Page 59 - 中国药房2023年10期
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变应性鼻炎（allergic rhinitis，AR）是一种以鼻塞、流 1.2 主要药品与试剂
涕、打喷嚏、鼻痒为特征且病因复杂的鼻黏膜变应性炎 YPF+[规格为每支装10 mL（每1 mL对应生药总量
症性疾病。近年来，AR 的发病率显著升高，使 10%～ 1.05 g）]由成都中医药大学附属医院药剂科根据现有工
40%的全球人口深受困扰，已成为耳鼻喉科医师和患者 艺，以蜜炙黄芪、生白术、防风、酒川芎、牡丹皮5味中药
共同关注的重要医疗问题 [1―2] 。 为原料，煎煮并浓缩而得。
细胞焦亡是近年来新发现的一种与炎症相关的细 阳性对照糠酸莫米松鼻喷雾剂[货号U025821，规格
胞程序性死亡形式。有研究指出，活性氧（reactive oxy‐ 为每瓶 60 揿，每揿含糠酸莫米松（mometasone furoate，
gen species，ROS）/核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白 MF）50 μg，药物含量 0.05%（g/g）]购自斯洛文尼亚 Lek
3（nucleotide-binding oligomerization domain-like recep‐ Pharmaceuticals d.d. 公司；OVA、氢氧化铝粉末（货号分
tor protein 3，NLRP3）/胱天蛋白酶 1（caspase-1）/gasder‐ 别为 M0228A、MKCM1237）均购自西格玛奥德里奇（上
min D（GSDMD）作为经典的细胞焦亡通路，参与了 AR 海）贸易有限公司；小鼠源 NLRP3 抗体（货号 381207）、
的发生与发展 [3―4] 。当暴露于过敏原时，鼻黏膜会产生 辣根过氧化物酶（HRP）标记的山羊抗兔免疫球蛋白 G
ROS，从而激活 NLRP3 炎症小体，使 caspase-1 活化，活 （IgG）二抗（货号 511203）、HRP 标记的山羊抗小鼠 IgG
化的 caspase-1 切割 GSDMD，使鼻黏膜上皮细胞产生膜 二抗（货号 511103）均购自成都正能生物技术有限责任
孔，同时使成熟的白细胞介素 1β（interleukin-1β，IL- 公 司 ；兔 源 caspase-1 抗 体（货 号 22915-1-AP）、兔 源
1β）、IL-18大量产生并分泌 [5―6] ，从而引发过度病理性炎 GSDMD 抗体（货号 20770-1-AP）、小鼠源磷酸甘油醛脱
症反应，导致鼻黏膜损伤；与此同时，鼻黏膜的损伤又会 氢酶（GAPDH）抗体（货号 60004-1-Ig）均购自武汉三鹰
激活更多的复杂细胞信号转导并诱导炎症介质释放，形 生物技术有限公司；大鼠 IL-1β 酶联免疫吸附测定
成“病理损伤-炎症反应-损伤加重”的恶性循环，最终加 （ELISA）试剂盒（货号 ER008-48）购自依科赛生物科技
[7]
剧AR患者病情，甚至导致病情迁延不愈 。 （太 仓）有 限 公 司 ；大 鼠 IL-18 ELISA 试 剂 盒（货 号
玉屏风散（Yupingfeng powder，YPF）是治疗肺卫气 GWNVYR39MV）购自武汉伊莱瑞特生物科技股份有限
不固证的经典名方，在调节 AR 患者鼻黏膜组织形态和 公司；ROS 检测试剂盒（货号 S0033S）购自上海碧云天
[8]
免疫因子、炎症细胞因子分泌等方面的效果确切 。 生物技术有限公司；无血清 RPMI-1640 培养液（货号
玉屏风加味鼻喷剂（原名克敏芪丹鼻喷剂，Modified C11875500BT）购自美国 Gibco 公司；苏木精染液（批号
yupingfeng nasal spray，YPF+）是成都中医药大学附属医 201901）购自上海懿洋仪器有限公司；伊红染液（批号
院耳鼻喉科田理教授在YPF的基础上加入牡丹皮、川芎 2021012501）购自成都科隆化学品有限公司；RNA 抽提
研制而成的纯中药鼻喷剂，较原方具有更强的活血通窍 试剂盒（货号 R1200）、组化 DAB 显色剂试剂盒（货号
功效，临床疗效显著 [9―10] 。本课题组前期研究表明， DA1016）均购自北京索莱宝科技有限公司；ECL化学发
YPF+可减轻AR模型大鼠鼻黏膜损伤，并筛选出了最佳 光试剂盒（货号 MA0186）、BCA 蛋白定量试剂盒（货号
药效浓度（1.05 g/mL）、最佳给药剂量（每侧 50 μg）及使 MA0082）均购自成都美仑生物科技公司；cDNA 第一链
用频次（每天2次） [11―12] ，但其作用机制尚不清楚。因此， 合成试剂盒（货号FP205）购自天根生化科技（北京）有限
本研究以卵清蛋白（ovalbumin，OVA）诱导的AR模型大 公司；其余试剂均为实验室常用规格，水为蒸馏水。
鼠为对象，进一步观察 YPF+对其鼻黏膜损伤的改善作 1.3 实验动物
用，以及对细胞焦亡通路ROS/NLRP3/caspase-1/GSDMD 清 洁 级 雄 性 SD 大 鼠 40 只 ，6～8 周 龄 ，体 质 量
的影响，初步探究该药治疗 AR 的潜在机制，以期为 （170±10）g，由北京华阜康生物科技股份有限公司提供
YPF+的临床应用提供理论依据。 [动物生产许可证号SCXK（京）2019-0008]。所有实验程
1 材料 序和方案均经成都中医药大学附属医院实验动物伦理
1.1 主要仪器 委员会批准（伦理审查编号 2022DL-010）。所有大鼠均
本研究所用主要仪器包括 DNM-9602G 型酶标仪 饲养于光线良好、温湿度适宜且通风的实验室内，自由
（成都普朗医疗设备有限公司）、Q2000A 型聚合酶链反 摄食、饮水。
应（PCR）仪（杭州朗基科学仪器有限公司）、CX31 型光 2 方法
学显微镜（日本 Olympus 公司）、JY300LIE 型电泳仪（北 2.1 造模、分组、给药与取材
[13]
京君意东方电泳设备有限公司）、Chemiscope 6100 型显 所有大鼠适应性喂养3 d后，参照文献方法 ，采用
影仪（上海勤翔科学仪器有限公司）等。 OVA 0.3 mg+氢氧化铝30 mg（以生理盐水1 mL为溶剂）
中国药房 2023年第34卷第10期 China Pharmacy 2023 Vol. 34 No. 10 · 1205 ·
