Page 47 - 《中国药房》2023年15期

为 89.0%～102.4%（RSD 为 1.5%～5.2%，n＝3），高质量 2.11 样品测定
浓度回收率溶液的平均加样回收率为 92.4%～99.9% 取“2.3”项下供试品溶液，按“2.1”项下检测条件进
（RSD 为 1.2%～5.1%，n＝3），表 明 该 方 法 的 准 确 度 行测定，按标准曲线法计算样品中各成分的含量。结
较好。 果，在 2 种氯沙坦钾原料药和氯沙坦钾片、氯沙坦钾胶

表3 6种N-亚硝胺类基因毒性杂质的加样回收率考察 囊、氯沙坦钾氢氯噻嗪片中均未检出 NDMA、NDEA、
结果（x±s，n＝3，%%） NEiPA、NDiPA、NDPA、NDBA，表明供试品中 6 种 N-亚
低质量浓度 中质量浓度 高质量浓度 硝胺类基因毒性杂质质量浓度均低于检测限（1 ng/mL），
样品 化合物名称
回收率溶液 回收率溶液 回收率溶液 即供试品中 6 种 N-亚硝胺类基因毒性杂质含量均小于
氯沙坦钾原料药② NDMA 85.1±1.3 90.2±4.6 95.6±1.5
NDEA 86.9±2.0 92.7±3.9 96.8±1.8 0.008 μg/g。
NEiPA 83.9±2.5 100.5±5.2 99.1±2.0 3 讨论
NDiPA 89.3±3.1 91.5±1.9 99.6±5.0
NDPA 100.2±1.9 91.9±1.4 97.2±4.1 3.1 检测方法的选择
NDBA 100.2±1.8 95.6±4.4 98.1±1.5 N-亚硝胺类基因毒性杂质不仅限度低，同时普遍存
氯沙坦钾片 NDMA 83.4±2.0 89.7±1.6 93.4±1.5
NDEA 89.1±2.9 89.0±1.5 94.6±2.1 在质量数小、稳定性差、定量分析易受背景噪声干扰等
[15]
NEiPA 95.8±4.2 92.5±5.2 98.1±5.1 问题 。本研究选用的 GC-MS/MS 法与常用的 GC-MS
NDiPA 100.8±6.0 100.1±3.6 92.4±1.9 法相比，选择性更好、灵敏度更高，并且不容易受到原辅
NDPA 95.6±1.6 92.5±4.7 99.9±3.4
NDBA 102.8±5.1 91.6±3.6 96.7±4.2 料干扰。本研究建立的 GC-MS/MS 法利用脉冲不分流
氯沙坦钾胶囊 NDMA 85.6±5.6 98.6±4.8 95.6±2.4 模式进样，程序升温进行分离，EI电离，MRM模式检测，
NDEA 99.0±1.9 97.9±2.0 98.6±5.0
NEiPA 103.0±5.4 101.2±5.1 99.6±1.2 可对6种基因毒性杂质同时进行定量检测，可以提高检
NDiPA 100.6±3.6 101.9±1.9 99.3±3.9 测的专属性和灵敏度。结果也显示，NDMA、NDEA、
NDPA 89.5±6.3 100.4±3.7 99.0±3.0 NEiPA、NDiPA、NDPA、NDBA与其相邻色谱峰之间的分
NDBA 102.8±1.8 99.7±4.3 92.5±1.8
氯沙坦钾氢氯噻嗪片 NDMA 85.1±1.9 89.9±2.5 93.6±4.6 离效果较好。
NDEA 89.1±2.3 99.9±4.1 92.9±2.4 3.2 质谱条件的选择
NEiPA 98.4±2.5 102.4±5.0 99.6±4.5
NDiPA 102.9±6.2 100.0±3.8 98.7±2.1 本研究制备质量浓度为 5 μg/mL 的混合对照品溶
NDPA 87.1±4.5 98.1±2.9 96.3±3.8 液，通过全扫描模式（Q3scan），根据相对强度选择前体
NDBA 101.3±3.0 99.7±4.1 96.2±1.9
离子。其中，NDMA、NDEA、NEiPA 选择分子离子作为
2.8 重复性考察 前体离子；NDiPA、NDPA、NDBA 由于其分子离子峰强
取氯沙坦钾原料药②适量，按“2.7”项下方法制成6 度较小，因此选择了强度较大的m/z 70、70、84作为前体
个待测成分质量浓度约为 100 ng/mL 的样品溶液，共 6 离子。再通过产物离子扫描对碰撞能量及二级碎片离
份，分别按“2.1”项下检测条件进行测定，记录峰面积，并 子进行优化，选择响应最高的产物离子，作为定性离子
将峰面积代入标准曲线计算各成分含量。结果表明，各 和定量离子。
成分含量的 RSD 为 2.2%～5.6%（n＝6），表明该方法的 3.3 供试品制备方法的确认
重复性良好。 3.3.1 提取方式的选择
2.9 精密度考察 笔者比较了 2 种提取方式：（1）二氯甲烷溶解样品
精密量取混合对照品贮备液适量，用二氯甲烷稀释 后，直接进样；（2）先用氢氧化钠溶液溶解样品，再用二
制成各成分质量浓度均约为 5 ng/mL 的混合对照品溶 氯甲烷萃取后进样。当用二氯甲烷溶解样品后进样时，
液。按“2.1”项下检测条件连续进样 6 次，记录峰面积。 由于制剂中原辅料的干扰，导致色谱图中干扰多，无法
结果表明，各成分峰面积的RSD为0.5%～1.4%（n＝6）， 准确测定，并且对仪器有较大的污染。而使用氢氧化钠
表明仪器精密度良好。 溶液溶解后再用二氯甲烷萃取，减少了干扰的存在，实
2.10 稳定性考察 验结果更加可靠。
取重复性试验的样品溶液，分别在室温下放置0、2、 3.3.2 氢氧化钠浓度的选择
4、8、12 h 时，按“2.1”项下检测条件进行测定，记录峰面 经查阅文献[16]可知，NDMA、NDEA在碱性水溶液
积。结果表明，以二氯甲烷为溶剂，6种N-亚硝胺类基因 中采用有机溶剂提取的提取率较高，因此本研究采用氢
毒性杂质在室温 12 h 内稳定，各成分峰面积的 RSD 为 氧化钠溶液进行溶解。笔者根据文献[17]，最终确定氢
1.5%～3.4%（n＝5）。 氧化钠溶液浓度为0.1 mol/L，因为这个浓度的氢氧化钠

中国药房 2023年第34卷第15期 China Pharmacy 2023 Vol. 34 No. 15 · 1833 ·