Page 62 - 《中国药房》2023年12期

3.2 正常细胞、亲本细胞、耐药细胞中 LncRNA NNT- 1.5 miR-NC
miR-582-5p mimic
AS1的表达水平 a a
与正常细胞（1.01±0.12）比较，亲本 A549 细胞中
LncRNA NNT-AS1 的表达水平（1.87±0.14）显著升高 荧光素酶活性 1.0
（P＜0.05）；与亲本A549细胞比较，耐药细胞A549/TAX 0.5
中LncRNA NNT-AS1的表达水平（2.54±0.15）亦显著升
高（P＜0.05），提示该指标在耐药细胞中呈高表达。
3.3 LncRNA NNT-AS1 与 miR-582-5p、miR-582-5p 与 0
HMGB2的靶向关系 Ⅰ Ⅱ Ⅲ Ⅳ
A.双荧光素酶报告基因实验
Starbase在线生物信息学工具预测显示，miR-582-5p a
25 15 IgG
与 LncRNA NNT-AS1、HMGB2 存在靶向结合位点。双 Ago2 a
荧光素酶报告基因实验结果（图2A）显示，转染LncRNA 20 a
NNT-AS1-WT 或 HMGB2-WT 后 ，共 转 染 miR-582-5p 15 10
mimic 细胞的荧光素酶活性显著均低于共转染 miR-NC LncRNA NNT-AS1表达水平 10 表达水平
细 胞（P＜0.05）；而 转 染 LncRNA NNT-AS1-MUT 或 5
HMGB2-MUT后，共转染miR-582-5p mimic细胞的荧光 5
素酶活性与共转染miR-NC细胞比较差异均无统计学意 0 0
义（P＞0.05）。RNA pull-down 和 RIP 实验结果（图 2B、 Ⅴ Ⅵ Ⅶ Ⅷ
B. RNA pull-down实验 C. RIP实验
2C）显 示 ，转 染 Bio-miR-582-5p 后 ，细 胞 中 LncRNA Ⅰ：LncRNA NNT-AS1-WT组；Ⅱ：LncRNA NNT-AS1-MUT组；
NNT-AS1显著高于转染Bio-miR-NC细胞（P＜0.05）；与 Ⅲ：HMGB2-WT组；Ⅳ：HMGB2-MUT组；Ⅴ：Bio-miR-NC组；Ⅵ：Bio-
IgG 抗体富集结果比较，Ago2 抗体富集所得的 LncRNA miR-582-5p组；Ⅶ：LncRNA NNT-AS1；Ⅷ：miR-582-5p；a：组间比较，
P＜0.05
NNT-AS1 和 miR-582-5p 均显著增多（P＜0.05），进一步
图2 LncRNA NNT-AS1与miR-582-5p、miR-582-5p与
验证了 LncRNA NNT-AS1 与 miR-582-5p、miR-582-5p 与
HMGB2的靶向关系
HMGB2的靶向关系。
表2 各组 A549/TAX 细胞中 LncRNA NNT-AS1、miR-
3.4 体外细胞验证实验结果
582-5p、HMGB2 mRNA 及蛋白的表达情况（x±s，
3.4.1 A549/TAX 细胞转染效果及下游基因、蛋白的表
n＝3）
达情况 与 si-NC 组比较，si-LncRNA NNT-AS1 组细胞
组别 LncRNA NNT-AS1 miR-582-5p HMGB2 mRNA HMGB2蛋白
中 LncRNA NNT-AS1、HMGB2 mRNA 及其蛋白的表达 si-NC组 1.02±0.11 1.00±0.13 1.02±0.10 0.87±0.08
水平均显著降低（P＜0.05），miR-582-5p 的表达水平显 si-LncRNA NNT-AS1组 0.43±0.09 a 1.98±0.15 a 0.45±0.07 a 0.39±0.04 a
si-LncRNA NNT-AS1+anti-NC组 0.45±0.08 1.95±0.14 0.47±0.06 0.43±0.05
著升高（P＜0.05）；与 si-LncRNA NNT-AS1 组比较，si-
si-LncRNA NNT-AS1+anti-miR-582-5p组 0.47±0.10 1.36±0.12 b 0.71±0.08 b 0.74±0.07 b
LncRNA NNT-AS1+anti-NC 组细胞中上述指标的差异 a：与si-NC组比较，P＜0.05；b：与si-LncRNA NNT-AS1+anti-NC组
均无统计学意义（P＞0.05）；与 si-LncRNA NNT-AS1+ 比较，P＜0.05
anti-NC 组比较，si-LncRNA NNT-AS1+anti-miR-582-5p
HMGB2 24 kDa
组细胞中 LncRNA NNT-AS1 表达水平的差异无统计学
意义（P＞0.05），而 miR-582-5p 的表达水平显著降低 GAPDH 36 kDa
（P＜0.05），HMGB2 mRNA及其蛋白的表达水平显著升 si-NC组 si-LncRNA si-LncRNA si-LncRNA
NNT-AS1组 NNT-AS1+ NNT-AS1+anti-
高（P＜0.05）。结果见表2、图3。 anti-NC组 miR-582-5p组
图3 各组A549/TAX细胞中HMGB2蛋白表达的电泳图
3.4.2 各组 A549/TAX 细胞的活力 与 si-NC 组比较，
si-LncRNA NNT-AS1组细胞培养48、72 h时的活力均显 3.4.3 各组 A549/TAX 细胞的克隆形成能力 与 si-NC
著降低（P＜0.05）；与 si-LncRNA NNT-AS1 组比较，si- 组比较，si-LncRNA NNT-AS1组的克隆形成数显著降低
LncRNA NNT-AS1+anti-NC 组细胞各时间点活力的差 （P＜0.05）；与 si-LncRNA NNT-AS1 组比较，si-LncRNA
异均无统计学意义（P＞0.05）；与 si-LncRNA NNT-AS1+ NNT-AS1+anti-NC 组克隆形成数的差异无统计学意义
anti-NC 组比较，si-LncRNA NNT-AS1+anti-miR-582-5p （P＞0.05）；与 si-LncRNA NNT-AS1+anti-NC 组比较，si-
组细胞培养 48、72 h 时的活力均显著升高（P＜0.05）。 LncRNA NNT-AS1+anti-miR-582-5p 组的克隆形成数显
结果见表3。 著升高（P＜0.05）。结果见表3、图4。

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