Page 59 - 《中国药房》2023年12期
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regulated  significantly （P＜0.05）.  CONCLUSIONS  Interfering  with  the  expression  of  LncRNA  NNT-AS1  may  alleviate  TAX
          chemotherapy resistance in NSCLC through targeted up-regulation of miR-582-5p and down-regulation of HMGB2.
          KEYWORDS    LncRNA  NNT-AS1；  mRNA-582-5p；  high  mobility  group  box  2；  chemotherapy  resistance；  paclitaxel；  non-small
          cell lung cancer


              肺癌是全球癌症患者相关死亡的主要原因。据估                          301G19.1 调控的 miR-582-5p/HMGB2 轴可通过磷脂酰

          计，全世界每年新发肺癌病例约 200 万例，死亡病例约                        肌醇 3 激酶/蛋白激酶 B 信号通路来调节多发性骨髓瘤
                                                                              [12]
          176万例，其中非小细胞肺癌（non-small cell lung cancer，         细胞的增殖和凋亡 。有研究指出，HMGB2 在恶性肿
          NSCLC）是主要的肺癌类型，占肺癌总病例的 80% 以                       瘤细胞中表达上调，可通过影响肿瘤细胞活力等途径
            [1]
                                                                                                    [13]
          上 。尽管近年来以手术切除、放化疗等为主的治疗手                           来促进肿瘤的发生发展和化疗耐药的发生 。但是，
          段取得了显著进步，但NSCLC患者的5年生存率仍较低                         LncRNA NNT-AS1 是否可通过 miR-582-5p/HMGB2 轴
         （20%～30%），其中肿瘤化疗耐药致治疗失败是患者复                         来调节 NSCLC 对 TAX 的化疗耐药尚无研究支持。为
          发率和病死率升高的主要原因之一，也是严重影响晚期                           此，本研究拟基于 miR-582-5p/HMGB2 轴，初步探讨
                                [2]
          肺癌患者预后的主要因素 。紫杉醇（taxol，TAX）作为                      LncRNA NNT-AS1与TAX化疗耐药的关系及潜在机制，
          一种天然抗癌药物，可通过多种分子途径调控肿瘤细胞                           为临床克服TAX耐药提供新的干预靶点。
          增殖、凋亡等生物学行为，虽为部分NSCLC患者带来希                         1 材料
                                               [3]
          望，但化疗耐药严重限制了该药的临床应用 。因此，积                          1.1 主要仪器
          极阐明TAX的耐药分子机制并挖掘新的治疗靶点，对于                              本研究所用主要仪器包括 Multiskan FC 型酶标仪
          NSCLC患者的临床治疗及预后具有重要意义。                            （美国 Thermo Fisher Scientific 公司）、LightCycler480 Ⅱ

              研究表明，TAX 化疗耐药涉及多种机制，以长链非                       型定量逆转录聚合酶链反应（qRT-PCR）仪（瑞士 Roche
          编码RNA（long non-coding RNA，LncRNA）/微RNA（mi‐         公司）、BX53型显微镜（日本Olympus公司）、Tanon 3500
          croRNA，miRNA）/信使 RNA（messenger RNA，mRNA）           型凝胶成像分析系统（上海天能科技有限公司）、FACS‐
          相互作用较为常见        [4―5] 。LncRNA 是一类本身不编码蛋            Canto Ⅱ型流式细胞仪（美国BD公司）等。
          白、长度超过 200 个碱基的非编码 RNA 分子，可从多个                     1.2 主要药品与试剂
          层面调控基因的表达，与肿瘤的发生、进展和化疗耐药                               紫 杉 醇 注 射 液（ 国 药 准 字 H20053001，批 号
          密切相关，可作为人类肿瘤发生的关键调节因子和患者                           18070211，规格 5 mL∶30 mg）购自扬子江药业集团有限
          预后的生物标志物 。其中，LncRNA 烟酰胺核苷酸转                        公司；LncRNA NNT-AS1 小分子干扰 RNA（si-LncRNA
                          [6]
          氢 酶 反 义 RNA1（LncRNA  nicotinamide  nucleotide      NNT-AS1）、LncRNA NNT-AS1 短发卡 RNA 慢病毒载体
          transhydrogenase-antisense RNA1，LncRNA NNT-AS1）作  （sh-LncRNA NNT-AS1）、miR-582-5p 模拟物（miR-582-
          为癌因子，可在包括 NSCLC 在内的多种恶性肿瘤中发                        5p mimic）、miR-582-5p 抑制物（anti-miR-582-5p）及其对
          挥作用，不仅可通过调控下游 miRNA/mRNA 信号转导                      应的阴性对照si-NC、sh-NC、miR-NC、anti-NC，生物素标
          来影响肿瘤细胞增殖、迁移及侵袭等恶性生物学行为，                           记的 miR-582-5p（Bio-miR-582-5p）及其阴性对照 Bio-
          还可参与调控NSCLC的化疗耐药            [7―9] 。本课题组前期利         miR-NC，以及相关引物均由上海吉玛制药技术有限公
          用 Starbase 在线生物信息学工具（http：//starbase.sysu.         司提供或合成；脂质体2000转染试剂（批号11668-019）、
          edu.cn）预测了与LncRNA NNT-AS1相关的下游miRNA                TRIzol 试 剂（批 号 15596018）、逆 转 录 试 剂 盒（批 号
          或 mRNA，发现 miR-582-5p 与 LncRNA NNT-AS1、高迁           11755050）均 购 自 美 国 Invitrogen 公 司 ；QuantiNova
          移率族蛋白 2（high mobility group box 2，HMGB2）均存         SYBR Green RT-PCR 试剂盒（批号 208152）购自德国

          在 潜 在 的 结 合 位 点 。 有 研 究 指 出 ，miR-582-5p 在          Qiagen 公司；双荧光素酶报告基因检测试剂盒（批号
          NSCLC 细胞系和患者临床标本中均呈显著下调，且其                         CDLG-4997）购自武汉纯度生物科技有限公司；RNA
                                                [10]
          表达降低与患者总生存期缩短显著相关 。此外，                             pull-down 试剂盒（含相应裂解液、亲和磁珠等，批号
          LncRNA NNT-AS1 可调节 miR-582-5p/F 框蛋白 11（F-          20164）购自美国Thermo Fisher Scientific公司；CCK-8试
          box protein 11，FBXO11）的信号转导，从而可促进吸烟                剂（批号CK04）购自日本Dojindo公司；RNA结合蛋白免
          诱导的慢性阻塞性肺疾病的发展 ；受 LncRNA RP11-                     疫沉淀（RNA binding protein immunoprecipitation，RIP）
                                       [11]

          中国药房  2023年第34卷第12期                                              China Pharmacy  2023 Vol. 34  No. 12    · 1461 ·
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