Page 43 - 《中国药房》2023年12期

2 方法与结果 4
2 000
2.1 补骨脂供试样品的制备 1 500
2.1.1 补骨脂生品及不同炮制品的水提样品 按本课 mAU 1 000 2 3
题组前期建立的方法制备雷公法、流水漂洗法、盐炙法 500 1 5
0
[8]
炮制品 。称取补骨脂生品及上述不同炮制品各100 g， 0 10 20 30 40
加8倍量水，煎煮提取1 h×2次，过滤，合并滤液，冻干， t/min
A.混合对照品溶液
即得补骨脂生品和雷公法、流水漂洗法、盐炙法炮制品
2 000
的水提样品（每1 g样品分别相当于生药6.226 7、15.479 9、
1 500 1
13.966 5、5.452 6 g）。 mAU 1 000 2 34
2.1.2 补骨脂不同炮制品的醇沉样品 称取雷公法、盐 500
5
0
炙法炮制品各100 g，加8倍量水，煎煮提取1 h×2次，过
0 10 20 30 40
滤，合并滤液并浓缩至一定体积，加乙醇至醇体积分数 t/min
B.供试样品溶液（雷公法醇沉样品）
为70％，于4 ℃下静置24 h，过滤，回收溶剂，冻干，即得
1：补骨脂苷；2：异补骨脂苷；3：补骨脂素；4：异补骨脂素；5：补骨
雷公法和盐炙法炮制品的醇沉样品（每 1 g 样品分别相 脂酚
当于生药5.494 5、13.054 8 g）。 图1 5种成分含量测定的HPLC图
2.2 补骨脂样品中5种成分的含量测定
测限、定量限，结果显示，补骨脂苷、异补骨脂苷、补骨脂
采用HPLC法进行测定。
素、异补骨脂素、补骨脂酚的检测限分别为 0.05、0.04、
2.2.1 混合对照品溶液的制备 分别精密称取补骨脂
0.02、0.02、0.09 μg/mL，定量限分别为 0.16、0.13、0.06、
苷、异补骨脂苷、补骨脂素、异补骨脂素、补骨脂酚对照
0.05、0.38 μg/mL。
品适量，加甲醇溶解并定容，摇匀，得上述成分质量浓度
表1 补骨脂5种成分线性关系考察结果
分别为 0.582 5、0.502 5、0.240 0、0.567 5、0.330 0 mg/mL
待测成分 回归方程 r 线性范围/µg
的混合对照品溶液，备用。 补骨脂苷 Y＝4 827.4X－190.42 0.999 8 0.046 6～5.825 0
2.2.2 供试样品溶液的制备 分别精密称取“2.1”项下 异补骨脂苷 Y＝5 008.6X+71.84 0.999 8 0.040 2～5.025 0
补骨脂素 Y＝8 945.4X－48.42 0.999 3 0.019 2～2.400 0
各样品 0.25 g，置锥形瓶中，加甲醇 30.0 mL，称定质量，
异补骨脂素 Y＝7 451.3X+732.95 0.999 7 0.045 4～5.675 0
超声（功率 600 W，频率 40 kHz）40 min，放冷，再次称定 补骨脂酚 Y＝755.5X+0.35 0.999 6 0.026 4～3.300 0
质量，用甲醇补足减失的质量，过滤，取续滤液以 0.45 2.2.6 精密度试验 取“2.2.1”项下混合对照品溶液，按
μm滤膜过滤，即得各供试样品溶液。 “2.2.3”项下色谱条件连续进样6次，记录各成分峰面积，
2.2.3 色谱条件 以 Kromasil 100-5-C18 （4.6 mm×250 计算得补骨脂苷、异补骨脂苷、补骨脂素、异补骨脂素、
mm，2.5 μm）为色谱柱，以甲醇（A）-0.1％甲酸溶液（B） 补骨脂酚峰面积的 RSD 分别为 1.09％、1.36％、1.34％、
为流动相进行梯度洗脱（0～10 min，30％A→40％A； 1.28％、2.05％（n＝6），表明仪器精密度良好。
10～30 min，40％A→90％A；30～50 min，90％A；50～ 2.2.7 重复性试验 精密称取同一补骨脂供试样品（雷
52 min，90％A→30％A；52～60 min，30％A）；柱温为 公法醇沉样品）6份，每份0.25 g，按照“2.2.2”项下方法制
30 ℃；流速为1.0 mL/min；检测波长为246 nm；进样量为 备供试样品溶液，再按“2.2.3”项下色谱条件进样分析，
10 μL。 记录峰面积并代入回归方程计算补骨脂苷、异补骨脂
2.2.4 专属性考察 取混合对照品溶液、供试样品溶液 苷、补骨脂素、异补骨脂素、补骨脂酚的含量。结果显
（雷公法醇沉样品）、阴性对照溶液（甲醇）各适量，按 示，上述成分含量的RSD分别为0.96％、1.25％、2.11％、
“2.2.3”项下色谱条件进样测定，记录色谱图。结果显 2.43％、2.84％（n＝6），表明方法重复性良好。
示，各待测成分色谱峰分离度较好，阴性对照无干扰。 2.2.8 稳定性试验 取同一补骨脂供试样品溶液（雷公
具体色谱图如图1所示（阴性对照溶液HPLC图略）。 法醇沉样品），按“2.2.3”项下色谱条件，依次于室温下放
2.2.5 线性关系与检测限、定量限考察 分别取“2.2.1” 置0、2、4、8、10、12、24 h时进样10 μL，记录峰面积，计算
项下混合对照品溶液0.2、2.0、6.0、10.0、20.0、25.0 mL，分 得补骨脂苷、异补骨脂苷、补骨脂素、异补骨脂素、补骨脂
别用甲醇稀释至 25 mL，混匀，制得系列混合对照品溶 酚峰面积的 RSD 分别为 1.90％、2.63％、2.70％、2.72％、
液。分别吸取上述溶液 10 μL，按“2.2.3”项下色谱条件 2.77％（n＝7），表明样品在室温下放置24 h内稳定。
测定，以对照品进样量为横坐标（X）、峰面积为纵坐标 2.2.9 加样回收率试验 取“2.1”项下补骨脂样品（雷公
（Y）进行线性回归，得回归方程（表 1）。结果表明，5 种 法醇沉样品）6份，每份约0.125 g，精密称定，分别加入5
成分在各自进样量范围内与峰面积的线性关系均良好 种对照品各适量。按“2.2.2”项下方法制备供试品溶液，
（r＞0.999）。分别以信噪比 3∶1、10∶1 计算各成分的检 再按“2.2.3”项下色谱条件进样分析，计算得补骨脂苷、

中国药房 2023年第34卷第12期 China Pharmacy 2023 Vol. 34 No. 12 · 1445 ·