Page 36 - 《中国药房》2023年9期
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caspase-1  and  GSDMD  in  myocardial  tissues  and  protein-positive  cell  score  were  measured  by  Western  blot  assay  and
          immunohistochemistry.  RESULTS  Compared  with  control  group，  the  myocardial  cells  in  the  model  group  were  enlarged，  the
          arrangement of myocardial fibers was disordered， the matrix metabolism was significantly increased， the CVF in myocardial tissue
          was  significantly  increased，  and  the  mRNA  and  protein  expression  levels  of  Col  Ⅰ ，  α -SMA，  TLR4，  NLRP3，  caspase-1  and
          GSDMD  were  elevated  and  protein-positive  cell  score  was  increased  significantly （P＜0.01）.  Compared  with  model  group，  the
          myocardial  cell  morphology  was  clearer，  myocardial  fibrosis  was  alleviated，  and  the  levels  of  the  above  indicators  in  myocardial
          tissue  of  Sal  medium-dose  and  high-dose  groups  had  been  reversed  to  varying  degrees，  especially in  Sal  high-dose  group（P＜0.05
          or  P＜0.01）.  In  addition，  the  Sal  low-dose  group  also  reversed  some  fibrosis  and  pyroptosis-related  indicators  to  some  extent.
          CONCLUSIONS  Sal  can  significantly  prevent  the  occurrence  and  development  of  myocardial  fibrosis，  and  the  mechanism  of
          action may be related to the inhibition of TLR4-mediated pyroptosis pathway in myocardial tissue.
          KEYWORDS     salidroside； myocardial fibrosis； pyroptosis； Toll-like receptor 4； NOD-like receptor pyrin domain containing 3



              目前，心血管疾病仍是造成人类死亡的主要原因之                          质量（20±2） g，购自北京斯贝福生物技术有限公司，生
          一，2019年全球约有1 860万人因心血管疾病死亡 。大                       产许可证号为 SCXK（京）2019-0010。小鼠饲养于南京
                                                     [1]
          多数心血管疾病的病因涉及心肌的病理性重构，而心肌                            中医药大学附属中西医结合医院动物房，许可证号为
          纤维化是导致心肌病理性重构的重要原因之一                     [2―4] 。虽   SYXK（苏）2021-0025。饲养期间环境温度（24±1） ℃，
          然当前心肌纤维化的病因尚未完全明确，但炎症反应在                            相对湿度55%±10%，小鼠自由进食、饮水。
          心肌纤维化的发生、发展中起着关键作用                   [5―6] 。细胞焦     1.2 主要仪器
          亡是由病原体相关分子或损伤相关分子激活、半胱氨酸                                Heraeus  Megafuge  8R 型 高 速 离 心 机 购 自 美 国
          蛋白酶 1（caspase-1）介导的一种细胞炎性死亡，主要以                     Thermo Fisher Scientific 公司；MS203DU 型电子天平购
          细胞肿胀、细胞膜破裂、NOD 样受体蛋白 3（NOD-like                     自瑞士Mettler-Toledo公司；Research Plus型微量移液器
          receptor pyrin domain containing 3，NLRP3）为代表的炎      购自德国 Eppendorf 公司；Synergy H1 型酶标仪、164-
                                                    [7]
          症小体激活，细胞内容物和炎症介质释放为特征 。细                            5051型双向电泳仪；7500型实时荧光定量PCR扩增仪、
          胞焦亡的发生不仅会引起局部炎症反应，还会加重炎症                            iBright CL750型Western blot显影仪均购自美国Applied
              [7]
          反应 。本课题组前期研究发现，心肌成纤维细胞焦亡                            Biosystems 公 司 ；IX73 型 显 微 镜 购 自 日 本 Olympus
          可加重心肌组织的纤维化            [8―9] ，而 Toll 样受体 4（Toll-like   公司。
          receptor 4，TLR4）作为 NLRP3 的上游调控因子，在焦亡                1.3 主要药物与试剂
          的发生、炎症因子的释放中起着重要作用                    [10―11] ，TLR4/    红景天苷（货号 WZY1006，纯度 98%）购自陕西万
          NLRP3 焦亡通路的激活可加剧心肌纤维化程度 。因                          植源生物科技有限公司；异丙肾上腺素（isoprenaline
                                                    [12]
          此，通过抑制 TLR4 介导的细胞焦亡通路的激活可能起                         hydrochloride，ISO，批号H50020020）购自西南药业股份
          到抑制心肌纤维化的作用。                                        有限公司；戊巴比妥钠（货号P3761）购自美国Sigma公司；
              红景天苷是中药红景天的重要组成成分，目前被证                          苏木素染液、伊红染液（货号分别为PH0516、PH0516）均
          实对纤维化的发生、发展有明显的抑制作用                   [13―14] 。实验   购自福州飞净生物科技有限公司；Masson 染色试剂盒、
          研究显示，在内毒素引起炎症诱导的抑郁模型和巨噬细                            Sirius Red染色试剂盒（货号分别为BP-DL022、BP-DL030）
          胞 RAW264.7 模型中，红景天苷抑制了 TLR4 蛋白的表                    和5%牛血清白蛋白溶液（5%BSA，货号BL-081）均购自
          达及相关炎症因子的释放            [15―16] ；此外，TLR4介导的细胞        南京森贝伽生物科技有限公司 ；TRIzol 试剂（货号
                                                  [17]
          焦亡通路活化与炎症和心肌纤维化密切相关 。但红                             15596026CN）购自美国 Thermo Fisher Scientific 公司；
          景天苷是否能通过 TLR4/NLRP3 焦亡通路抑制心肌组                       RNA 逆转录试剂盒（货号 RR047A）购自日本 Takara 公
          织焦亡，进而改善心肌纤维化目前尚不清楚。本实验使                            司；SYBR Tag 探针试剂盒（货号 QPK-201）购自日本
          用异丙肾上腺素建立小鼠心肌纤维化模型，并使用红景                            Toyobo公司；小鼠Ⅰ型胶原蛋白（collagen type Ⅰ，Col Ⅰ）、
          天苷进行干预，探索红景天苷对小鼠心肌纤维化和焦亡                            α-平滑肌肌动蛋白（α-smooth muscle actin，α-SMA）、TLR4、
          的影响及潜在的作用机制，以期为红景天苷预防心肌纤                            NLRP3、caspase-1、消皮素 D（gasdermin D，GSDMD）、β-
          维化提供实验参考。                                           肌动蛋白（β-actin）的PCR引物均购自生工生物工程（上
          1 材料                                                海）股份有限公司；兔源 Col Ⅰ抗体（批号 14695-1-AP）
          1.1 实验动物                                            购自美国Proteintech公司；RIPA裂解液（批号P0013B）、
              8 周龄成年健康雄性 SPF 级 C57BL/6 小鼠 50 只，体              BCA 蛋白检测试剂盒（批号 P0012）购自上海碧云天生


          · 1054 ·    China Pharmacy  2023 Vol. 34  No. 9                              中国药房  2023年第34卷第9期
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