Page 32 - 《中国药房》2023年9期

备：分别取不同蒸制时间的盐巴戟天样品，参考文献[10] 20、25、30、40 mg/mL），参考文献[11]方法测定样品吸光
方法制备供试品溶液。 度（A）和对照溶液吸光度（A0 ），按照以下公式计算PTIO
2.2.3 不同蒸制时间盐巴戟天中 6 种 Q-marker 成分的 自由基清除率：PTIO 自由基清除率（%）＝（A0－A）/A0×
含量测定结果 不同蒸制时间盐巴戟天样品中 6 种 Q- 100%。采用 GraphPad Prism 软件预测样品的 IC50，详见
marker 成分的含量变化如图 1 所示。盐巴戟天在蒸制 表2。结果显示，巴戟天在蒸制2 h后，其清除PTIO自由
0.5 h 左右开始检测到果果三糖、果果四糖和果果五糖 基的能力较强。
（即Inulo型寡糖），其含量呈先升高后下降趋势，在蒸制 2.3.3 ABTS自由基清除率测定 按照“2.2.2”项方法分
F
5～6 h时最高；1-蔗果三糖、耐斯糖、1 -果呋喃糖基耐斯 别制备不同蒸制时间盐巴戟天的样品溶液（根据预实验
糖（即 Inulin 型寡糖）的含量则呈先升高后下降、然后近 结果，设置每个样品的质量浓度均分别为 1、2、4、6、8、
似平稳的趋势。这表明在一定的高温条件下，随着蒸制时 10、15、20 mg/mL），参考文献[11]方法测定样品的吸光
间的延长，盐巴戟天中高糖链的Inulin型寡糖可能先逐渐 度（A）和对照溶液吸光度（A0 ），按照以下公式计算ABTS
降解为短糖链的Inulin型寡糖或Inulo型寡糖，然后2种类 自由基清除率：ABTS自由基清除率（%）＝（A0－A）/A0×
型的寡糖可能均降解为单糖或二糖等小分子糖类成分。 100%。采用 GraphPad Prism 软件预测样品的 IC50，详见
表2。结果显示，巴戟天在蒸制0.5 h后，其清除ABTS自
100
1-蔗果三糖 由基的能力强于生品，且在蒸制 7 h 时其清除 ABTS 自
80
耐斯糖 由基的能力最强。
（ mg/g ） 60 1 F -果呋喃糖基耐斯糖 2.3.4 羟基自由基清除率测定 按照“2.2.2”项下方法
果果三糖
含量/ 40 果果四糖 分别制备不同蒸制时间盐巴戟天的样品溶液（根据预实
果果五糖 验结果，设置每个样品的质量浓度均分别为 3.33、6.67、
20
13.33、20.00、26.67、33.33 mg/mL）各 2.4 mL，参考文献
0 [12]方法依次加入相应的试剂并测定样品吸光度（A）和
0 1 2 3 4 5 6 7
蒸制时间/h 对照溶液吸光度（A0 ），按照以下公式计算羟基自由基清
图1 盐巴戟天中 6 种 Q-marker 成分含量随蒸制时间 除率：羟基自由基清除率（%）＝（A0－A）/A0×100%。采
的变化趋势（n＝3） 用GraphPad Prism软件预测样品的IC50，详见表2。结果
显示，巴戟天蒸制后清除羟基自由基的能力减弱，这说
2.3 不同蒸制时间盐巴戟天的体外抗氧化活性测定
明蒸制后药材中存在供氢能力的化合物较少。
2.3.1 DPPH自由基清除率测定 按照“2.2.2”项下方法
2.3.5 铁还原/抗氧化能力测定实验 按照“2.2.2”项下
分别制备不同蒸制时间盐巴戟天的样品溶液（根据预实
方法分别制备不同蒸制时间盐巴戟天样品溶液，精密量
验结果，设置每个样品的质量浓度均分别为 2.5、5、10、
取0.6 mL于5 mL离心管中，加入0.6 mL的铁还原/抗氧
12、20、40 mg/mL），参考文献[11]方法测定样品吸光度
化能力（FRAP）工作液和1.8 mL水，充分混合。于37 ℃
（Ai ）和对照溶液吸光度（A0 ），按照公式计算 DPPH 自由
恒温水浴 30 min 后，用紫外-可见分光光度计在 593 nm
基清除率：DPPH 自由基清除率（%）＝（A0－Ai ）/A0×
波长处测定样品吸光度（A）。每份样品重复实验 3 次，
100%。采用 GraphPad Prism 软件预测样品的半数清除
取平均值。以 FeSO4 ·7H2O 为标准物质绘制标准曲线
浓度（IC50 ），详见表 2。结果显示，巴戟天在蒸制 1 h 时，
（根据预实验结果，设置每个样品的质量浓度均分别为
其清除DPPH自由基的能力最强。 100、200、300、400、500、600、800 μmol/L），以吸光度为
表2 盐巴戟天清除各氧化自由基的IC50和铁还原能力 纵坐标（Y）、摩尔浓度为横坐标（X）得到标准曲线方程为
的当量值测定结果（x±s，n＝3） Y＝0.000 4X+0.124 5（R²＝0.999 5）。样品的铁还原能力
IC 50/（mg/mL） FRAP当量值/ 以 FRAP 当量值表示：FRAP 当量值以每克干样品中含
蒸制时间/h
DPPH自由基 PTIO自由基 ABTS自由基 羟基自由基 （μmoL/g） FeSO4的微摩尔数表示（μmoL/g），详见表2。结果显示，
0 11.439±0.006 210.304±7.301 9.533±0.015 16.591±0.020 6.353±0.382 3+
0.5 2.962±0.027 216.597±29.329 4.634±0.026 17.762±0.099 5.692±0.125 巴戟天蒸制1 h后，其对Fe 的还原能力逐渐增强。
1 2.503±0.019 639.903±0.577 3.353±0.021 19.053±0.092 14.266±0.072 2.4 盐巴戟天的最佳蒸制时间
2 10.952±0.055 46.932±0.966 3.450±0.006 17.889±0.075 14.518±0.072 2.4.1 以 6 种 Q-marker 成分含量为指标筛选盐巴戟天
3 12.740±0.090 34.144±0.347 2.829±0.007 17.564±0.107 14.403±0.072 的最佳蒸制时间 以6种Q-marker成分含量为指标，利
4 10.039±0.071 23.630±0.130 4.822±0.040 17.762±0.085 18.311±0.000
5 8.024±0.057 15.878±0.047 4.033±0.020 16.973±0.067 20.228±0.072 用灰色关联度与熵权逼近理想解排序（technique for order
6 6.528±0.050 31.971±0.191 3.330±0.011 18.597±0.105 19.352±0.072 preference by similarity to an ideal solution，TOPSIS）-融
7 5.958±0.049 24.214±0.132 2.742±0.008 19.291±0.130 21.770±0.072 [13]
合模型法对盐巴戟天的最佳蒸制时间进行初筛 。结
2.3.2 PTIO 自由基清除率测定 按照“2.2.2”项下方法 果显示，经熵权法计算得出 ，盐巴戟天中1-蔗果三糖、
[13]
F
分别制备不同蒸制时间盐巴戟天的样品溶液（根据预实 耐斯糖、1 -果呋喃糖基耐斯糖、果果三糖、果果四糖和果
验结果，设置每个样品的质量浓度均分别为 5、10、15、 果五糖的权重分别为 0.059、0.080、0.126、0.063、0.077、

· 1050 · China Pharmacy 2023 Vol. 34 No. 9 中国药房 2023年第34卷第9期