Page 55 - 《中国药房》2023年15期
P. 55

角膜的内层被六边形的角膜内皮细胞（corneal en‐                   液均购自美国 Santa Cruz 公司；辣根过氧化物酶（HRP）
          dothelial cell，CEC）覆盖，CEC在角膜基质和房水之间形               标记的山羊抗小鼠 IgG 二抗（货号 ab9882）购自南京沃
                                                [1]
          成一道物理屏障，并将房水从基质泵入前房 。除衰老                           博生物科技有限公司；兔抗人骨形成蛋白受体1A（bone
          外，糖尿病、慢性阻塞性肺疾病等全身性疾病，假性剥脱                          morphogenetic  protein  receptor  1A，BMPR1A）、BMPR2
          综合征、干眼症、Fuchs角膜内皮营养不良等局部眼部疾                        多克隆抗体（货号分别为 JN119、BY-K1012R）均购自北
          病，以及白内障超声乳化术、激光晶状体囊切开术等眼                           京百奥莱博科技有限公司；兔抗人鬼笔环肽单克隆抗体
          部手术都有可能造成CEC丢失，一旦内皮细胞密度（en‐                       （货号 abs47047480）购自上海爱必信生物科技有限公
          dothelial cell density，ECD）低于临界点，基质便会出现            司；兔抗人钠钾ATP酶单克隆抗体（货号BJ-K6092）购自
                              [2]
          水肿甚至导致视力丧失 。由于CEC在体内的增殖能力                          上海邦景实业有限公司；兔抗人胞质紧密连接蛋白 1
          有限，故目前尚无可提高角膜内皮疾病患者ECD的有效                         （zonula  occludens-1，ZO-1）单 克 隆 抗 体（货 号 IMG-
          手段。近期研究显示，预防性局部应用阿魏酸钠（so‐                          31199）、小鼠 Ras 同源基因家族 A（Ras homologous gene
          dium ferulate，SF）可改善利多卡因麻醉诱导的猫眼角膜                  family A，RhoA）单克隆抗体（货号ARH05）、小鼠抗人甘
                            [3]
          内皮损伤和炎症反应 。SF是阿魏酸的钠盐，可通过清                          油 醛 -3- 磷 酸 脱 氢 酶（GAPDH）单 克 隆 抗 体（货 号
          除活性氧簇和上调细胞保护系统活性来增强细胞应激                            H00002597-Q01）、MTT 试剂（货号 10009591-1）均购自
          反应，属于一种强效抗氧化剂 ；此外，SF 可抑制 Rho 激                     武汉艾美捷科技有限公司；T-PER 试剂购自美国 Pierce
                                   [4]
          酶（Rho-associated protein kinase，ROCK）等酶的激活和/       公司；FNC 涂料混合物购自美国 Biologicals 公司；其余
          或表达 。有研究证实，ROCK 抑制剂 ripasudil 可在低                  试剂均为分析纯或实验室常用规格，水为蒸馏水。
                [5]
          ECD 患者的白内障手术中发挥较好的角膜内皮保护作                          1.3 实验动物
          用 。基于此，本课题组推测SF可能有助于在眼部手术                              SPF级健康雄性新西兰兔（2.0～2.5 kg）由北京科兴
            [6]
          期间保护患者的角膜内皮。本研究拟初步探讨SF对大                           中维生物技术有限公司提供，动物使用许可证号为SYXK
          泡性角膜病变模型兔角膜内皮损伤的改善作用及对                            （京）2020-0054。所有动物均饲养于武汉大学基础医学
          CEC 增殖的促进作用，并探究其潜在机制，以期为 CEC                       院动物中心[室温为（22±2）℃，相对湿度为 60%±5%，
          的修复提供参考。                                           12 h明暗交替]。兔角膜的使用符合《ARVO关于眼科和
          1 材料                                               视力研究中动物使用声明》要求，本方案由武汉大学基
          1.1 主要仪器                                           础医学院动物中心机构动物护理和使用委员会批准（序
              本研究所用主要仪器包括Ⅸ71型荧光显微镜（日本                        号DL2019-028）。
          Olympus 公司）、Tanon 5200 型化学发光成像仪（美国                 2 方法
          PerkinElmer公司）、SRBM-17型相差显微镜（日本Nikon               2.1 体内实验
          公司）、ST-2201 型裂隙灯（苏州康捷医疗股份有限公                       2.1.1 动物模型的建立
          司）、SLM-6H（B）型眼前节照相系统（上海涵飞医疗器械                          通过吸入 4% 异氟醚溶液对兔进行麻醉，随后将
          有限公司）、AccuPen 型手持眼压仪（美国 ACCTOME 公                  0.05%BAK溶液0.1 mL注入其右眼前房，用该溶液冲洗
          司）、SYNERGY-H1 型多功能酶标仪（美国 BioTek 公                  前房30 min，再用0.9%氯化钠溶液和左氧氟沙星滴眼液
          司）、ArcScan Insight  100 型眼前节超声成像系统（广州              冲洗 90 s，每天 1 次。动物左眼不进行处理，作为对照。
                           ®
          宏达医疗设备有限公司）、LRHS-300-Ⅲ型加湿培养箱                       术后使用裂隙灯观察，每周检查1次，若出现角膜混浊、
         （广州沪瑞明仪器有限公司）等。                                     角膜水肿、角膜增厚超过正常厚度的3倍、前房积血、眼
          1.2 主要药品与试剂                                        部感染、青光眼或其他并发症状，表明大泡性角膜病变
                                                                           [7]
              注射用 SF[批号 0911207，规格 0.1 g（以 C10H9NaO4 ·       兔模型复制成功 。
          2H2O计）]购自山东罗欣药业集团股份有限公司；苯扎氯                        2.1.2 动物分组与给药
          铵（benzalkonium chloride，BAK）溶液[批号 190509G05，           将新西兰兔分为对照组、BAK 组和 BAK+SF 组，每
          规格 150 mL∶0.15 g（0.10%）]购自广东洛斯特制药有限                组 6 只。BAK 组和 BAK+SF 组兔按“2.1.1”项下方法复
          公司；左氧氟沙星滴眼液[批号CV2112，规格5 mL∶24.4                   制大泡性角膜病变模型，BAK+SF组于次日腹腔注射SF
          mg（按 C18H20FN3O4计）]购自参天制药（中国）有限公司；                 溶液200 mg/kg（以DMEM高糖培养液为溶剂，剂量参考
                                                                                        [9]
                                                                               [8]
          DMEM 高糖培养液购自上海善然生物科技有限公司；                          预实验结果和 Tsai 等 、Chen 等 研究设置），每天 2 次，
          Opti-MEM培养液购自美国Invitrogen公司；茜素红染液                  连续14 d；对照组兔不予任何处理。
          购自美国 MilliporeSigma 公司；兔 Ki67 单克隆抗体（批              2.1.3 兔角膜状态评估
          号 H300）、异硫氰酸荧光素（FITC）标记的山羊抗兔 IgG                       分别于术前（第 0 天）及术后第 1、7、14 天利用眼前
          二抗（批号SA1064）、4′，6-二脒基-2-苯基吲哚（DAPI）染                节照相系统和裂隙灯观察各组兔的角膜透明度和基质


          中国药房  2023年第34卷第15期                                              China Pharmacy  2023 Vol. 34  No. 15    · 1841 ·
   50   51   52   53   54   55   56   57   58   59   60