Page 44 - 《中国药房》2023年12期

异补骨脂苷、补骨脂素、异补骨脂素、补骨脂酚的平均加 预实验结果，设置生品水提组（质量浓度分别为 360、
样回收率分别为 96.45％、98.74％、96.52％、102.26％、 380、400、420、430 μg/mL）、流水漂洗法水提组（质量浓
100.74％，RSD 分别为 2.35％、2.49％、1.94％、1.32％、 度分别为290、300、310、320、340 μg/mL）、雷公法水提组
2.14％（n＝6），表明该方法准确度较好。 （质量浓度分别为350、360、370、380、400 μg/mL）、盐炙法
2.2.10 样品测定 精密称取“2.1”项下各样品 0.25 g， 水提组（质量浓度分别为250、260、270、290、300 μg/mL）、
按“2.2.2”项下方法制备供试样品溶液，再按“2.2.3”项下 雷公法醇沉组（质量浓度分别为 170、180、185、190、200
色谱条件进样测定，记录峰面积并代入回归方程计算样 μg/mL）、盐炙法醇沉组（质量浓度分别为420、435、440、
品中5种成分的含量。每样品平行测定3次，数据以x± 450、460 μg/mL）和空白对照组（等体积水），每组16条。
s 表示，并采用 SPSS 25.0 软件进行单因素方差分析，检 每 24 h 更换药液，连续给药 72 h，记录每组斑马鱼幼鱼
验水准 α＝0.05。结果见图 2。由图 2A 可知，与生品水 的死亡情况并计算死亡率（％）。采用Origin 8.0软件进
提样品比较，不同炮制品水提样品中补骨脂苷、异补骨 行相关回归分析[在一定范围内，药液质量浓度（X）与幼
脂苷的含量均显著降低（P＜0.05），而雷公法、盐炙法醇 鱼死亡数（Y）呈正相关，即得相应回归方程]，并计算半
沉样品中补骨脂素、异补骨脂素、补骨脂酚的含量均显 数致死浓度（half lethal concentration，LC50 ）和最大非致
著升高（P＜0.05）。由图 2B（以平均含量表示）可知，与 死浓度（maximum non-lethal concentration，MNLC），结
生品比较，补骨脂炮制品不同供试样品中的苷类成分含 果见表 2。由表 2 可见，以生药量计，雷公法、盐炙法水
量均有所降低，其中雷公法醇沉样品的苷类含量下降最 提样品对斑马鱼幼鱼的 LC50值分别为其对应醇沉样品
多（下降 49.8％）。由图 2 可以看出，水提样品以补骨脂 的2.28、2.42倍，可见这两种炮制品醇沉样品对斑马鱼幼
苷、异补骨脂苷为主，其中两者总量最高的为生品水提 鱼的毒性大于其对应水提样品；与生品水提样品比较，
样品（平均 12.023 mg/g），最低为盐炙法水提样品（平均 流水漂洗法水提样品和雷公法水提样品的毒性均有所
6.490 mg/g）；同时，与生品比较，雷公法、盐炙法醇沉样 降低（LC50、MNLC升高），但盐炙法水提样品和醇沉样品
品中这两种苷类成分的总量均有所降低，而脂溶性成分 的毒性均有所增强（LC50、MNLC降低）。
补骨脂素、异补骨脂素、补骨脂酚的总量均大幅增加，分 表2 各药物组的回归方程和LC50、MNLC
别是生品的10.0、16.5倍。
组别 回归方程 LC 50/（g/L） MNLC/（g/L）
8 补骨脂苷 生品水提组 Y＝0.200 3X－70.940 0 2.45 2.21
异补骨脂苷 流水漂洗法水提组 Y＝0.262 9X－76.943 0 5.00 4.53
补骨脂素
6 异补骨脂素 雷公法水提组 Y＝0.312 2X－112.320 0 5.38 5.02
（ mg/g ） a a a a a a 补骨脂酚 盐炙法水提组 Y＝0.243 5X－61.000 0 1.55 1.37
Y＝0.469 4X－76.714 0
雷公法醇沉组
2.13
2.36
含量/ 4 a a a a 盐炙法醇沉组 Y＝0.401 9X－39.084 0 0.64 0.53
2 a
a a a a 2.3.3 补骨脂样品对斑马鱼幼鱼基本形态的影响 选
取正常 3 dpf 野生型斑马鱼幼鱼，以急性毒性实验中各
0
生品水 流水漂洗 雷公法 盐炙法 雷公法 盐炙法 样品的MNLC作为其干预质量浓度，同时设置空白对照
提样品 法水提物 水提样品 水提样品 醇沉样品 醇沉样品
[9]
A.柱形图（x±s，n＝3） 组和阳性对照组（对乙酰氨基酚 1.2 g/L ），每组 16 条。
补骨脂 每 24 h 更换药液，连续给药 72 h，观察各组斑马鱼幼鱼
补骨脂 补骨脂 素+异补
补骨 异补骨 补骨 异补骨 补骨 苷+异补素+异补骨脂素+
脂苷 脂苷 脂素 脂素 脂酚 骨脂苷 骨脂素 补骨脂酚 合计 的基本形态。结果显示，连续给药 72 h 后，与空白对照
生品水提样品 6.627 5.396 0.261 0.055 0.072 12.023 0.315 0.388 12.411 最大值
流水漂洗法水提样品 4.593 3.718 0.186 0.212 0.231 8.311 0.398 0.629 8.940 组比较，阳性对照组斑马鱼幼鱼心包肿大，腹部肿胀，心
雷公法水提样品 3.985 3.229 0.139 0.128 0.095 7.214 0.268 0.362 7.576
盐炙法水提样品 4.113 2.377 0.206 0.036 0.054 6.490 0.241 0.295 6.785 率降低，脊柱弯曲，畸形严重；补骨脂不同样品处理组斑
雷公法醇沉样品 3.317 2.714 1.087 1.026 1.755 6.030 2.113 3.868 9.898
盐炙法醇沉样品 6.122 3.544 1.186 1.153 4.052 9.666 2.339 6.391 16.057 最小值 马鱼幼鱼均表现出不同程度的畸形，如不同程度的心包
B.热图[平均含量/（mg/g）] 肿大，雷公法醇沉组和盐炙法醇沉组的斑马鱼幼鱼均表
a：与生品水提物比较，P＜0.05 现出不同程度的尾部弯曲，而雷公法水提组斑马鱼幼鱼
图2 补骨脂不同供试样品中5种成分的含量
的畸形相对不明显。结果见图3。
2.3 补骨脂样品的肝毒性评价 2.3.4 补骨脂样品对斑马鱼幼鱼肝脏表型的影响 选
2.3.1 药液配制 称取“2.1”项下各样品适量，用DMSO 取正常 3 dpf 的 Tg 肝脏荧光转基因斑马鱼幼鱼，以急性
溶解后，再用斑马鱼培养液（称取 NaCl 0.29 g、KCl 毒性实验中各样品的MNLC作为其干预质量浓度，同时
[9]
0.012 g、CaCl2 0.036 g、MgSO4 0.04 g，用水补足至1 L，高 设置空白对照组和阳性对照组（对乙酰氨基酚1.2 g/L ），
温灭菌后即得）稀释至相应质量浓度，备用。 每组16条。每24 h更换药液，连续给药72 h。随后将斑
2.3.2 补骨脂样品的急性毒性实验 选取正常3 dpf野 马鱼幼鱼放入 5％甲基纤维素溶液中，使用显微镜进行
生型斑马鱼幼鱼，随机放置于24孔培养皿中。根据前期 肝脏表型观察并记录图像，使用 Nikon NIS-Elements

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