Page 42 - 《中国药房》2023年12期
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method，  Leigong  method，  salt  stir-frying  method，  and  ethanol  precipitates  of  processed  products  by  Leigong  method  and  salt  stir-
          frying method were 2.45， 5.00， 5.38， 1.55， 2.36， 0.64 g/L （calculated by crude drug）， and MNLC were 2.21， 4.53， 5.02， 1.37，
          2.13， 0.53 g/L （calculated by crude drug）. Compared with the blank control group， the zebrafish juveniles in each sample treatment
          group  showed  different  degrees  of  deformity，  the  liver  relative  fluorescence  intensity  was  significantly  weakened （P＜0.05  or  P＜
          0.01）.  Fat-soluble  components  such  as  bakuchiol，  isopsoralen  and  psoralen  were  highly  correlated  with  liver  fluorescence  intensity
         （R ＞0.7）.  CONCLUSIONS  The  processed  products  of  P.  corylifolia  mainly  compose  of  psoralenoside  and  isopsoralenoside  after
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          water  extraction，  the  contents  of  psoralen，  isopsoralen  and  bakuchiol  increase  after  alcohol  precipitation，  and  the  hepatotoxicity  is
          positively correlated with the contents of liposoluble compositions in P. corylifolia.
          KEYWORDS     Psoralea corylifolia； processed products； water extract； ethanol precipitate； hepatotoxicity； component content



              补骨脂为豆科植物补骨脂 Psoralea corylifolia L. 的           依据。
          干燥成熟果实，始载于《开宝本草》，有“破故纸”“胡故                          1 材料
          子”“黑故子”之称。该药性温、味辛，入肾、脾经，具有温                         1.1 主要仪器
                                                        [1]
          肾助阳、纳气平喘、温脾止泻的功效，为临床常用中药 。                              本研究所用主要仪器包括 1260 型 HPLC 仪（美国
          近年来，补骨脂及相关制剂的临床不良反应/事件（以肝                           Agilent公司），SMZ25型荧光立体显微镜（日本Nikon公
          损伤为主）日益增多，已成为制约其开发及应用的关键，                           司），BS210S、BT25S 型电子分析天平[赛多利斯科学仪
                                    [2]
          故其用药安全性问题亟待解决 。                                     器（北京）有限公司]等。
              有关补骨脂毒性及减毒方法的论述可追溯到南北                           1.2 主要药品与试剂
          朝时期的《雷公炮炙论》，该书记载“凡使，性本大燥，毒，                             补骨脂药材（批号200501）购自亳州市中药饮片厂，
          用酒浸一宿，漉出，却用东流水浸三日夜，却蒸从巳至申                           经陕西省中医药研究院张红研究员鉴定为豆科植物补
          出，日干用”。现代研究表明，雷公炮制法（以下简称                            骨脂P. corylifolia L.的干燥成熟果实。
                     [3]
         “雷公法”）中的酒浸步骤可去除部分补骨脂素、异补骨                                补 骨 脂 素 对 照 品（批 号 110739-201918，纯 度
          脂素、补骨脂酚等脂溶性毒性成分；水浸、隔水蒸等步骤                           99.6％）、异补骨脂素对照品（批号 110738-202016，纯度
          可去除部分补骨脂苷、异补骨脂苷等水溶性成分，并有                            99.4％）均购自中国食品药品检定研究院；补骨脂苷对照
          少量苷类成分被转化，从而使得补骨脂的毒性有所下                             品（批号CHB-B-163）、异补骨脂苷对照品（批号CHB-Y-
            [4]
          降 。除雷公法外，补骨脂炮制方法还包括盐炙、清炒、                           280）、补骨脂酚对照品（批号CHB-B-099）均购自成都克
          酒浸等，临床常以盐炙品入药。研究表明，盐炙后补骨                            洛玛生物科技有限公司，纯度均不低于 98％；瓜渚湖黄
          脂的药性得以改变，可用于降逆、补益肝肾，并可通过祛                           酒（酒精度14.5％）购自绍兴柯桥第三酒厂；对乙酰氨基
                      [5]
          燥而缓和药性 。目前，补骨脂致肝毒性的物质基础仍                            酚对照品（阳性对照，批号 SP9520，纯度≥98％）购自北
          不明确，学界认为香豆素类和单萜酚类成分可能是该药                            京索莱宝科技有限公司；甲基纤维素（货号M0262）购自
          致肝毒性的主要成分，其中补骨脂苷、异补骨脂苷、补骨                           美国Sigma公司；甲醇、乙腈均为色谱纯，甲酸、二甲基亚
                                                  [6]
          脂素、异补骨脂素、补骨脂酚具有潜在的肝毒性 。本课                           砜（DMSO）等其余试剂均为分析纯，水为超纯水。
          题组前期研究发现，不同方法制备的补骨脂炮制品中上                            1.3 实验动物
          述潜在肝毒性成分的含量差异显著；同时，含补骨脂处                                实验中所用到的斑马鱼为受精后 3 d（3 days post
          方的不同提取方式（如水提、醇沉等）对上述成分的含量                           fertilization，3 dpf）的 AB 系野生型斑马鱼和 Tg（lfabp：
                  [7]
          亦有影响 。现有研究大多集中在补骨脂炮制前后的化                            mcherry）肝脏荧光转基因斑马鱼。所有斑马鱼均饲养
          学成分变化及单个成分致肝毒性等方面，而不同炮制品                            于斑马鱼养殖饲养系统（照明 14 h/黑暗 10 h 交替，水温
          的提取方式（水提、醇沉）对补骨脂中5种潜在致肝毒性                           28 ℃，pH7.5，用 NaCl 调节电离度至 500）中。取健康性
          成分的影响尚未明确。基于此，本研究以补骨脂为对                             成熟的雌雄 AB 系野生型斑马鱼或 Tg 肝脏荧光转基因
          象，采用高效液相色谱（HPLC）法对其不同炮制品水提                          斑马鱼按1∶1比例放入交配盒中，用透明挡板将雌雄斑
          和醇沉样品中补骨脂素、异补骨脂素、补骨脂苷、异补骨                           马鱼分开；次日清晨，除去挡板，斑马鱼交配产卵，于产
          脂苷、补骨脂酚5种化学成分的含量进行测定；采用斑马                           卵后10 min收集鱼卵，并将鱼卵移入装有胚胎培养水的
          鱼模型初步评价补骨脂不同炮制品水提和醇沉样品的                             无菌培养皿中，每天换水，于 28 ℃恒温培养箱中培养，
          肝毒性，并进一步分析上述成分与肝毒性的相关性，为                            备用。所有斑马鱼的饲养管理均符合国际实验室动物
          补骨脂致肝毒性的物质基础及其炮制减毒研究提供                              评估和认可委员会的认证要求。


          · 1444 ·    China Pharmacy  2023 Vol. 34  No. 12                            中国药房  2023年第34卷第12期
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