Page 90 - 《中国药房》2023年11期

mL/min，样品体积为1 μL。升温程序如下：初始温度为 可以加速挥发油从北沙参细胞壁的渗出，降低挥发油在
60 ℃，持续 1 min；然后以 8 ℃/min 的速度升至 110 ℃， 水中的溶解度，减少挥发油中某些成分被水溶解，此方
保持 5 min；继续以 8 ℃/min 的速度升至 250 ℃，保持 5 法可显著提高挥发油的产量 。但当 KCl 加入过量时，
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min；最后以20 ℃/min的速度升至280 ℃，保持10 min。 KCl的加入可能会引起提取物中可溶性物质增加，使溶
2.3 抗真菌活性的测定 液沸点升高，从而降低挥发油的提取率 。
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采用纸片扩散法 测定北沙参茎叶挥发油和根挥 L9 （3）正交实验结果显示，北沙参最佳工艺为料液
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发油对茄病镰刀菌、半裸镰刀菌、尖孢镰刀菌、寄生曲 比1∶15，蒸馏时间5 h，KCl浓度15%，详见表1。在此基
霉、黄曲霉的抗真菌活性。将被测真菌在 28 ℃黑暗条 础上对各因素进行方差分析，结果显示，在3个因素中，
件下培养7 d，待菌丝布满培养皿后，在距离中心2 cm处 KCl 浓度对挥发油提取率的影响最大，但 KCl 浓度对挥
打孔，将每个真菌在超净工作台制成直径为 6 mm 的圆 发油提取率的影响与其他因素差异无统计学意义（P＞
形菌块。将菌块放入新配制的马铃薯葡萄糖琼脂培养 0.05），详见表2。为进一步确定北沙参挥发油对提取工
基（马铃薯 200 g、葡萄糖 20 g、琼脂 15 g、蒸馏水 1 L）的 艺的可靠性与稳定性，在此条件下，进行3次工艺验证，
中心。用打孔机将定性滤纸制成直径6 mm的圆盘。将
结果显示，北沙参茎叶挥发油和根挥发油的提取率分别
3 张已灭菌的滤纸片从 3 个方向与真菌块等距离放置，
为（0.933±0.017）、（1.365±0.023） g/kg，RSD 均 小 于
处理组每张滤纸片加入5 μL挥发油，对照组用等量的二
2.00%，说明该工艺合理、稳定、重现性较好。
甲基亚砜代替挥发油，将处理组（包括茎叶挥发油组和
表1 正交实验结果
根挥发油组）和对照组在28 ℃黑暗中培养3 d，观察其生
编号 料液比 蒸馏时间/h KCl浓度 挥发油提取率/（g/kg）
长情况，使用相机记录抗真菌实验结果。用标尺测量抑 1 1 1 1 0.511
菌圈后，将数据导入Image J 1.8.0软件，记录其抑菌圈的 2 1 2 2 0.556
3 1 3 3 0.381
直径，分别记为IC 处理和IC 对照，抑菌圈直径越大表示抗菌 4 2 1 2 0.458
效果越好。实验重复3次。最后计算菌丝抑制率，菌丝 5 2 2 3 0.436
6 2 3 1 0.539
抑制率（%）＝（IC 对照－IC 处理）/（IC 对照－6 mm）×100%。
7 3 1 3 0.375
由于北沙参根的抑菌效果并不显著，较茎叶抑菌效果相 8 3 2 1 0.675
差较大，故以北沙参茎叶挥发油为实验对象开展倍半稀 9 3 3 2 0.767
K1 1.448 1.344 1.725
释实验。为进一步明确北沙参茎叶挥发油的抗真菌活 K2 1.433 1.231 1.781
性，将茎叶挥发油分别用二甲基亚砜稀释成4个浓度梯 K3 1.817 1.687 1.192
R 0.384 0.456 0.589
度（100%、50%、25%、12.5%），真菌对照组滤纸片上加入
5 μL二甲基亚砜，用同样的公式分别计算菌丝抑制率。 表2 方差分析结果
2.4 统计学分析 因素 离差平方和 自由度 均方 F P
料液比 0.032 2 0.016 2.797 0.263
采用 SPSS 22.0 软件进行统计学分析，计量资料以 蒸馏时间 0.025 2 0.012 2.192 0.313
x±s 表示，多组间比较采用单因素方差分析，组间两两 KCl浓度 0.070 2 0.035 6.249 0.138
误差 0.011 2 0.006
比较采用LSD-t检验。检验水准α＝0.05。
3 结果与分析 3.2 北沙参茎叶和根挥发油的GC-MS分析
3.1 挥发油提取工艺的优化 采用 GC-MS 数据和 NIST 17.0 数据库，鉴定北沙参
单因素实验结果显示，处理1组、处理2组、处理3组 茎叶和根挥发油所含成分，结果见图1。由图1可知，从
（20%KCl溶液）与对照组的挥发油提取率分别为（0.202± 北沙参茎叶挥发油中共鉴定出 11 种成分，占总油量的
0.010）、（0.434±0.020）、（0.514±0.030）、（0.362±0.050） 77.44%，主要由人参炔醇（38.21%）和 α-伞花素-15-醇
g/kg，处理3组与其他组进行比较，其挥发油提取率显著 （14.32%）组成，其次为14-羟基-α-木榄烯（4.92%）、水芹
升高（P＜0.05）。将 10%、15%、20% 的 KCl 溶液作为提 醛（3.96%）、植物醇（3.55%）。此外，茎叶挥发油还含有
取溶剂，进一步考察不同浓度的KCl溶液对提取挥发油 一 定 的 桧 烯（2.74%）、新 植 二 烯（2.72%）、胡 萝 卜 醇
是否有显著性差异，结果显示，15%KCl 溶液下挥发油 （2.38%）和大根香叶烯B（2.17%），它们均超过了北沙参
提取率[（0.573±0.010） g/kg]显著高于10%KCl[（0.512± 茎叶挥发油总油量的2%，其余成分的含量较低，每一种
0.010） g/kg）]和 20%KCl[（0.519±0.010） g/kg）]溶液的 均低于茎叶挥发油含量的1.30%。北沙参茎叶挥发油化
提取率（P＜0.05）。可见，利用盐溶液辅助提取挥发油 学成分鉴定结果见表3。

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