Page 61 - 中国药房2023年10期

行 PCR 扩增，反应体系（共 20 μL）包括 cDNA 模板 1 10 10
a a
μL，上、下游引物各 1 μL，SYBR Green 10 μL，DEPC 水 8 8
7 μL。反应条件如下：95 ℃预变性 5 min；94 ℃变性 10 6 b 6 b b
s，55 ℃退火 20 s，72 ℃延伸 30 s，进行 40 个循环。以 行为学评分 4 b 病理评分 4

β-actin 为内参，采用 2 －ΔΔCt 法计算各目标基因 mRNA 的
2 2
表达水平并以空白组为标准进行归一化处理。各目标
0 0
基因引物由成都瑞普信生物技术有限公司设计，由赛默 空白组 模型组 YPF+组 MF组 空白组 模型组 YPF+组 MF组
A.行为学评分（x±s，n＝10） B.病理评分（x±s，n＝5）
飞世尔科技（中国）有限公司合成，具体序列及产物长度
a：与空白组比较，P＜0.05；b：与模型组比较，P＜0.05
见表1。 图1 各组大鼠的行为学评分和病理评分
表1 目标基因引物序列及产物长度
（P＜0.05）。YPF+组大鼠鼻黏膜组织上皮排列整齐，纤
目标基因 引物序列 产物长度/bp 毛完整、方向一致，炎症细胞浸润减轻，固有层血管无明
NLRP3 上游：5′-TCTGTTCATTGGCTGCGGAT-3′ 314
下游：5′-GCCTTTTTCGAACTTGCCGT-3′ 显扩张；MF组大鼠鼻黏膜组织炎症细胞浸润改善，但上
caspase-1 上游：5′-CACGAGACCTGTGCGATCAT-3′ 239 皮层恢复情况一般；两组大鼠的病理评分均较模型组显
下游：5′-CTTGAGGGAACCACTCGGTC-3′
GSDMD 上游：5′-CAGTGGACTGCCTTCGGAAT-3′ 197 著降低（P＜0.05）。结果见图1B、图2。
下游：5′-AGTCACACGCAGCATACACA-3′
β-actin 上游：5′-CGTTGATATCCGTAAAGACC-3′ 286
下游：5′-TACATAACAGTCCGCCTAGAAG-3′
2.7 大鼠血清中IL-1β、IL-18含量的检测
取“2.1”项下各组大鼠的腹主动脉血适量，于4 ℃下
静置过夜，离心，取上层血清，使用ELISA法以酶标仪于

450 nm 波长下检测各组大鼠血清中 IL-1β、IL-18 含量， A.空白组 B.模型组
严格按照试剂盒说明书操作。
2.8 统计学方法
使用SPSS 25.0软件对数据进行统计分析。计量资
料以 x±s 表示，多组间比较采用单因素方差分析，组间
两两比较采用LSD-t检验。检验水准α＝0.05。
3 结果 C. YPF+组 D. MF组
黑色箭头：纤毛及上皮细胞；绿色箭头：腺体；黄色箭头：血管；蓝
3.1 YPF+对大鼠行为学评分的影响
色箭头：炎症细胞浸润
与空白组比较，模型组大鼠的行为学评分显著升高 图 2 各组大鼠鼻黏膜组织的病理变化（HE 染色，
（P＜0.05）。与模型组比较，YPF+组和 MF 组大鼠的行 ×200）

为学评分均显著降低（P＜0.05）。结果见图1A。 3.3 YPF+对大鼠鼻黏膜组织中ROS水平的影响
3.2 YPF+对大鼠鼻黏膜组织病理损伤的影响 与空白组比较，模型组大鼠鼻黏膜组织中ROS水平
空白组大鼠鼻黏膜组织形态正常。模型组大鼠鼻 显著升高（P＜0.05）。与模型组比较，YPF+组和 MF 组
黏膜组织结构紊乱，纤毛大片倒伏、脱落，炎症细胞浸润 大鼠鼻黏膜组织中ROS水平均显著下降（P＜0.05）。结
严重，固有层血管扩张，病理评分较空白组显著升高 果见图3。
400 000
200
200 200 a
400 300 000
count 100 count 100 count 100 count 200 荧光强度 200 000 b b

100 000
0 0 0 0 0
6
6
3
4
5
5
5
6
3
3
4
0 10 10 10 10 10 7 0 10 10 10 10 10 7 0 10 10 10 10 10 7 0 10 10 10 10 10 7 空白 模型 YPF+ MF
4
6
3
4
5
FITC-A FITC-A FITC-A FITC-A 组 组 组 组
A.空白组流式细胞图 B.模型组流式细胞图 C. YPF+组流式细胞图 D. MF组流式细胞图 E. ROS水平柱形图（x±s，n＝5）
a：与空白组比较，P＜0.05；b：与模型组比较，P＜0.05
图3 各组大鼠鼻黏膜组织中的ROS水平
中国药房 2023年第34卷第10期 China Pharmacy 2023 Vol. 34 No. 10 · 1207 ·