Page 51 - 《中国药房》2023年15期

2.2 兔血浆中DTX分析方法的建立 3.2×10 4
2.2.1 色谱与质谱条件 2.8×10 4
3.4×10 4
®
TM
色谱柱为 ACQUITY UPLC CSH C18 （3.0 mm× 2.0×10 4
75 mm，1.7 μm）；流动相为 A[甲酸-水（1∶1 000，V/V）]- 强度 1.6×10 4 4
1.2×10
B[甲醇-乙腈（20∶80，V/V）]，流动相A、B的体积比为40∶ 8.0×10 3
4.0×10 3
60；流速为 0.5 mL/min；柱温为 40 ℃；进样量为 10 μL。 0
100 150 200 250 300 350 400 450 500 550 600 650 700 750 800 850 900 950
采用电喷雾离子源（+）在多反应监测（multiple reaction m/z
A. DTX
monitoring，MRM）模 式 下 进 行 检 测 ；干 燥 气 温 度 为
5.2×10 4
300 ℃，干燥气流速为 5 L/min；雾化器压力为 45 psi；毛 4.8×10 4
4.4×10 4
细管电压为4 000 V，碎片电压为90 V；DTX质荷比（m/z） 4.0×10 4 4
3.6×10
3.2×10 4
为 807.9→526.9，紫 杉 醇（内 标）m/z 为 853.8→286.0。 强度 2.8×10 4 4
3.4×10
DTX和紫杉醇的二级质谱图见图2。 2.0×10 4 4
1.6×10
1.2×10 4
2.2.2 生物样品的处理方法 8.0×10 3
4.0×10 3
取模型兔血浆 500 μL，加入 100 μL 紫杉醇溶液（5 0 100 150 200 250 300 350 400 450 500 550 600 650 700 750 800 850 900 950
m/z
μg/mL）和 3 mL 蛋白沉淀剂[甲醇-0.03% 氨水溶液 1（4∶ B.紫杉醇
1，V/V）]，涡旋5 min后，15 000 r/min离心10 min；将上清 图2 DTX和紫杉醇的二级质谱图
液倒入活化的固相萃取小柱上，依次用 6 mL 超纯水、3
醇）、空白血浆+DTX、给药后 30 min 的血浆样品，按
mL 甲醇-0.03% 氨水溶液 2（2∶3，V/V）、3 mL 甲醇-0.03%
“2.2.2”项下方法处理，按“2.2.1”项下色谱与质谱条件进
氨水溶液3（3∶2，V/V）冲洗；真空抽干小柱后，以2 mL甲
样分析，记录质谱图（见图3）。结果显示，血浆内源性物
醇重新洗脱，收集该洗脱液，于40 ℃水浴条件下氮气吹
质不干扰测定。
干，再用200 μL流动相复溶，经0.22 μm滤头过滤后，进
样检测。 （2）标准曲线的绘制。取DTX对照品约100 mg，精
2.2.3 方法学考察 密称定，用甲醇溶解并定容至 100 mL，再用甲醇稀释成
（1）专属性考察。将空白血浆（处理时不加紫杉 DTX 质量浓度分别为 0.004 56、0.022 8、0.114、0.570、

120 60
110 58
100 56
强度 90 强度 54
80
52
70 50
60 48
50
0.2 0.6 1.0 1.4 1.8 2.2 2.6 3.0 3.4 3.8 4.2 4.6 0.2 0.6 1.0 1.4 1.8 2.2 2.6 3.0 3.4 3.8 4.2 4.6
t/min t/min
A. 空白血浆（m/z 853.8→286.0） B. 空白血浆（m/z 807.9→526.9）
1 400
1 200 80
1 000 70
强度 800 强度 60
600
400
200 50
0
0.2 0.6 1.0 1.4 1.8 2.2 2.6 3.0 3.4 3.8 4.2 0.2 0.6 1.0 1.4 1.8 2.2 2.6 3.0 3.4 3.8 4.2
t/min t/min
C. 空白血浆+DTX（m/z 853.8→286.0） D. 空白血浆+DTX（m/z 807.9→526.9）
1 600 75
1 400 70
1 200 65
1 000
强度 800 强度 60
600 55
400 50
200 45
0
0.2 0.6 1.0 1.4 1.8 2.2 2.6 3.0 3.4 3.8 4.2 4.6 0.2 0.6 1.0 1.4 1.8 2.2 2.6 3.0 3.4 3.8 4.2 4.6
t/min t/min
E. 给药后30 min的血浆样品（m/z 853.8→286.0） F. 给药后30 min的血浆样品（m/z 807.9→526.9）
图3 UPLC-MS/MS法的专属性考察结果

中国药房 2023年第34卷第15期 China Pharmacy 2023 Vol. 34 No. 15 · 1837 ·