，用空白血浆稀释20倍后，得到质量浓度分别为
100 m/z 418→374.1
20.0、60.0、8 000、16 000 ng/mL的QC样品溶液。取上述
50 溶液各 30 μL，按“2.4”项下方法处理，每一质量浓度平
相对丰度/% 100 0 m/z 351.1→173.1 行 6 个样本，连续测定 3 个分析批，根据当日的标准曲
50 线，计算QC样品溶液的测得浓度，考察本方法的准确度
0 与精密度。结果显示，各质量浓度 QC 样品溶液的准确
0 0.5 1.0 1.5 2.0 2.5
时间/min 度为90.1%～107.2%，批内精密度的RSD为0.9%～8.2%
A.空白血浆样品
（n＝6），批 间 精 密 度 的 RSD 为 2.3%～7.4%（n＝18）。
100 m/z 418→374.1
SYHA1809在定量下限质量浓度下的准确度为86.5%～
50
相对丰度/% 100 0 m/z 351.1→173.1 112.3%，日内 RSD 为 4.2%～8.2%（n＝6），日间 RSD 为

50 7.4%（n＝18）。上述结果表明批内与批间的准确度和精
密度均符合生物样品分析方法验证的要求。
0
0 0.5 1.0 1.5 2.0 2.5 2.5.4 残留效应考察
时间/min
B.空白血浆+内标样品 将空白血浆样品按“2.4”项下方法处理，在方法验证
100 m/z 418→374.1 每一个分析批的定量上限样品分析结束后，立即进行空
50 白血浆样品分析，考察高浓度样品残留对测定的影响。
相对丰度/% 100 0 m/z 351.1→173.1 结果显示，空白血浆中待测物响应低于定量下限的

50 20%，内标响应低于定量下限的5%，表明该方法条件下，
0 待测物和内标均无残留效应。
0 0.5 1.0 1.5 2.0 2.5
时间/min 2.5.5 提取回收率考察
C.定量下限血浆样品
配制 SYHA1809 低、中、高质量浓度（60.0、8 000、
100 m/z 418→374.1
16 000 ng/mL）的 QC 溶液，按“2.4”项下方法处理，每一
50 质量浓度平行6个样本，记录峰面积（A）；另将空白血浆
相对丰度/% 100 0 m/z 351.1→173.1 进行样品预处理后，取上清液加入上述不同质量浓度的

50
SYHA1809 QC溶液和内标溶液，每一质量浓度平行6个
0
0 0.5 1.0 1.5 2.0 2.5 样本，记录峰面积（B）；以A/B计算提取回收率。结果显
时间/min
D.不含内标的定量上限血浆样品 示，低、中、高质量浓度 SYHA1809 的提取回收率为
（82.8±7.37）%～（84.9±1.30）%，RSD＜15%（n＝6），具
100 m/z 418→374.1
50 体见表1。
相对丰度/% 100 0 m/z 351.1→173.1 2.5.6 基质效应考察

50 将6份来源于不同比格犬的空白血浆经样品预处理
后，制备低、高质量浓度（60.0、16 000 ng/mL）的 QC 样
0
0 0.5 1.0 1.5 2.0 2.5 品，按“2.1”“2.2”项下条件进样分析后，计算 SYHA1809
时间/min
E.灌胃给药8 h后的血浆样品 与内标的峰面积比值（C）；以水代替空白血浆，同法操作
图 1 专属性考察的LC-MS/MS图 后进样分析，计算SYHA1809与内标的峰面积比值（D）；

中国药房 2023年第34卷第17期 China Pharmacy 2023 Vol. 34 No. 17 · 2087 ·