Page 19 - 《中国药房》2023年14期

次 分 析（analytic hierarchy process，AHP）法 、Plackett- 2.1.2 供试品溶液的配制
Burman（PB）实验设计和 Box-Behnken 响应面法优化补 取补骨脂饮片适量，粉碎，过 60 目筛，称取 10.00 g
骨脂有效成分的提取工艺；最后通过密度测定研究补骨 过筛粉末，加入 7 倍量的 67.5% 乙醇，按浸渍法提取后，
脂提取液对斑马鱼黑色素生成的影响，以此验证补骨脂 搅拌过 200 目筛，收集滤液。取提取液适量，13 000
提取液治疗白癜风的药效作用，为医院制剂的研发、补 r/min离心10 min，取上清液用0.22 μm有机相针式微孔
骨脂的工业化生产以及进一步的药理学研究奠定基础。 滤膜过滤，取续滤液用乙醇稀释 15 倍后作为供试品
1 材料 溶液。
2.1.3 色谱条件
1.1 主要仪器
以Halo C18 （4.6 mm×100 mm，2.7 μm）为色谱柱；以
本研究所用主要仪器包括Acquity型超高效液相色
0.1%甲酸溶液为流动相A，以乙腈为流动相B进行梯度
谱仪和 2996 型紫外检测器（美国 Waters 公司）、225D 型
洗脱（0～5 min，15%B；5～7.5 min，15%B→17%B；7.5～
十万分之一电子天平（德国Sartorius公司）、SZ2-ILST型
9 min，17%B→35%B；9～17 min，35%B→42%B；17～
立体显微镜（日本Olympus公司）。
20 min，42%B→48%B；20～28 min，48%B→51%B；28～
1.2 主要药品与试剂
40 min，51%B→75%B；40～43 min，75%B；43～47 min，
补骨脂饮片（盐炙品，产地云南，批号 20210618-1）
75%B→15%B）；流 速 为 0.6 mL/min；检 测 波 长 为 246
购自上海万仕诚国药制品有限公司；补骨脂素对照品
nm；进样量为2 μL。该色谱条件下，供试品溶液和混合
（批号 1018444-F2290010，纯度＞98%）、异补骨脂素对
对照品溶液的色谱图见图1。
照品（批号1017007-HO150006，纯度＞98%）均购自上海
0.10 7
安谱实验科技有限公司；新补骨脂异黄酮对照品（批号 0.09
1
0.08
21102723，纯 度 ＞98%）、补 骨 脂 定 对 照 品（批 号
0.07 2
21102642，纯度＞98%）均购自上海同田生物技术股份 0.06
AU 0.05
有限公司；补骨脂异黄酮对照品（批号 112021-201601，
0.04
纯度＞98%）购自中国食品药品检定研究院；补骨脂乙 0.03
0.02 3
素对照品（批号MB7009，纯度＞98%）、补骨脂酚对照品 4 5
0.01
6
（批号 MB6546，纯度＞95%）均购自大连美仑生物技术 0
0 5 10 15 20 25 30 35 40 45
有限公司；8-甲氧基补骨脂素（批号 M861678，纯度＞ t/min
A.供试品
99.5%）购自上海麦克林生化科技有限公司；1-苯基-2-硫 0.16 1
脲、蛋白酶均购自美国Sigma-Aldrich公司；甲醇、乙腈均 0.14
为色谱纯；其他试剂均为分析纯，水为超纯水。 0.12 7
0.10 2
1.3 动物 3
AU 0.08
野生型 AB 系斑马鱼来源于国家斑马鱼资源中心， 4 5
0.06
并根据上海交通大学动物护理机构委员会的标准协议 0.04
进行维护、处理和繁殖，实验动物使用许可证号为 0.02
6
SYXK（沪）2018-0028。收集斑马鱼胚胎，保存在28.5 ℃ 0
0 5 10 15 20 25 30 35 40 45
的 E3 培 养 液（5 mmol/L NaCl、0.17 mmol/L KCl、0.33 t/min
B.混合对照品
mmol/L CaCl2 和 0.33 mmol/L MgSO4 ）中，并在受精后 1：补骨脂素；2：异补骨脂素；3：新补骨脂异黄酮；4：补骨脂异黄
1～5 d（1～5 dpf）进行实验。 酮；5：补骨脂定；6.补骨脂乙素；7：补骨脂酚。
2 方法与结果 图1 供试品和混合对照品溶液的色谱图
2.1 补骨脂有效成分含量测定 2.1.4 线性关系考察
2.1.1 混合对照品溶液的配制 精密量取“2.1.1”项下混合对照品溶液，逐级稀释
精密称取补骨脂素、异补骨脂素、新补骨脂异黄酮、 后，按“2.1.3”项下色谱条件进样测定，记录峰面积。以
补骨脂异黄酮、补骨脂定、补骨脂乙素、补骨脂酚对照品 对照品质量浓度（x）为横坐标，以峰面积（y）为纵坐标，
适量，加甲醇振荡至完全溶解，配制成质量浓度分别 采用最小加权二乘法，选择 1/x 作为权重拟合因子来拟
为 105.67、62.55、100.16、50.08、111.67、50.08、1 105.10 合标准曲线，结果见表1。结果表明，7种化合物在各自
μg/mL的混合对照品溶液。 的质量浓度范围内线性关系良好。

中国药房 2023年第34卷第14期 China Pharmacy 2023 Vol. 34 No. 14 · 1677 ·