Page 56 - 《中国药房》2023年12期

2.7 细胞中FXR、CYP7A1、FGF19蛋白表达检测 3.2 细胞中肝功能指标变化
按“2.3”项下方法取细胞，分组、给药、培养，每组设3 与空白组比较，模型组细胞中ALT、AST、TBIL、ALP
个复孔。待细胞培养结束后，取各组细胞，用 PBS 清洗 含量均显著升高（P＜0.05）；与模型组比较，苦参碱低、
2～3次，裂解，离心，提取总蛋白。蛋白变性后电泳，转膜、 中、高浓度组细胞中ALT（苦参碱低浓度组除外）、AST、
封闭，加入一抗（FXR、CYP7A1、FGF19、GAPDH抗体，稀 TBIL、ALP含量均显著降低（P＜0.05），结果见表2。
释比分别为1∶2 000、1∶2 000、1∶800、1∶10 000）、二抗（相 表2 各组细胞中肝功能指标变化（x±s，n＝3）
应的辣根过氧化物酶标记的 IgG，稀释比均为 1∶5 000）
分组 ALT/（ng/mL） AST/（U/L） TBIL/（μmol/L） ALP/（U/L）
孵育，显影后，用Image Lab软件分析，以目标蛋白与内参 空白组 0.358±0.011 35.375±0.455 18.313±0.304 36.814±1.502
（GAPDH）的灰度值比值评价目标蛋白的表达水平。 模型组 0.604±0.026 a 48.472±6.445 a 24.629±0.621 a 51.047±1.162 a
2.8 统计学分析 苦参碱低浓度组 0.532±0.020 41.340±1.139 b 22.751±0.393 b 44.992±0.997 b
-
采用SPSS 25.0软件进行统计分析。数据以x±s表 苦参碱中浓度组 0.478±0.015 b 39.569±0.798 b 21.122±0.295 b 42.531±0.261 b
苦参碱高浓度组 0.389±0.014 b 37.715±0.450 b 18.880±0.432 b 37.770±0.299 b
示，多组间比较采用方差分析，组间两两比较采用LSD-t
a：与空白组比较，P＜0.05；b：与模型组比较，P＜0.05
检验。检验水准α＝0.05。 3.3 细胞中FXR、CYP7A1、FGF19 mRNA表达变化
3 结果 与 空 白 组 比 较 ，模 型 组 细 胞 中 FXR、CYP7A1、
3.1 细胞活性和脂质含量变化
FGF19 mRNA 表达水平均显著降低（P＜0.05）；与模型
油酸和苦参碱对Chang Liver细胞活性无明显影响，
组比较，苦参碱低、中、高浓度组细胞中 FXR、CYP7A1、
结果见图 1。经油酸处理后的 Chang Liver 细胞内可见
FGF19 mRNA 表达水平均显著升高（P＜0.05），结果
橘红色脂滴，与空白组比较，其相对脂质含量显著升高
（P＜0.05）；与模型组比较，经低、中、高浓度苦参碱干预 见表3。
后的Chang Liver细胞内橘红色脂滴明显减少，其相对脂 表3 各组细胞中 FXR、CYP7A1、FGF19 mRNA 表达
质含量均显著降低（P＜0.05）。结果见图2。 变化（x±s，n＝3）
120 分组 FXR CYP7A1 FGF19
110 空白组 1.000±0.041 1.000±0.071 1.000±0.072
细胞存活率/% 100 模型组 0.339±0.033 a b 0.233±0.017 a b 0.359±0.028 a b
90
0.353±0.017
0.493±0.037
0.508±0.029
苦参碱低浓度组
80
70 苦参碱中浓度组 0.553±0.024 b 0.497±0.028 b 0.570±0.005 b
苦参碱高浓度组 0.808±0.036 b 0.825±0.001 b 0.776±0.014 b
60
空白组 模型组 苦参碱低 苦参碱中 苦参碱高
浓度组 浓度组 浓度组 a：与空白组比较，P＜0.05；b：与模型组比较，P＜0.05
图1 各种细胞活性变化（n＝8） 3.4 细胞中FXR、CYP7A1、FGF19蛋白表达变化
与 空 白 组 比 较 ，模 型 组 细 胞 中 FXR、CYP7A1、
FGF19蛋白表达水平均显著降低（P＜0.05）；与模型组比
较，苦参碱低、中、高浓度组细胞中FXR、CYP7A1、FGF19
蛋白表达水平均显著升高（P＜0.05），结果见图3。
4 讨论
既往的研究证实了苦参碱在 NAFLD 中的治疗潜
A.空白组染色图 B.模型组染色图 [11]
力。唐彬等 探索了苦参碱对脂肪肝模型大鼠的改善
作用，结果显示，苦参碱能够显著降低肝指数和肝组织
以及血清中的脂质指标，阻止肝细胞变性坏死，抑制炎
[12]
症损伤。艾正琳等 研究了苦参碱的抗氧化作用并观
察其治疗NAFLD模型大鼠的疗效，结果显示，苦参碱可
以显著降低模型大鼠的 ALT 和 AST 水平。本课题组前
C.苦参碱低浓度组染色图 D.苦参碱中浓度组染色图 期研究证实，苦参碱对大鼠胆汁淤积性肝损伤以及石胆
3.5 a
3.0 b 酸诱导的肝损伤细胞系均有较好的改善作用 [4，10] 。本研
相对脂质含量 2.0 b b 究进一步采用体外研究方法，证实苦参碱不仅可以降低
2.5
1.5
Chang Liver 细胞的脂质含量，还可以改善 Chang Liver
1.0
0.5 细胞的肝功能指标，因此推测苦参碱在 NAFLD 的治疗
0
空白组 模型组 苦参碱 苦参碱 苦参碱 中也具有较好的潜力。
低剂量 中剂量 高剂量
组 组 组 FXR是核受体超家族中的重要一员，其不仅参与机
E.苦参碱高浓度组染色图 F.相对脂质含量柱状图（n＝8）
a：与空白组比较，P＜0.05；b：与模型组比较，P＜0.05 体的胆汁酸代谢，还在糖类、脂质和烃类等物质的代谢
图2 各组细胞脂质变化（油红O染色，×100） 过程中发挥了重要作用，能维持机体的代谢平衡和正常

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