Page 24 - 《中国药房》2023年14期
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是常用的体外肠吸收生物模型之一，其可在体外模拟生                            转蒸发浓缩后，于 60 ℃下烘干，加 Tyrode 液适量，超声
          理状态下不同肠道对药物的吸收过程，具有操作简单、                            溶解，制得质量浓度为 8 g/mL（以生药量计，下同）的柴
          实验周期短、可操控性好、重现性好、药液用量少等优                            胡总皂苷提取液，备用。
            [9]
          点 。根据前期质量评价研究得知，柴胡皂苷 A、B2、C、                        2.1.3 混合对照品储备液
                                       [10]
          D、F 是北柴胡药材的主要成分群 。基于此，本研究拟                              分别精密称取柴胡皂苷A、B2、C、D、F对照品适量，
          采用离体外翻肠囊模型，对柴胡总皂苷提取液中上述 5                           置于 10 mL 容量瓶中，用甲醇溶解并定容，制得质量浓
          种指标成分在大鼠十二指肠、空肠、回肠内的吸收特性                            度分别为 20、100、40、32、50 μg/mL 的混合对照品储备
          进行研究，以期为柴胡皂苷类成分药代动力学特征及药                            液，备用。
          效物质基础的进一步研究提供参考依据。                                  2.1.4 空白肠液
          1 材料                                                    取 37 ℃的 Tyrode 液，按后续“2.4”项下方法进行离
          1.1 主要仪器                                            体外翻肠囊实验，循环60 min，即得。
                                                              2.2 样品的处理
              本 研 究 所 用 主 要 仪 器 包 括 Eksigent  ekspert  ultra
                                                                  取不同时间点各肠段内的肠吸收样品液200 μL，于
          LC100型超高效液相色谱仪、4000 QTRAP型质谱仪（美
                                                              4 ℃下以13 198×g离心20 min，取上清液，于－20 ℃下
          国AB SCIEX公司），ALC-M型离体肠灌流装置（上海奥
                                                              保存，待测。
          尔科特生物科技有限公司），AS 60/220.R2 型电子天平
                                                              2.3 肠吸收样品液中5种指标成分的定量分析
         （波兰RADWAG公司）等。
                                                                  采用超高效液相色谱-串联质谱（UHPLC-MS/MS）
          1.2 主要药品与试剂
                                                              技术测定肠吸收样品液中柴胡皂苷 A、B2、C、D、F 的质
              北柴胡药材由山西振东道地药材公司提供，经山西
                                                              量浓度。
          医科大学药学院高建平教授鉴定为伞形科植物柴胡（北
                                                              2.3.1 色谱与质谱条件
          柴胡）B. chinense DC.的干燥根。药材经晾干后粉碎，保
                                                                  以 Phenomenex  Kinetex  C18 （2.1  mm×100  mm，2.6
          存于阴凉干燥处，备用。
                                                              μm）为色谱柱，0.1% 甲酸溶液（A）-0.1% 甲酸乙腈溶液
              柴 胡 皂 苷 A 对 照 品（批 号 AF20081812，纯 度 ≥
                                                             （B）为流动相进行梯度洗脱（0～13 min，33%B；13～
          98.62%）、柴胡皂苷 B2对照品（批号 AF9101203，纯度≥
                                                              14.5 min，33%B→40%B；14.5～15.5 min，40%B→33%B；
          98.49%）、柴胡皂苷 C 对照品（批号 AF20101310，纯度≥
                                                              15.5～17 min，33%B→40%B；17～24 min，40%B→60%B；
          99.76%）、柴胡皂苷D对照品（批号AF20091003，纯度≥
                                                              24～25 min，60%B→33%B）；流速为 0.25 mL/min；柱温
          99.37%）、柴胡皂苷 F 对照品（批号 AF21010203，纯度≥
                                                              为25 ℃；进样量为5 μL；平衡时间为3 min。
          98.88%）均购自成都埃法生物科技有限公司；乙腈、甲醇
                                                                  采用电喷雾离子源，以多反应监测（multiple reac‐
          均为色谱纯，甲酸为质谱纯，水为蒸馏水。
                                                              tion monitoring，MRM）模式进行正离子扫描；离子源温
          1.3 实验动物
                                                              度为 550 ℃；气帘气压力为 40 psi；离子化电压为 5 500
              SPF级雄性SD大鼠15只，体重为（230±20）g，由辽
                                                              V；喷雾气压力为50 psi；辅助加热气压力为50 psi。5种
          宁长生生物技术股份有限公司提供，动物生产许可证号
                                                              柴胡皂苷类成分的MRM参数如表1所示。
          为SCXK（辽）2020-0001。所有大鼠均自由饮食，并饲养
                                                                    表1 5种柴胡皂苷类成分的MRM参数
          于相对湿度 45%～55%、室温 21～25 ℃、12 h 明暗交替
                                                              成分        母离子m/z    子离子m/z    去簇电压/V    碰撞能/eV
          的动物房内。本研究实验方案符合遵义医科大学科学                             柴胡皂苷A      781.4     455.4      45        35
          研 究 伦 理 委 员 会 的 相 关 规 定（伦 理 编 号 ZMU21-              柴胡皂苷B 2    781.4     455.4      45        35
                                                              柴胡皂苷C      927.5     421.5      45        35
          2206-007）。
                                                              柴胡皂苷D      781.4     455.4      45        35
          2 方法与结果                                             柴胡皂苷F      929.5     423.4      45        35
          2.1 溶液的制备                                           2.3.2 专属性考察
          2.1.1 Tyrode液                                           取空白肠液、空白肠液+混合对照品储备液（柴胡皂
              称取氯化钠 8.0 g、氯化钾 0.2 g、氯化镁 0.1 g、碳酸              苷A、B2、C、D、F质量浓度分别为2.50、12.50、5.00、4.00、
          氢钠1.0 g、磷酸二氢钠0.05 g，加水500 mL溶解；称取氯                  6.25 μg/mL）、空白肠液+柴胡总皂苷提取液（8 g/mL）、
          化钙0.2 g，加水500 mL溶解；取上述2种溶液，混匀，再                     90 min 时柴胡总皂苷提取液的十二指肠吸收样品液各
          加入葡萄糖1.0 g，混匀，即得。                                   适量，按“2.2”项下方法处理后，再按“2.3.1”项下条件进
          2.1.2 柴胡总皂苷提取液                                      样分析，记录色谱图（空白肠液图略，其余见图1）。结果
                                       [11]
              参照柴胡总皂苷的提取方法 ：称取柴胡药材粉末                          显示，柴胡皂苷A等5种待测成分的分离度良好，空白肠
          100 g，加8倍量的80%乙醇，浸泡1 h后回流提取2 h×3                    液不干扰待测成分的定量分析，且各对照品与样品色谱
          次，合并提取液，滤过，回收乙醇至无醇味；加水分散，旋                          峰的保留时间一致，表明方法专属性良好。


          · 1682 ·    China Pharmacy  2023 Vol. 34  No. 14                            中国药房  2023年第34卷第14期
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