Page 48 - 中国药房2023年10期
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心肌缺血，即心脏血管阻塞，是全球最普遍的心血                          氯化三苯基四氮唑（TTC）染色试剂盒（货号 R30127，上
          管疾病死亡原因之一。伴随着血流恢复的再灌注治疗                             海源叶生物科技有限公司）；苏木素-伊红染色液（货号
          是有效恢复梗死的治疗方法，且对短时间内缺血的疗效                            AG1120，上海吉至生化科技有限公司）；TUNEL 凋亡检
                [1]
          会更好 。然而，再灌注也会导致缺血性心肌损伤，即心                           测试剂盒（货号T2130-50T，北京索莱宝科技有限公司）；
          肌缺血再灌注损伤（myocardial ischemia-reperfusion in‐        HIF-1α、BNIP3、微 管 相 关 蛋 白 轻 链 3（microtubule-
                    [2]
          jury，MIRI） 。因此寻找减轻 MIRI 的方法对治疗心血                    associated protein light chain 3，LC3）、肌球蛋白样 Bcl-2
          管疾病具有重要意义。已知MIRI的标志包括缺氧诱导                           结合蛋白（myosin-like Bcl-2 interacting protein，Beclin1）
          因 子 1α（hypoxia-inducible  factor-1α，HIF-1α）增 加 。    抗 体（货 号 分 别 为 ab179483、ab109362、ab128025、
          HIF-1α 是细胞缺氧反应的主要调节因子，与细胞增殖、                        ab207612，英国 Abcam 公司）；山羊抗兔 IgG（H+L）二抗
          血管生成及肿瘤转移等相关下游靶基因表达的关系密                            （货号 FNab09778，武汉菲恩生物科技有限公司）；水为
          切，还可调节一些促凋亡基因的表达               [3―4] 。B细胞淋巴瘤        焦碳酸二乙酯处理水[货号 10601ES60，翌圣生物科技
          2（B-cell lymphoma-2，Bcl-2）/腺病毒 E1B 相互作用蛋白          （上海）股份有限公司]。
          3（adenovirus E1B interacting protein 3，BNIP3）是 Bcl-2  1.3 动物
          蛋白家族中由缺氧诱导的促凋亡成员，BNIP3也是HIF-                            SD 雄性大鼠 150 只，8 周龄，体质量为 200～220 g，
                     [5]
          1α的靶基因 。已有研究证明，HIF-1α/BNIP3信号通路                     购于江苏华创信诺医药科技有限公司，生产许可证号为
                               [6]
          诱导的自噬可改善 MIRI 。落新妇苷（astilbin，AST）是                  SCXK（苏）2020-0009。所有大鼠均在温度 25 ℃、相对
          从落新妇的根茎中提取出来的一种天然类黄酮化合物，                            湿度 60% 的环境中饲养，饲养期间自由饮食，光照和黑
          因具有抗氧化、抗炎、抗肿瘤等药理活性而被广泛使                             暗环境 12 h 交替。本实验方案经首都医科大学附属北
            [7]
          用 。已知AST可以通过抑制Toll样受体4/髓样分化因                        京世纪坛医院科学研究伦理委员会批准[批准号为
          子 88/核转录因子-κB 通路来减轻脑部缺血再灌注损                         sjtky11-1x-2022（15）]。
            [8]
          伤 ，但对 MIRI 的影响以及调节机制尚不清楚。基于                         2 方法
          此，本研究探讨了AST对大鼠MIRI的影响及机制，旨在                         2.1 MIRI模型的建立
          为MIRI的临床治疗提供参考。                                         参照相关文献 方法制备 MIRI 模型大鼠。先腹腔
                                                                              [9]
          1 材料                                                注射 1% 戊巴比妥钠（40 mg/kg）麻醉大鼠，然后将大鼠
          1.1 主要仪器                                            气管插管连接到呼吸机（呼吸比3∶1，潮气量2 mL，频率
              本研究所用主要仪器包括 AIView V10 型多参数心                    每分钟50次）。将大鼠固定，监测心电图。在胸骨左侧
          电图监测仪（深圳市科瑞康实业有限公司）、BX53 型半                         3～4肋骨处解剖胸腔，露出心脏，然后用6-0缝合线结扎
          电动荧光显微镜[仪景通光学科技（上海）有限公司]、                           左前降冠状动脉，阻断血流。根据心电图显示，以ST段
          ChemiDoc MP E-Gel 全能型荧光成像系统[伯乐生命医                   抬高表示缺血成功；30 min后取出缝合线恢复血液灌注
          学产品（上海）有限公司]、HT7800型透射电子显微镜[日                       2 h，升高的 ST 段下降一半及以上、T 波恢复，表示再灌
          立科学仪器（北京）有限公司]、ESO 5D Mark Ⅳ型数码                     注成功。假手术组大鼠穿线后冠状动脉未结扎，其他操
          相机[佳能（中国）有限公司]。                                     作相同。
          1.2 主要药品与试剂                                         2.2 分组和给药
              本研究所用主要药品与试剂包括AST原料药（货号                             将大鼠随机分为假手术组、模型组、阳性对照组和
          TC1039，纯度 98%，四川精萃天成药物科技有限公司），                      AST 低、高剂量组以及 AST 高剂量+HIF-1α 抑制剂组，
          复方丹参片（批号20220324，规格相当于饮片0.6 g，北京                    每组 25 只。除假手术组外，其余各组大鼠均按“2.1”项
          顺鑫祥云药业有限责任公司），HIF-1α 抑制剂 2-甲氧基                      下方法建立 MIRI 模型。造模成功后，阳性对照组大鼠
          雌二醇（2-Methoxyestradiol，2ME2，货号HY-12033，美国           灌胃240 mg/kg复方丹参片 ；AST低、高剂量组大鼠分
                                                                                     [10]
          Med Chem Express公司）；心肌肌钙蛋白I（cardiac tropo‐          别灌胃30、90 mg/kg AST ；AST高剂量+HIF-1α抑制剂
                                                                                   [11]
          nin I，cTnI）、肿瘤坏死因子 α（tumor necrosis factor α，       组大鼠先灌胃 90 mg/kg AST 后，再腹腔注射 15 mg/kg
                                                                   [12]
          TNF-α）、白细胞介素6（interleukin 6，IL-6）ELISA试剂盒           2ME2 ；假手术组和模型组大鼠均灌胃等体积的生理
         （货号分别为ELISA-1178、ELISA-1100、ELISA-1092，北             盐水，每天1次，持续28 d。
          京凯诗源生物科技有限公司）；肌酸激酶同工酶（creatine                      2.3 血清中cTnI、CK-MB含量测定
          kinase isoenzymes，CK-MB）、超氧化物歧化酶（superox‐               末次给药 12 h 后，将所有大鼠用 1% 戊巴比妥钠麻
          ide dismutase，SOD）、丙二醛（malondialdehyde，MDA）检        醉后，腹主动脉采血，于4 ℃下3 000×g离心15 min，收
          测 试 剂 盒 [ 货 号 分 别 为 BKBZ20、EKRA1034、                集上清液。根据ELISA试剂盒说明书操作，测定血清中
          EKRA1059，迪信泰检测科技（北京）有限公司]；2，3，5-                    cTnI、CK-MB含量。


          · 1194 ·    China Pharmacy  2023 Vol. 34  No. 10                            中国药房  2023年第34卷第10期
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