Page 80 - 《中国药房》2023年9期
P. 80

group. A  total  of  18  differential  metabolites （such  as  phenylalanine，  taurine，  norvaline，  methionine）  and  4  important  amino  acid
          metabolic  pathways （L-phenylalanine，  tyrosine  and  tryptophan  biosynthesis；  taurine  and  hypotaurine  metabolism；  L-phenylalanine
          metabolism；  cysteine  and  methionine  metabolism）  were  identified  through  metabolomics  analysis.  CONCLUSIONS  Compound
          zaoren  granules  can  normalize  the  disordered  metabolism  in  vivo  by  regulating  differential  metabolites  such  as  phenylalanine，
          taurine， and four amino acid metabolic pathways， so as to improve insomnia.
          KEYWORDS     Compound zaoren granules； insomnia； serum metabonomics； metabolic pathway； UHPLC-Q-TOF-MS/MS



              失眠是常见的睡眠问题之一。2015 年全国睡眠指                        20210912，规格0.4 g/粒）购自贵州大隆药业有限责任公
          数报告显示，世界上平均失眠率为 27%，而中国人的失                          司；艾司唑仑片（批号 20210928，规格 1 mg）购自常州四
                                       [1]
          眠率达31.2%，高于世界平均水平 。长期的失眠不但会                         药制药有限公司；甲醇、乙腈为质谱级，甲酸为色谱级，
          降低生活质量，还会引起精神及身体上的疾病。近年                             水为屈臣氏蒸馏水。
          来，中医药在治疗失眠领域取得了许多新进展，通过辨                            1.3 动物
          证论治实现了个体化的治疗。相比化学药治疗，中药治                                本研究所用的动物为 SPF 级雄性 ICR 小鼠，共 49
          疗失眠毒副作用小、疗效稳定，且不会导致药物依赖，容                           只，体质量为 18～22 g，由斯贝福（北京）生物技术有限
                          [2]
          易被广大患者接受 。复方枣仁颗粒（原梦香饮）是江苏                           公司提供，实验动物生产许可证号为 SCXK（京）2019-
          省中医院全国名中医刘沈林教授根据其 40 余年临床经                          0010。饲养条件为温度（24±2） ℃、相对湿度 50%～
          验得到的治疗失眠的经验方，由酸枣仁汤合甘麦大枣汤                            65%，分笼饲养，饲养期间自由摄食、饮水。动物实验经
          的主要药味为基础方加减而来，包括酸枣仁、甘草、茯                            南京中医药大学附属医院伦理委员会批准（批准号为
          苓、大枣、百合、龙眼肉及淮小麦7味中药组方。复方枣                           2022DW-25-01）。
          仁颗粒临床用以治疗轻中度失眠疗效确切，但是其代谢                            2 方法
          途径尚不明确。研究其代谢途径和代谢过程中成分的                             2.1 复方枣仁颗粒改善失眠的药效学考察
          变化对其合理应用有重要意义。                                      2.1.1 动物分组、造模与给药 将49只小鼠随机分为空
              代谢组学是通过多元统计分析机体代谢物整体变                           白组、模型组、阳性对照组 1（艾司唑仑片 0.5 mg/kg，为
          化的一种手段，其不仅可以研究中药复方的药效成分在                            12倍临床等效剂量）、阳性对照组2（舒眠胶囊0.6 g/kg，为
          体内的代谢情况，还有助于揭示药物作用于机体的代谢                            12 倍临床等效剂量）和复方枣仁颗粒低、中、高剂量组
              [3]
          机制 。超高效液相色谱-飞行时间质谱（UPLC-Q-TOF-                     （2.5、5、10 g/kg，分别为3、6、12倍临床等效剂量），每组7
          MS/MS）技术具有灵敏度高、分辨率高、准确性高、扫面                         只。除空白组外，其余各组小鼠通过慢性不可预见性温
          范围广等优点，在鉴定中能够得到化合物的准确分子信                            和应激刺激联合 PCPA 建立小鼠失眠模型：每日随机接
          息，为中药复方成分及代谢组学检测分析提供了良好的                            受不同的刺激方式，包括强迫游泳、湿笼、禁食、禁水、重
          技术手段    [4―5] 。本研究通过慢性不可预见性温和应激刺                    复光照刺激、昼夜颠倒，连续2 d内不使用同一种刺激方
          激联合对氯苯丙氨酸（4-chloro-DL-phenylacetic acid，            式，持续7 d；第8天开始，每天腹腔注射PCPA 400 mg/kg，
          PCPA）构建小鼠失眠模型，然后通过小鼠行为学实验、                          连续3 d。小鼠昼夜节律消失、易怒、毛发粗糙表明造模
                                                                  [6]
          组织病理形态学评价并结合血清代谢组学分析，初步阐                            成功 。空白组小鼠不接受刺激，但在第 8 天开始连续
          释复方枣仁颗粒改善失眠的药效及其可能的作用机制，                            3 d腹腔注射等体积生理盐水。第11天开始各给药组小
          为该方的进一步应用提供科学依据。                                    鼠灌胃相应药物，空白组、模型组小鼠灌胃等体积水；每
          1 材料                                                日1次，连续7 d。
          1.1 主要仪器                                            2.1.2 旷场实验 各组小鼠在末次给药的前2 d进行旷
              本研究所用的主要仪器有 ExionLC 型 UPLC 仪和                   场实验。在旷场实验当天给药 1 h 后，使用摄像机记录
          Q-TOF 5600 型高分辨质谱仪（美国 AB SCIEX 公司）、                 各小鼠在箱内的运动情况，记录时长 5 min。之后使用
                     +
          Heraeus Megafuge 8R 型高速冷冻离心机（美国 Thermo              SuperMaze动物行为分析系统对各组小鼠的行动轨迹进
          Fisher Scientific 公司）、CPA225D 型电子天平（德国 Sar‐         行分析（将每个旷场区域划分为等分的九宫格，且规定
          torius公司）、ZH-OFT型小鼠旷场实验箱（安徽正华生物                     中间一格作为中央区域），记录总行进距离、总静息时间
          仪器设备有限公司）、SuperMaze 动物行为分析系统（上                      比例、中央区域进入次数、中央区域移动距离。
          海欣软信息科技有限公司）。                                       2.1.3 戊巴比妥钠协同催眠实验 各组小鼠末次给药
          1.2 主要药品与试剂                                         的前 1 d 进行戊巴比妥钠协同催眠实验。在当天给药
              复方枣仁颗粒（批号20200927，规格10 g/袋）由江苏                  1 h后，各组小鼠腹腔注射戊巴比妥钠（50 mg/kg）进行催
          省中医院制备；PCPA（批号 C13193186，纯度＞98%）购                   眠（剂量根据预实验结果设置）。以小鼠翻正反射消失
          自上海麦克林生化科技有限公司；舒眠胶囊（批号                              1 min为开始睡眠时间，以30 s内小鼠翻正反射出现3次


          · 1094 ·    China Pharmacy  2023 Vol. 34  No. 9                              中国药房  2023年第34卷第9期
   75   76   77   78   79   80   81   82   83   84   85